ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 08.02.2024
Просмотров: 5
Скачиваний: 0
ВНИМАНИЕ! Если данный файл нарушает Ваши авторские права, то обязательно сообщите нам.
ТЕМА №7: Оценка, селекция, отбор гамет и эмбрионов
ЦЕЛЬ: Изучить шкалу оценки, принципами селекции и отбора гамет и эмбрионов.
Рекомендуемая литература:
1. Сокова О.Т. Биотехнологии животных. Учебно-методическое пособие. Алматы: CyberSmith, 2019.-188 ст.
-
Лебедько Е. Я., Катмаков П. С., Бушов А. В., Гавриленко В. П. Биотехнология в животноводстве . Учебное пособие для СПО. Издательство "Лань", 2021. – 322с. -
Лебедько Е. Я., Катмаков П. С., Бушов А. В., Гавриленко В. П. Биотехнология в животноводстве. Учебник. – Санкт – Петербург: Лань, 2020. – 160с.
4. Полянцев, Н.И. Акушерство, гинекология и биотехника размножения животных /Н.И. Полянцев, А.И Афанасьев.- Изд-во «Лань», 2012.- 400 с.
Объект изучения: Шкала оценки гамет и эмбрионов.
Иллюстрационный материал:
1. Таблица - шкалы для оценки гамет и эмбрионов.
2. Рисунки - сперма, фолликулы; эмбрионы на разных стадиях предимплантационного развития.
Краткие методические указания. Занятия проходят в аудитории кафедры. Студенты с помощью рисунков, таблиц и схем изучают теоретические основы клеточной селекции. Для закрепления изучаемого материала студенты в условиях аудитории выполняют задания.
Крупный рогатый скот представляет вид животных, у которых рождается в основном одиночное потомство. Двойни рождаются в 2-3% случаев, тройни - 1%. При нормальном физиологическом состоянии организма и хорошо организованной племенной работе корова каждый год приносит по одному теленку. Продолжительность эстрального цикла составляет от 19 до 22 дней. На цикл приходится лишь одна созревшая и овулированная яйцеклетка, хотя яичники крупного рогатого скота включают от 100 до 200 тыс. потенциальных яйцеклеток. Следовательно, генетический потенциал значительно превышает индивидуальную пожизненную плодовитость, которая выражается в воспроизведении 3-5 телят. Ограниченное потомство самок снижает прогресс в разведении крупного рогатого скота.
Для проведения эмбриокультуральных исследований гаметы обязательно подвергаются оценке. Оценка гамет сводится к определению их биологической полноценности.
Под биологической полноценностью гамет понимают их способность осуществить оплодотворение с целью зарождения нового индивидуума. Оценку гамет производят в следующих случаях:
1. При культивировании и оплодотворении in vivo оценивают качество спермы. Ооциты в этом случае не оцениваются. О качестве ооцитов судят по полученным эмбрионам.
2. При культивировании и оплодотворении in vitro.
При этом оценка осуществляется в два этапа:
на первом этапе (при культивировании in vitro) оценивают качество сперматозоидов и ооцитов;
на втором (при оплодотворении in vitro) - оценивают качество полученных зигот до кариогамии.
3. При действии низких температур.
4. При трансплантации эмбрионов.
После вымывания из гениталий суперовулированных самок-доноров, эмбриокулыуральных и эмбриоинженерных исследований, предимплантационные эмбрионы обязательно подвергают оценке с целью определения их биологической полноценности.
Основным и главным показателем биологической полноценности эмбрионов является временная последовательность морфологических событий при их развитии. Поэтому биологическая полноценность эмбрионов выражается соответствием, во-первых, морфологических особенностей по определенным стадиям развития эмбриона и, во-вторых, стадиями развития возрасту эмбриона.
При оценке морфологических особенностей учитывают следующие основные признаки:
1) форма эмбриона;
Рис. 1. Схема дробления и образования бластоцисты млекопитающих: А – полное асинхронное дробление зиготы, стадии 2 и 4 бластомеров; Б – обрастание светлыми клетками темных (морула); В – образование бластоцисты, формирование полости, обособление темных клеток внутренней клеточной массы от светлых - наружной клеточной массы - трофобласта; 1 – внутренняя клеточная масса, 2 – трофобласт
2) целостность зоны пеллюцида и прозрачность периветеллинового пространства;
3) формы, размеры и равномерность развития бластомеров, и их распределение внутри зоны пеллюцида.
При оценке возраста эмбриона учитывают временную последовательность событий при их развитии, которая определяется соответствием либо уровня дробления возрасту от оплодотворения до их извлечения (при вымывании эмбрионов из гениталий самок - доноров), либо с биологическим стандартом развития (при эмбриокультуральных и эмбриоинженерных исследованиях), которая зависит от видовой принадлежности животных.
4. Эмбрионы для пересадки должны быть получены от клинически здоровых коров-доноров в возрасте от 3 лет и старше, осемененных спермой быков-улучшателей.
1. Характеристики
1.1. Эмбрионы, пригодные для пересадки, должны быть в возрасте 7-9 сут и находиться в стадии развития ранней морулы (Мо1, рис.1-4), поздней морулы (Мо2, рис.5-8), ранней бластоцисты (Бл1, рис.9-12) и поздней бластоцисты (Бл2, рис.13-16).
| Эмбрионы, пригодные для пересадки - морула | ||
 Рис.1 - Морула ранняя, отличная |  Рис.2 - Морула ранняя, хорошая |  Рис.3 - Морула ранняя, удовлетворительная. Неравномерные шары дробления. Грануляция в бластомерах |
 Рис.4 - Морула ранняя, условно пригодная. Рыхлые бластомеры |  Рис.5 - Морула поздняя, отличная |  Рис.6 - Морула поздняя, хорошая. Выступающие светлые бластомеры |
 Рис.7 - Морула поздняя, удовлетворительная. Частичный зародыш. Часть бластомеров выступает и разрушена |  Рис.8 - Морула поздняя, условно пригодная. Грануляция значительной части комплекса | |
| Бластоциста | ||
 Рис.9 - Бластоциста ранняя, отличная |  Рис.10 - Бластоциста ранняя, хорошая |  Рис.11 - Бластоциста ранняя, удовлетворительная. Сжатие комплекса, трещина зоны пеллюцида |
 Рис.12 - Бластоциста ранняя, условно пригодная, деформация, сжатие клеток |  Рис.13 - Бластоциста поздняя, отличная |  Рис.14 - Бластоциста поздняя, хорошая |
 Рис.15 - Бластоциста поздняя, удовлетворительная. Сжатие клеточного комплекса, незначительный скол зоны |  Рис.16 - Бластоциста поздняя, условно пригодная. Сжатие клеточного комплекса. Скол зоны пеллюцида | |
1.2. Эмбрионы в зависимости от морфологических показателей подразделяют на "отличные", "хорошие", "удовлетворительные", "условно пригодные" и "плохие" в соответствии с требованиями, указанными в таблице.
| | | | | | |
| Стадия развития эмбриона | Морфологические показатели качества эмбрионов с оценкой | ||||
| | Отличные | Хорошие | Удовлетво-рительные | Условно пригодные | Плохие |
| Морула ранняя (Мо1), Морула поздняя (Мо2) | Зона пеллюцида округлой формы, без трещин и сколов, соединена с цитоплазмой перивителлинового пространства; перивителлиновое пространство без цитоплазматических включений; бластомеры четкие, прозрачные, одинаковой формы и размера, расположены симметрично | Зона пеллюцида округлой формы, без трещин и сколов, соединена с цитоплазмой перивителлинового пространства; в перивителлиновом пространстве наличие гранул и включений; бластомеры расположены ассиметрично, неодинаковые по размеру, немного сжаты | Зона пеллюцида округлой формы или с небольшой деформацией; допускается небольшая трещина или скол; в перивителлиновом пространстве гранулы, включения отдельных бластомеров; бластомеры расположены ассиметрично, немного сжаты и (или) смещены относительно центра, отдельные бластомеры темного цвета, грануляция отдельных бластомеров | Зона пеллюцида округлой формы или деформированная, имеется значительная трещина или скол, частично нарушена связь с цитоплазмой перивителлинового пространства; в перивителлиновом пространстве значительное количество бластомеров; бластомеры смещены относительно центра, связь между отдельными бластомерами отсутствует, пикноз большей части бластомеров, часть бластомеров темного цвета | Зона пеллюцида округлен формы или деформированная, разрыв оболочки с частичным выходом бластомеров клеточного комплекса, нарушена связь с цитоплазмой перивителлинового пространства; перивителлиновое пространство заполнено как отдельными, так и разрушенными бластомерами |
| Бластоциста ранняя (Бл.1) | В стадии раннего бластоциста (Бл.1) наблюдается начало образования трофобласта и эмбриобласта, видна небольшая бластополость. Трофобласт на фоне клеточного комплекса выявляется в виде более яркого просветления | Трофобласт выявляется в виде яркого просветления, смещен относительно центра | Трофобласт трудно различим на фоне клеточного комплекса | ||
| Бластоциста поздняя (Бл.2) | Зона пеллюцида округлой формы, прозрачная без трещин и сколов; перивителлиновое пространство отсутствует; бластополость большая, расширенная, прозрачная; клетки трофобласта четко выражены, расположены в виде полусферической цепочки по внутренней поверхности зоны пеллюцида; эмбриобласт округлой формы в виде компактного скопления клеток | Зона пеллюцида округлой формы; без трещин и сколов; перивителлиновое пространство отсутствует; бластополость большая, расширенная, прозрачная, клетки трофобласта четко выражены; эмбриобласт округлой формы с одной или двумя выделенными клетками клеточного комплекса | Зона пеллюцида округлой формы, прозрачная, допускается незначительная трещина или скол; перивителлиновое пространство отсутствует, бластополость большая, расширенная, прозрачная; клетки трофобласта четко выражены, эмбриополость округлой формы, компактная с выделенными клетками от клеточного комплекса | Зона пеллюцида округлой формы или деформированная, имеется значительная трещина или скол; перивителлиновое пространство отсутствует, бластополость большая, расширенная с незначительными цитоплазматическими включениями; клетки трофобласта четко выражены, нарушена связь между отдельными клетками; эмбриобласт деформирован с выделенными клетками клеточного комплекса | Зона пеллюцида деформирована, имеется значительная трещина или скол; бластополость большая, расширенная, затемнена или деформированная с цитоплазматическими включениями; клетки трофобласта могут быть деформированы, связь между отдельными клетками отсутствует; эмбриобласт деформирован, рыхлый, часть клетки разрушена, отсутствует связь у большинства клеток |
1.3. Свежеполученные и подлежащие замораживанию эмбрионы не должны быть контаминированы патогенными и условно-патогенными микроорганизмами, грибами, вирусами и другими микроорганизмами.
Контрольные задания
Задание 1. Оценка гамет и эмбрионов. Изучить методы оценки качества сперматозоидов, фолликулов и эмбрионов обратив особое внимание на методику. Отметить основные преимущества и недостатки применяемых для оценки методов. Изучить все характеристики, которые применяются для оценки качества гамет и эмбрионов. Работу выполнить в следующей последовательности:
1. Изучить шкалу для оценки качества спермы путем оформления таблиц 1., 2.
Таблица 1. Шкала для оценки качества спермы при микроскопическом исследовании
| № | Показатель | Классность | Характеристика |
| | | | |
Таблица 2. Нормальные характеристики семени
| Показатель | Видовая принадлежность | ||
| | Бык | Баран | Хряк |
| | | | |
3. Изучить шкалу для оценки качества эмбрионов животных путем заполнения таблицы 3.
Таблица 3. Шкала для оценки качества предимплантационных эмбрионов
| № | Эмбрион | Схематическое изображение | Характеристика и особенности | ||||
| Стадия | Возраст | Биогеография | |||||
| | | | | | | ||
Задание 2. Селекция гамет и эмбрионов
Изучить основы клеточной селекции путем раскрытия вопросов, связанных с селекцией и отбором фолликулов, ооцитов, сперматозоидов и эмбрионов посредством заполнения таблицы 4. При заполнении таблицы нужно классифицировать гаметы и эмбрионы на пригодные и не пригодные для использования. Не забывайте, что в одних случаях гаметы и эмбрионы пригодны для работы, а в других - нет.