Файл: Краббе П. Применение хироптических методов в химии.pdf

п-у л*-перехода. По сравнению с рис. 7, где приведены данные, полученные в полярном растворителе — мета­ ноле, спектры Д О В и К Д на рис. 8 имеют тонкую струк­ туру, обусловленную колебанием молекул, и средний пик на кривой К Д сдвинут на 20 нм в более длинноволновую область.

Полярность растворителей очень важна при анализе

нулевую линию по кювете с растворителем. Так как ра­ створители, используемые для таких измерений, являют­ ся оптически неактивными, нулевая линия должна быть одинакова для всех растворителей. В то ж е время необ­ ходимо помнить, что отражение и преломление в раство­ рителях и стенках кюветы влияет на нулевую линию, что приводит к расхождению нулевых линий для разных ра­ створителей.

Если напряжение на фотоумножителе превышает не­ который предел, то сильно уменьшается отношение сиг­ нал/шум и появляются ложные пики. Это легко про­ верить, если проводить измерение, применяя более тон­ кую кювету. Указанный предел находится между 600— 700 В для К Д и 800—1000 В для Д О В . Соотношение ме­

измерений. Тогда легко решить, для каких длин волн результаты являются надежными . Наконец, при из­ мерениях Д О В и К Д при длинах волн короче 200 нм

164 Приложение

кую щель, чем обычно, и увеличить масштаб горизон­

которые участки кривых, часто прибегают к увеличению ширины щели. Так как ширина спектральной полосы ДА, пропорциональна ширине щели W, то увеличение шири­ ны щели увеличивает количество света пропорционально W2, хотя соответственно уменьшается разрешение. Вообще раскрытие щели следует ограничивать в таких пределах, чтобы напряжение на фотоумножителе с 700—900 В (не

в длинноволновой области, чистота длины волны умень­ шается и возрастает количество рассеянного света. Это требует более тщательной интерпретации полученных кри­

Мутные растворы необходимо фильтровать перед изме­ рением или, если фильтрование невозможно, повторно записывать кривые при небольшой скорости развертки.

Денатурация образца в результате нагревания или фотохимического воздействия. При изучении белков или других соединений, если они денатурируются при ком­ натной температуре, часто требуется о х л а ж д а т ь ра-

створы до 0 или 5°С. При изучении некоторых белков и растительных пигментов необходима т а к ж е более высо­ кая скорость развертки, так как эти вещества при изме­ рении часто разрушаются под фотохимическим воздей­ ствием.

Неисправности ксеноновой лампы . Среднее время

при ее неисправности точечный источник светового излу­ чения становится нестабильным, что приводит к колеба­ ниям напряжения на фотоумножителе, к колебаниям на

удобно пользоваться тонкой полиэтиленовой трубкой, вытянутой на газовой горелке.

Извлечение образца из кюветы после измерения

Д л я извлечения образца при измерениях в прямо­ угольных или цилиндрических кюветах пользуются шприцем, снабженным тонкой полиэтиленовой трубкой. Чтобы вытеснить образец из U-образной кюветы, удобно использовать резиновую грушу.

Очистка кювет и их хранение

Рассмотрим случай, когда измеряют последовательно много образцов. Если вещества достаточно, то кювету можно промыть раствором образца, однако некоторые органические, и особенно природные соединения, зача­ стую нельзя получить в больших количествах. Если в качестве растворителя используются спирт или органи­ ческие растворители (например, диоксан), то кювету не­ обходимо промыть четыре или пять раз этим раствори-

166 П риложение

телем, затем эфиром и высушить в вакуум-эксикаторе. Когда растворителем является вода, кювету сначала промывают водой, а затем два или три раза этанолом. После обработки эфиром кювету необходимо высушить в вакуум-эксикаторе. Если кювета использовалась для измерения Д О В и К Д органических соединений, ее за­ полняют хромовой смесью и оставляют на сутки. При использовании веществ, содержащих ионы металлов или комплексные соединения, кювету погружают в царскую водку или в концентрированную азотную кислоту. Оста ­ точные количества веществ необходимо удалить, дей­ ствуя горячей хромовой смесью или нагретым раствором

проведения измерений не существует, поэтому в каждом отдельном случае необходимо подбирать условия в со­ ответствии с желаемой точностью проведения опыта.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Lowry Т. М., Optical Rotatory Power, Longmans, Green and Co. (1935).

2. Cassim J. Т., Yang J. Т., Biochemistry, 8, 5, 1947—1951 (1969). 3. De Tar D. F., Analytical Chemistry, 41, 11, 1406—1408 (1969).