Файл: Предмет биологии в мед. Вузе. Биология как одна из теоретических основ медицины, ее задачи, объект и методы исследования. Биологические науки.doc
ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 10.04.2024
Просмотров: 102
Скачиваний: 0
ВНИМАНИЕ! Если данный файл нарушает Ваши авторские права, то обязательно сообщите нам.
Транскрипция состоит из стадий инициации, элонгации и терминации.
Инициация транскрипции — сложный процесс, зависящий от последовательности ДНК вблизи транскрибируемой последовательности (а у эукариот также и от более далеких участков генома — энхансеров и сайленсеров) и от наличия или отсутствия различных белковых факторов.
Элонгация транскрипции
Момент перехода РНК-полимеразы от инициации транскрипции к элонгации точно не определен. Три основных биохимических события характеризуют этот переход в случае РНК-полимеразы кишечной палочки: отделение сигма-фактора, первая транслокация молекулы фермента вдоль матрицы и сильная стабилизация транскрипционного комплекса, который кроме РНК-полимеразы включает растущую цепь РНК и транскрибируемую ДНК. Эти же явления характерны и для РНК-полимераз эукариот. Переход от инициации к элонгации сопровождается разрывом связей между ферментом, промотором, факторами инициации транскрипции, а в ряде случаев — переходом РНК-полимеразы в состояние компетентности в отношении элонгации (например, фосфорилирование CTD-домена у РНК-полимеразы II). Фаза элонгации заканчивается после освобождения растущего транскрипта и диссоциации фермента от матрицы (терминация).
На стадии элонгации в ДНК расплетено примерно 18 пар нуклеотидов. Примерно 12 нуклеотидов матричной нити ДНК образует гибридную спираль с растущим концом цепи РНК. По мере движения РНК-полимеразы по матрице впереди нее происходит расплетание, а позади — восстановление двойной спирали ДНК. Одновременно освобождается очередное звено растущей цепи РНК из комплекса с матрицей и РНК-полимеразой. Эти перемещения должны сопровождаться относительным вращением РНК-полимеразы и ДНК. Трудно себе представить, как это может происходить в клетке, особенно при транскрипции хроматина. Поэтому не исключено, что для предотвращения такого вращения двигающуюся по ДНК РНК-полимеразу сопровождают топоизомеразы.
Элонгация осуществляется с помощью основных элонгирующих факторов, необходимых, чтобы процесс не останавливался преждевременно[2].
В последнее время появились данные, показывающие, что регуляторные факторы также могут регулировать элонгацию. РНК-полимераза в процессе элонгации делает паузы на определенных участках гена. Особенно четко это видно при низких концентрациях субстратов. В некоторых участках матрицы длительные задержки в продвижении РНК-полимеразы, т. н. паузы, наблюдаются даже при оптимальных концентрациях субстратов. Продолжительность этих пауз может контролироваться факторами элонгации.
Терминация
У бактерий есть два механизма терминации транскрипции:
ро-зависимый механизм, при котором белок Rho (ро) дестабилизирует водородные связи между матрицей ДНК и мРНК, высвобождая молекулу РНК.
ро-независимый, при котором транскрипция останавливается, когда только что синтезированная молекула РНК формирует стебель-петлю, за которой расположено несколько урацилов (…УУУУ), что приводит к отсоединению молекулы РНК от матрицы ДНК.
Терминация транскрипции у эукариот менее изучена. Она завершается разрезанием РНК, после чего к её 3' концу фермент добавляет несколько аденинов (…АААА), от числа которых зависит стабильность данного транскрипт.
Транскрипционные фабрики
Существует ряд экспериментальных данных, свидетельствующих о том, что транскрипция осуществляется в так называемых транскрипционных фабриках: огромных, по некоторым оценкам, до 10 МДа комплексах, которые содержат около 8 РНК-полимераз II и компоненты последующего процессинга и сплайсинга, а также корректирования новосинтезированного транскрипта[4]. В ядре клетки происходит постоянный обмен между пулами растворимой и задействованной РНК-полимеразы. Активная РНК-полимераза задействована в таком комплексе, который в свою очередь является структурной организовывающей компактизацию хроматина единицей. Последние данные[5] свидетельствуют о том, что транскрипционные фабрики существуют и в отсутствие транскрипции, они фиксированы в клетке (пока не ясно, взаимодействуют ли они с ядерным матриксом клетки или нет) и представляют собой независимый ядерный субкомпартмент. Комплекс транскрипционных фабрик, содержащих РНК полимеразу I, II или III, был проанализирован с помощью масс-спектрометрии.
Связь между геном и белком, структура которого определяется структурой гена впервые была сформулирована в виде гипотезы "1 ген - 1 фермент" Бидлом и Татумом.
24 вопр
Регуляция экспрессии генов у прокариот
Изучение регуляции генной активности у прокариот привело французских
микробиологов Ф. Жакоба и Ж. Моно к созданию (1961) оперонной модели
регуляции транскрипции. Оперон — это тесно связанная последовательность
структурных генов, определяющих синтез группы белков, которые участвуют в
одной цепи биохимических преобразований. Например, это могут быть гены,
которые детерминируют синтез ферментов, участвующих в метаболизме какого-
либо вещества или в синтезе какого-то компонента клетки. Оперонная модель
регуляции экспрессии генов предполагает наличие единой системы регуляции у
таких объединенных в один оперон структурных генов, имеющих общий промотор
и оператор.Особенностью прокариот является транскрибирование мРНК со всех
структурных генов оперона в виде одного полицистронного транскрипта, с которого
в дальнейшем синтезируются отдельные пептиды.
Примером участия генетических и негенетических факторов в регуляции
экспрессии генов у прокариот может служить функционирование лактозного
оперона у кишечной палочки Е. colt. При отсутствии в среде, на которой
выращиваются бактерии, сахара лактозы активный белок-репрессор, синтезируемый
геном-регулятором , взаимодействует с оператором , препятствуя соединению
РНК-полимеразы с промотором и транскрипции структурных генов Z, Y, А.
Появление в среде лактозы инактивирует репрессор, он не соединяется с
оператором, РНК-полимераза взаимодействует с промотором и осуществляет
транскрипцию полицистронной мРНК. Последняя обеспечивает синтез сразу всех
ферментов, участвующих в метаболизме лактозы. Уменьшение содержания лактозы
в результате ее ферментативного расщепления приводит к восстановлению
способности репрессора соединяться с оператором и прекращению транскрипции
генов Z, Y, А.
Таким образом, регуляция экспрессии генов, организованных у прокариот в
опероны, является координированной. Синтез полицистронной мРНК обеспечивает
одинаковый уровень синтеза всех ферментов, участвующих в биохимическом
процессе.
В связи с особенностями организации отдельных генов эукариот и генома в
целом регуляция генной активности у них характеризуется некоторыми отличиями
по сравнению с прокариотами.
У эукариот не установлено оперонной организации генов. Гены,
определяющие синтез ферментов одной цепи биохимических реакций, могут быть
рассеяны в геноме и, очевидно, не имеют, как у прокариот, единой регулирующей
системы (ген-регулятор, оператор, промотор). В связи с этим синтезируемые мРНК
у эукариот моноцистронны, т.е. являются матрицами для отдельных пептидных
цепей. В настоящее время механизмы регуляции и координации активности
эукариотических генов интенсивно изучаются. Установлено, что их
функционирование несомненно подчиняется регуляторным воздействиям, однако
регуляция транскрипции у эукариот является комбинационной, т.е. активность
каждого гена регулируется большим спектром генов-регуляторов (рис. 3.87).
Регуляция экспрессии гена, кодирующего белок Х у эукариот,
двумя регуляторными белками. У многих эукариотических генов, кодирующих белки и транскрибируемых РНК-полимеразой II, в ДНК имеется несколько областей, которые узнаются разными белками-регуляторами. Одной из них является область, расположенная вблизи промотора. Она включает около 100 пар нуклеотидов, в том числе ТАТА-
блок, располагающийся на расстоянии 25 пар нуклеотидов от точки начала
транскрипции. Установлено, что для успешного присоединения РНК-полимеразы II
к промотору необходимо предварительное соединение с ТАТА-блоком особого
белка — фактора транскрипции — с образованием стабильного транскрипционного
комплекса. Именно этот комплекс ДНК с белком узнается РНК-полимеразой II.
Последовательности нуклеотидов, примыкающие к ТАТА-блоку, формируют
требуемый для транскрипции элемент, расположенный перед промотором.
Другая область, играющая важную роль в регуляции активности
эукариотических генов, располагается на большом расстоянии от промотора (до
нескольких тысяч пар нуклеотидов) и называется энхансером (от англ. enhance —
усиливать).
И энхансер, и препромоторный элемент эукариотических генов содержат
серию коротких нуклеотидных последовательностей, которые связываются с
соответствующими регуляторными белками. В результате взаимодействия этих
белков происходит включение или выключение генов.
Особенностью регуляции экспрессии эукариотических генов является также
существование белков-регуляторов, которые способны контролировать
транскрипцию многих генов, кодирующих, возможно, другие белки-регуляторы. В
связи с этим некоторые (главные) белки-регуляторы обладают координирующим
влиянием на активность многих генов и их действие характеризуется плейотропным
эффектом (рис. 3.88). Примером может служить существование белка, который
активирует транскрипцию нескольких специфических генов, определяющих
дифференцировку предшественников жировых клеток.
Регуляция экспрессии многих генов эукариот
одним белком-регулятором
Ввиду того что в геноме эукариот имеется много избыточной ДНК, а в каждой
клетке организма транскрибируется всего 7—10% генов, логично предположение о
том, что у них преобладает позитивный генетический контроль, при котором
активация небольшой части генома оказывается более экономичной, нежели
репрессия основной массы генов.
Несомненной особенностью регуляции транскрипции у эукариот является
подчиненность этих процессов регулирующим влияниям со стороны гормонов
организма. Последние часто играют роль индукторов транскрипции. Так, некоторые
стероидные гормоны обратимо связываются особыми белками-рецепторами,
образуя с ними комплексы. Активированный гормоном рецептор приобретает
способность соединяться со специфическими участками хроматина, ответственными
за регуляцию активности генов, в которых рецепторы узнают определенные
последовательности ДНК.
Специфичность регулирующего воздействия гормона на транскрипцию
обусловлена не только природой самого гормона, но и природой клетки-мишени,
синтезирующей специфический белок-рецептор, который влияет на транскрипцию
определенного для данной клетки набора генов. Примером участия гормонов в
регуляции активности определенных генов может служить влияние тестостерона на
развитие тканей организма по мужскому типу при наличии специфического белка-
рецептора. Отсутствие последнего при мутации соответствующего гена не дает
возможности гормону проникнуть в ядра клеток-мишеней и обеспечить включение
определенного набора генов: развивается синдром тестикулярной феминизации, или
синдром Морриса .
Следующая особенность регуляции генной активности у эукариот связана с
образованием стойкого комплекса ДНК с белками — хроматина (см. разд. 3.5.2.2).
Ведущая роль в компактизации ДНК принадлежит гистонам, поэтому они,
несомненно, участвуют и в процессах регуляции генной активности (см. разд. 3.5.4).
Непременным условием для осуществления транскрипции у эукариот является
предварительная декомпактизация хроматина на соответствующем участке, где
временно утрачивается связь с Hi-гистонами и несколько ослабляется связь с
нуклеосомными гистонами. Правда, нуклеосомная организация хроматина не
утрачивается даже в ходе транскрипции, однако контакт ДНК и негистоновых
белков становится возможным и происходит дерепрессия гена.
Отличительной особенностью регуляции экспрессии генов у эукариот
является возможность ее осуществления не только на стадии транскрипции, но и на