Файл: 1. Основные этапы развития микробиологии. Работы Л. Пастера, Р. Коха и их значение для развития микробиологии. Значение открытия Д. И. Ивановского. Роль отечественных ученых Н. Ф. Гамалея, П. Ф. Здродовского, А. А.docx
ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 09.02.2024
Просмотров: 43
Скачиваний: 0
ВНИМАНИЕ! Если данный файл нарушает Ваши авторские права, то обязательно сообщите нам.
Этапы окраски по Граму 1. На фиксированный мазок нанести карболово-спиртовой раствор генцианового фиолетового через полоску фильтровальной бумаги. Через 1- 2 минуты ее снять, а краситель слить. 2. Нанести раствор Люголя на 1-2 минуты. 3. Обесцветить этиловым спиртом в течение 30-60 секунд до прекращения отхождения фиолетовых струек красителя. 4. Промыть водой 5. Докрасить водным раствором фуксина в течение 1-2 минут 6. Промыть водой, высушить и микроскопировать. 2 Гр+ бактерии окрашиваются в темно-фиолетовый цвет, а Гр- - в розовокрасный
Метод Циля-Нельсена предназначен для дифференциации кислотоустойчивых бактерий (возбудителей туберкулеза и лепры) от некислотоустойчивых.
Окраска кислотоустойчивых микроорганизмов по методу Циля-Нильсена. 1. на фиксированный мазок нанести карболовый раствор фуксина (в фуксин добавляют карболовую кислоту для разрыхления кислотоустойчивой стенки и улучшения тинкториальных свойств) через полоску фильтровальной бумаги и подогреть 3-5 минут до появления паров. 2. снять бумагу, промыть мазок водой 3. для обесцвечивания 2-3 раза окунуть в емкость с 5% серной кислотой 4. промыть водой 5. докрасить мазок водным раствором метиленового синего в течение 3-5 минут 6. промыть водой, высушить и микроскопировать. Кислотоустойчивые микроорганизмы окрашиваются в рубиново-красный цвет, кислотоподатливые – в синий цвет. Кислотоустойчивость обусловлена строением клеточной стенки с повышенным содержанием липидов, воска, оксикислот (миколовой кислоты). Кислотоустойчивые бактерии – микроорганизмы, обладающие выраженной резистентностью к 5-10% растворам кислот, щелочей, спирту.
Окраска спор по методу Ожешко 1. на нефиксированный мазок нанести 0,5 % соляную кислоту (для разрыхления оболочки споры) и подогреть 2-3 минуты 2. кислоту слить, промыть водой, просушить, зафиксировать мазок в пламени. 3. окрасить мазок по методу Циля –Нильсена. Споры окрашиваются в рубиново-красный цвет, вегетативные формы в синий цвет
Окраска включений (зёрен волютина) по методу Нейссера 1. на фиксированный мазок нанести ацетат синьки Нейссера на 2-3 минуты 2. добавить раствор Люголя на 10-30 секунд 3. промыть водой 4. докрасить водным раствором везувина или хризоидина в течение 0,5-1 минуты 5. промыть водой, высушить и микроскопировать Зерна волютина представляют собой включения полифосфатов и имеют щелочную реакцию и окрашиваются ацетатом синьки в темно-синий цвет. Цитоплазма клетки, обладающая кислой реакцией, воспринимает щелочной краситель везувин и окрашивается в желтый цвет.
Обнаружение капсул по методу Бурри-Гинса 1. Приготовить тушевой препарат по Бурри. Для этого смешать каплю взвеси микробных клеток с каплей туши и при помощи стекла сделать мазок (так же как готовят мазок из крови), высушить, зафиксировать. 2. На мазок нанести водный раствор фуксина на 1-2 минуты 3. Промыть водой, высушить на воздухе и микроскопировать Бактерии окрашиваются в красный цвет. Капсулы не окрашиваются, остаются прозрачными и контрастно выделяются на черно-розовом фоне.
Окраска по Романовскому-Гимзе Краска состоит из метиленового синего, эозина и азура. На мазок нанеси рабочий раствор красителя (2 капли красителя на 1 мл д.в.) на 10-30 минут. Препарат промыть водой, просушить на воздухе и промикроскопировать. По Романовскому-Гимзе эритроциты крови окрашиваются в розовый цвет, ядра лейкоцитов – в фиолетовый, трепонемы - в бледно-розовый цвет, лептоспиры – в розово-сиреневый, боррелии – в фиолетовый.
5 Морфология и ультраструктура бактериальной клетки. Химический состав микробной клетки. Основные отличия прокариот и эукариот. Протопласты, сферопласты, L-формы бактерий
Морфология микроорганизмов. Бактерии имеют микроскопические размеры, большинство в пределах разрешающей способности светооптической микроскопии (не превышают 0,2 мкм), однако существуют и более мелкие формы. По форме клеток бактерии подразделяют на шаровидные, палочковидные и извитые. Шаровидные бактерии – кокки (coccus – зерно) имеют правильную сферическую или эллипсоидную форму. Кокки могут образовывать характерные скопления, что обусловлено особенностями их деления, и способностью дочерних клеток сохранять связь друг с другом после деления. Кокки могут располагаться беспорядочно – микрококки, парами – диплококки, в виде цепочек из 3 и более кокков – стрептококки, в виде пакетов, состоящих из 4 или 8 кокков – тетракокки и сарцины соответственно, и в виде скоплений, напоминающих гроздь винограда – стафилококки.
Палочковидные бактерии – различаются по размерам, форме клеток и их концов, а также по расположению. Они могут быть тонкими, утолщенными на концах либо с обрубленными концами. Они располагаются в виде одиночных клеток, парами – диплобактерии, в виде цепочек – стрептобактерии. Извитые формы бактерий представлены изогнутыми палочками, имеющими ¼ - ½ завитка – вибрионы или несколько (1-3) завитков – спириллы, и спиралевидными бактериями – спирохеты
ГРАМ+: «спиртоустойчивая» клеточная стенка, содержащая около 40 слоев пептидогликана и тейхоевые кислоты - полимеры известного состава; опорная, транспортная, рецепторная, антигенная функция, устойчивость к обесцвечиванию спиртом в теч. 40 сек.
ГРАМ-: «спирточуствительная» клеточная стенка, содержащая около 1-4 слоя пептидогликана, липопротеины, наружную мембрану, состоящую из фосфолипидов, ЛПС комплекса белков - поринов; опорная, транспортная, рецепторная, антигенная (О и К антигены) функция, обесцвечивание спиртом в течении 40 сек.
Постоянные структуры: Клеточная стенка, Цитоплазматическая мембрана, Цитоплазма, Рибосомы, Мезосомы, Нуклеоид
Непостоянные структуры – ЗАВИСЯТ ОТ УСЛОВИЙ СУЩЕСТВОВАНИЯ БАКТЕРИИ: Капсула, Жгутики, Споры, Включения, Пили, Плазмиды
Химический состав микробов:
-
вода - 80—90 % от общей массы; -
сухой остаток –10 % от массы микробной клетки -
ВОДА: Вода в клетке находится в свободном или связанном состоянии. Она выполняет механическую роль в обеспечении тургора. Участвует в гидролитических реакциях. Удаление воды из клетки путем высушивания приводит к приостановке процессов метаболизма, прекращению размножения. -
БЕЛКИ: Белки являются ферментами. Так же белки являются составной частью клетки, входят в состав: цитоплазматической мембраны (ЦПМ) и ее производных, клеточной стенки, жгутиков, спор и некоторых капсул. Некоторые бактериальные белки являются антигенами и токсинами бактерий. В состав белков бактерий входят отсутствующие у человека Д-аминокислоты, а также диаминопимелиновая кислота -
УГЛЕВОДЫ: Углеводы представлены в бактериальной клетке в виде моно-, ди-, олигосахаров и полисахаридов, а также входят в состав комплексных соединений с белками, липидами и другими соединениями. Полисахариды находятся в составе некоторых капсул, клеточной стенки; крахмал и гликоген являются запасными питательными веществами. Некоторые полисахариды принимают участие в формировании антигенов -
ЛИПОИДЫ: Липиды или жиры входят в состав: ЦПМ и ее производных, клеточной стенки грамотрицательных бактерий, служат запасными веществами, входят в состав эндотоксина грамотрицательных бактерий, в составе ЛПС формируют антигены.
Цитоплазматическая мембрана Цитоплазматическая мембрана по структуре похожа на плазмалемму клеток животных и состоит из двойного слоя фосфолипидов с внедренными поверхностными, а также интегральными белками, как бы пронизывающими насквозь структуру мембраны. При избыточном росте (по сравнению с ростом клеточной стенки) цитоплазматическая мембрана образует инвагинаты — впячивания в виде сложно закрученных мембранных структур, называемые мезосомами
Цитоплазма Цитоплазма состоит из растворимых белков, рибонуклеиновых кислот, включений и многочисленных мелких гранул — рибосом, ответственных за синтез (трансляцию) белков. Рибосомы бактерий имеют размер около 20 нм и коэффициент седиментации 70S, в отличие от 80S-рибосом, характерных для эукариотических клеток.
В цитоплазме имеются различные включения в виде гранул гликогена, полисахаридов, бета-оксимасляной кислоты и полифосфатов (волютин).
Нуклеоид — эквивалент ядра у бактерий. Он расположен в центральной зоне бактерий в виде двунитевой ДНК, замкнутой в кольцо и плотно уложенной наподобие клубка. Ядро бактерий, в отличие от эукариот, не имеет ядерной оболочки, ядрышка и основных белков (гистонов). Обычно в бактериальной клетке содержится одна хромосома, представленная замкнутой в кольцо молекулой ДНК. Кроме нуклеоида, представленного одной хромосомой, в бактериальной клетке имеются внехромосомные факторы наследственности - плазмиды, представляющие собой ковалентно замкнутые кольца ДНК
Капсула, микрокапсула, слизь Капсула - слизистая структура толщиной более 0,2мкм, прочно связанная с клеточной стенкой бактерий и имеющая четко очерченные внешние границы. Многие бактерии образуют микрокапсулу - слизистое образование толщиной менее 0,2мкм, выявляемое лишь при электронной микроскопии. От капсулы следует отличать слизь - мукоидные экзополисахариды, не имеющие четких границ. Слизь растворима в воде. Жгутики Жгутики бактерий определяют подвижность бактериальной клетки. Жгутики представляют собой тонкие нити, берущие начало от цитоплазматической мембраны, имеют большую длину, чем сама клетка. Толщина жгутиков 12-20 нм, длина 3-15 мкм. Пили Пили (фимбрии, ворсинки) - нитевидные образования, более тонкие и короткие (3- 10нм х 0, 3-10мкм), чем жгутики. Пили отходят от поверхности клетки и состоят из белка пилина, обладающего антигенной активностью
БАКТЕРИИ, ЛИШЕННЫЕ КЛЕТОЧНОЙ СТЕНКИ:Протопласты - бактерии, полностью лишены клеточной стенки. Образуются из Грам + бактерий;
Сферопласты - бактерии с частично сохранившейся клеточной стенкой. Образуются из Грам-;
L- формы бактерий - это бактерии полностью или частично утратившие клеточную стенку, но способны к размножению. Свойства: постепенное превращение из грамположительных в грамотрицательные; изменение антигенных свойств; снижение вирулентности (степень патогенности данного штамма микроорганизма); способность к длительной персистенции (способность патогенных видов микроорганизмов к длительному выживанию (переживанию) в организме хозяина); способность при неполной утрате синтеза клеточной стенки к возврату в исходную форму.
6 Морфология спирохет и риккетсий. Классификация. Способы выявления
Спирохеты Спирохеты (spira – виток, изгиб, chaite – волосы) представляют собой тонкие спирально извитые клетки, изогнутые вокруг центральной оси, которая представляет собой пучок слившихся фибрилл. Фибриллы обеспечивают разные типы движения спирохет: поступательное, вращательное, сгибательное. Спирохеты плохо воспринимают анилиновые красители, их окрашивают по методу Романовского-Гимзы или серебрением. Кроме того, для обнаружения спирохет, используют нативные препараты, которые микроскопируют в темном поле зрения. Спирохеты представлены 3 родами, патогенными для человека: Treponema, Borrelia, Leptospira. Трепонемы имеют вид тонких штопорообразно закрученных нитей с 8-12 равномерными мелкими завитками. Патогенный представитель Treponema 2 pallidum (возбудитель сифилиса), имеются сапрофитные виды, обитающие в полости рта. Боррелии более длинные, чем трепонемы, имеют 3-8 крупных неправильных завитков. К ним относится B.recurrentis – возбудитель возвратного тифа. Лептоспиры имеют неглубокие частые завитки в виде закрученной веревки. Концы этих спирохет изогнуты наподобие крючков с утолщениями на концах (приобретают вид букв С или S). Патогенный представитель: L. interrogans - возбудитель лептоспироза.
Риккетсии Мелкие (0,3 – 0,5 мкм), полиморфные, Гр- клетки кокковидной, палочковидной или нитевидной формы. Риккетсии – облигатные внутриклеточные паразиты, не растут на питательных средах. Для культивирования используют организм животных, куриные эмбрионы или культуру клеток. Риккетсии обитают в членистоногих (вшах, блохах, клещах), которые являются их хозяевами и переносчиками. В мазках и тканях их окрашивают по Романовскому-Гимзе (красятся в синефиолетовый цвет) и по Здродовскому (риккетсии ярко-розовые, а цитоплазма заражённой клетки – голубая). У человека риккетсии вызывают эпидемический сыпной тиф (Rickettsia prowazekii).
7 Морфология и ультраструктура хламидий, микоплазм
Хламидии от греческого chlamydia – плащ, мантия. Хламидии – облигатные внутриклеточные кокковидные Гр- бактерии. Они не культивируются на питательных средах. Размножаются поперечным делением. Существуют определенные стадии развития хламидий. Инфекционная форма называется элементарным тельцем. Это период покоя и перехода из клетки в клетку, от одного хозяина к другому. При попадании в клетки хламидии превращаются в ретикулярные тельца и могут делиться. Цитоплазматические включения, которые образуются в результате деления, называются микроколониями. В них созревают элементарные тельца. Они окружены общей оболочкой – хламидой. Проникновение хламидий в клетку осуществляется путем фагоцитоза. После образования микроколоний клетка – хозяин разрушается, и элементарные тельца выходят наружу. Цикл развития длится 48-72 часа. Их выявляют в окраске по Романовскому-Гимзе в заражённых ими клетках (красятся в сине-фиолетовый)
