Файл: Вопросы гигиены труда и профзаболеваний материалы итоговой научной конференции..pdf

лись через 24, 48 и 72 часа после введения в брюшную полость 100 мг кварцевой пыли. Опытные животные в течение эксперимента дополнительно получали в виде интраперитонеальных иньекций аминазин. Животным первого срока забоя препарат в дозе 1 мг-вво­ дился одномоментно с пылью. Крысам, которых забивали через 48 часов, повторное введение аминазина в дозе 2 мг осуществлялось через 24 часа от начала эксперимента. Животные, брюшнополост ные кокиофаги которых исследовались спустя трое суток, получали за 24 часа до забоя еще 1 мг препарата.

Индикатором состояния митохондриальных и лизосомальных мембран явились цитохимические реакции на НАД-и НАДФ-диа- фораз\, сукцинатдегидрогеназу и кислую фосфатазу. В среднем проводилось по 3—4 реакции на каждый фермент в мазках—отпе­ чатках забитого животного.

Количественный анализ эффективности стабилизирующего мем­ браны действия аминазина проводился методом вариационной ста­ тистики по одному ферменту (кислая фосфатаза) на перитонеаль­ ных макрсфагах с 3-суточной экспозицией, когда повреждающее действие на них пыли наиболее выражено.

Через 24 часа после введения в брюшную полость животных 1 мг аминазина и 100 мг кварцевой пыли отмечался активный фагоци­ тоз последней полинуклеарами и макрофагами. Исследование ха­ рактера локализации диформазана при выявлении сукцинатдегидршеназы, НАД-и НАДФ-диафоразы свидетельствуют, что в заме­ тном числе мйкрофагов этот конечный продукт реакции имеет в ос­ новном мелког^грнуляриую локализацию. Полиморфные гранулы диформазана, которые также имеют место, располагаются преиму­ щественно по периферии клеток. В подавляющем большинстве кле­ ток заметны явления диффузии диформазана в цитоплазму. Из чис­ ла исследованных ферментов в макрофагах наиболее выражена ак­ тивность НАД-днафоразы и менее — сукцинатдегидрогеназы.

Активно участвующие в фагоцитозе кварцевой пыли полинуклеарц неоднородны по своему составу в отношении исследованных окислительно-восстановительных ферментов. Часть из них, свобод­ ная от пылевых частиц, дает, как правило, негативную реакцию на ферменты; фагоцитировавшие пыль полинуклеары—ферментатив­ но активны. При этом в подавляющем большинстве полинуклеаров заметна начальная диффузия диформазана.

Кислая фосфатаза в макрофагах имеет лизосомальную локализа­ цию, На перефирии клеток располагаются укрупненные гранулы

сернистого свинца, свидетельствующие о фаголизосомалыюм рас­ пределения фермента. Нередко значительные участки клеточной территории не содержат лизосомы. М акрофаг с дискретным харак-

269

терем распределения конечного продукта реакции на кислую фос­ фатазу встречаются в большом количестве, чем у животных конт­ рольных исследований. Что касается полинуклеаров, то большая их часто дает негативную реакцию, меньшая—обладает лизосоммальным характером локализации фермента.

Через 48 часов от начала эксперимента отмечается увеличение числя клеточных элементов (преимущественно мононуклеаров), участвующих в фагоцитозе пыли. В большинстве макрофагов отме­ чается преимущественно диффузный характер распределения ди-

ки с выраженной или полной диффузией фермента, свойственные контрольным исследованиям, встречаются редко. Хотя в большей части клеток диффузное закрашивание диформазаном охватывает значительные участки клеточной территории, оно не столь интенсив­ но, как в случае воздействия только пыли двуокиси кремния. В этих

лее клетках нередко встречаются и мелкогранулярные и полиморф­ ные отложения продукта реакции больше по периферии, в клеточ­ ных отростках, хотя самые концевые участки этих отростков, как правило, дают негативную реакцию.

При выявлении окислительно-восстановительных ферментов в полинуклеарах отмечается следующая картина: в части из них обра­ зуется незначительное количество гранул диформазана, в другой (более значительной по количеству) налицо явления диффузии.

Реакция на кислую фосфатазу обнаруживает различные формы функционального состояния макрофагов. В одних клетках конечный продукт реакции—сернистый свинец—выпадал преимущественно в ьиле дискретных гранул, в других—имело место слияние этих гра­ нул с образованием более укрупненных отложений, занимающих, однако, ограниченные участки клеточной цитоплазмы. В полинуклеарах в основном сохранялся лизосомный и фаголизосомный харак­ тер локализации сернистого свинца, хотя попадаются клетки с за­ метной диффузией фермента в цитоплазму.

Через 72 часа от начала эксперимента в брюшнополостном экс­ судате отмечается наибольшее количество макрофагальных элемен­ тов из всех сроков наблюдения. Относительное количество полинук­ леаров, участвующих в фагоцитозе пыли, уменьшается. Увеличива­ ется процент гигантоклеточных форм макрофагов. Активность окислительно-восстановительных ферментов в различных макро­ фагах была выражена неодинаково и колебалась от слабой до вы­ ряженной. В одних клетках (свойственных больше раннему сроку наблюдения) диформазан локализовался в виде мелких гранул, в

270

других—как бы концентрировался у клеточных полюсов, в третьих

—сплошь заполнял цитоплазму. Два первых типа клеток суммарно преобладали.

Нарастает число полинуклеаров с полиморфными отложениями, продукта реакции на окислительно-восстановительные ферменты; появляются клетки с полной диффузией диформазана в цитоплазму.

Исследование кислой фосфатазы выявляет многообразие клеточ­ ных форм от макрофагов, в которых протоплазма почти сплошь вы­ полнена продуктом реакции, до клеток с лизосомной локализацией ф'ермента. При этом большая часть клеток содержит как дискрет­ ное, лизосомное отложение сернистого свинца, так и более агреги­ рующие скопления этого соединения. Аналогичная картина харак­ тера локализации кислой фосфатазы отмечается и в полинуклеара\ с той лишь разницей, что степень диффузии фермента в них в целом несколько менее выражена.

Количественная обработка материала (брюшнополостные копио-

явлениями выраженной и полной диффузии из лизосом кислой фос­ фатазы (46%±1,8 против 54,1%±2,2 в контроле).

Подводя краткий итог результатов исследований, можно заклю чить, что под влиянием аминазина имеет место стабилизация митохондриальных и фаголизосомальных мембран кониофагов в услови­ ях повреждающего на них действия кварцевой пыли. Сравнение э:их данных с результатами воздействия гидрокортизона и поливи-

ность защиты кониофагов последними.

ДЕЙСТВИЕ АМИНАЗИНА НА КОЛЛАГЕНООБРАЗОВАНИЕ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ СИЛИКОЗЕ

И. М. Шнайдман

Как было отмечено в предыдущем сообщении, аналог аминазина хлорпромазин обладает мембранозащитпыми свойствами, с чем связывают его протективное действие при шоковых состояниях различной этиологии. Нашими цитохимическими исследованиями в перитонеальном тесте удалось установить, что аминазин способен стабилизировать митохондриальные и фаголизссомальные мембра­ ны кониофагов (хоть и в несколько меньшей степени, чем поливи- нилпиридин-Й-оксид и гидрокортизон) в условиях повреждающего действия кварцевой пыли. Все это поначалу наводило па мысль о

возможно тормозящем влиянии аминазина на коллагеиообразование в легких при силикозе. Однако предварительные исследования

271

не только не выявили ожидаемого результата, но, напротив, склони­ ли нас даже к заключению об определенной степени прогрессиро­ вания патологического процессаБолее детальное знакомство с ли­ тературой по механизмам действия аминазина указало на ряд не­ учтенных нами обстоятельств. Наиболее важным в фармакодинамикс аминазина является его угнетающее влияние на обмен веществ. С этим связано широко известное гипотермическое действие препа­ рата. М. Д. Машковский (1959) установил, что аминазин в дозе 5 мг/’кг вызывает снижение температуры в прямой кишке крысы на 2—2,5°. Курвуазье и>др. (1953) отметили уменьшение под влиянием ларгактила (аналога аминазина) потребления кислорода как в ус­ ловиях целого организма, так и на' изолированных органах. Напри­ мер, у крыс при введении препарата в дозе 10—20 мг/кг авторы на­ блюдали уменьшение потребления кислорода на 20%. Декурт и др. (1953) связывают это свойство препарата с его угнетающим вли­ янием на активность дегидрогеназ. В свете этих данных был пред­ принят эксперимент, в котором аминазину отводилась новая, иная роль.

В эксперименте находилось 30 крыс, разбитых на две равные се­ рии — опытную и контрольнуюАминазин вводился в виде инъек­ ций по 2 мг три раза в неделю в течение последнего четвертого месяца крысам с экспериментальным силикозом. Животные опыт­ ной и контрольной серии (запыленные и получавшие инъекции фи­ зиологического раствора) забивались одномоментно через четыре месяца после запыления. Парафиновые срезы из кусочков легких крыс окрашивали гемотоксилин-эозином, микрофуксином, имрегнировались по Гоморн. Кислые и щелочные белки выявляли бромфеиоловым синим, SS — и SH-группы определяли с помощью диоксидинафтилсульфида. Диаминоможжарбоновые аминокислоты выяв­ ляли реактивом Шпффа после окисления нингидрнном, триптофан

—с применением димстиламинобензальдегида. Гистидин определя­ ли по Брунсвику с помощью диазобензосульфокислоты. Кислые мукополисахариды выявляли толуидиновым синим при различных pH; нейтральные мукополисахариды — ШИК-рсакцией. Гликоген иссле­ довали по методике Шабадаша, рибонуклеопротеиды — по Бра-

шс, дезоксирибонуклеопротеиды — по Фельгину. В работе приме­ нялся метод специфического разрушения различных компонентов ткани амилазой, бактериальной и тестикулярной гиалуронидазой, рибонуклсазой, коллагеназой с последующей соответствующей ок­ раской. Кроме того, в криостатическнх срезах легких крыс (по 5-ти из каждой серии) определялась активность сукцинатдегидрогепазы, НАД и НАДФ-диафоразы, цитохромоксидазы. В гомогенате легких крыс (по 11 -ти из каждой серии) определялось содержание коллагеновыхбелков.

272

Описание результатов ряда гистохимических реакций (на мукополисахариды, нуклеопротеиды) опускается в силу отсутствия за­ метных различий их в легких контрольных и опытных животных-

При исследовании легких крыс контрольной группы видны оди­ ночные мелкие развивающиеся узелки и более крупные сливающие­ ся между собой созревающие и сформированные силикотическио узлы с густой сетью толстых огрубевших аргирофильных и коллаге­ новых волокон, дающих выраженную окраску с бромфеноловым си­ ним, а также положительную реакцию при выявлении диаминомонокарбоновых кислот, сульфгидрильных групп, гистидина и трипто,- фана. Крупноузелковая форма склероза была характерна легким меньшинства крыс (5 из 15), в двух третьих случаях отмечалась картина мелко- и крупноузелкового склероза у отдельных крыс да­ же с преобладанием первого.

Активность сукцинатдегидрогепазы, НАД и НАДФ-дпафоразы и нитохромоксидазы выражена в пролиферирующих молодых соеди­ нительнотканных клетках мелких, развивающихся епликотическнх узелков и резко снижена в подавляющем числе клеток круп­ ных сформированных узлов.

В этот же срок течение силикотического процесса у крыс, по­ лучавших аминазин, характеризуется наличием в легких мелких и сливающихся крупных силикотических узлов с густой сетью тол­ стых, грубых коллагеновых и ретикулиновых волокон. При этом от­ мечалась более выраженная тенденция к слиянию силикотических узлов, чем-в легких животных контрольной серии исследования. Выраженное количество крупных сформированных силикотических узлов с густой сетью аргирофильных и коллагеновых волокон было характерно для легких подавляющего большинства животных (11 из 15). В целом степень выраженности склероза скорее соответ­ ствовала патологическому процессу при 5—6-месячном сроке запьтлепня животных. Коллагеновые волокна силикотических узлов да­ вали положительные результаты при постановке реакции на белки и использованный в работе набор аминокислот.

Активность сукцинатдегидрогепазы, НАД и НАДФ-диафоразы, нитохромоксидазы в клеточных элементах крупных сформирован­ ных узлов резко снижена. Ферментативно активные клетки распо­

лагаются лишь по периферии этих узлов. Мелкие силнкотичсскис узелки содержат высоко ферментативно-активные клетки. Учитывая более выраженное в опытной серии животных замещение нормаль­ ной легочной ткани, активной в отношении исследованных окисли­ тельно-восстановительных ферментов, силикотической соедини­ тельной тканью (практически дающей отрицательные результаты на

указанные ферменты), в целом легкие животных опытной серии

273