Файл: 1. Основные этапы развития микробиологии. Работы Л. Пастера, Р. Коха и их значение для развития микробиологии. Значение открытия Д. И. Ивановского. Роль отечественных ученых Н. Ф. Гамалея, П. Ф. Здродовского, А. А.docx
ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 09.02.2024
Просмотров: 46
Скачиваний: 0
ВНИМАНИЕ! Если данный файл нарушает Ваши авторские права, то обязательно сообщите нам.
В полости рта обитают актиномицеты, бактероиды, бифи-цобактерии, эубактерии, фузобактерии, лактобактерии, гемофильные палочки, лептотрихии, нейссерии, спирохеты, стрептококки, стафилококки, вейлонеллы и др. Обнаруживаются также грибы рода Candida и простейшие. Ассоцианты нормальной микрофлоры и продукты их жизнедеятельности образуют зубной налет.
17 Микрофлора воды. Санитарно-бактериологическое исследование воды: определение микробного числа, коли-титра, коли-индекса
Вода- древнейшее место обитания микроорганизмов. Пресноводные водоемы и реки отличаются богатой микрофлорой. Многие виды галофильных микробов обитает в морской воде, в том числе на глубинах в несколько тысяч метров. Численность микроорганизмов в воде в определенной степени связано с содержанием органических веществ. Серьезной экологической проблемой являются сточные воды, содержащие значительное количество микроорганизмов и органических веществ, не успевающих самоочищаться
Определение микробного числа водопроводной воды. Водопроводную воду засевают в объеме 1 мл. Из исследуемой воды готовят разведения в 10, 100, 1000 раз
По 1 мл полученных разведений воды, начиная с большего переносят в промаркированные стерильные чашки Петри и заливают в каждую чашку 10 мл расплавленного и охлажденноло до 450С МПА. Осторожно перемешивают, затем чашки с застывшим агаром инкубируют в термостате при 370С 24 часа. Подсчитывают количество выросших колоний на поверхности и в глубине среды каждой чашки и с учетом разведения вычисляют микробное чиспо – количество микробов в 1 мл. Например, если в чашке с разведением 1:100 выросло 2 колонии, то в 1мл исследуемой воды их будет в 100 раз больше, следовательно – 200. При вычислении результатов из полученных данных выводят среднее арифметическое
Коли-титр – это минимальное количество воды (мл), в котором обнаруживаются бактерии группы кишечной палочки (БГКП).
Коли-индекс – количество БГКП, содержащихся в 1л исследуемой воды. Эти показатели определяются традиционным (бродильным) методом и методом мембранных фильтров.
Бродильный метод. Производят посев различных объемов воды: 100, 10, 1 мл в глюкозо-пептонную среду (Состав ГПС: 1% пептонная вода, 0,5% раствор глюкозы, 0,5% раствор хлорида натрия, индикатор Андреде и поплавок). Для посевов больших количеств (100 и 10 мл) используют концентрированную среду, содержащую десятикратные количества указанных веществ. Водопроводную воду засевают: 3 объема по 100 мл, 3 объема по 10 мл и 3 объема по 1 мл. Посевы культивируют при 370С 24 часа. О положительном результате свидетельствует помутнение и брожение в среде. Из помутневших проб делают посевы на среды Эндо для выявления БГКП. После культивирования при 370С в течение 24 часов учитывают характер роста, из выросших колоний делают мазки в окраске по Граму, ставят оксидазный тест для 3 дифференциации от Гр- бактерий семейства Pseudomonadaceae и других оксидазоположительных бактерий, обитающих в воде. БГКП сбраживают глюкозу до кислоты и газа в ГПС, лактозу (малиновые колонии на среде Эндо образуют E. coli), оксидазоотрицательны. В эту группу входят: E. coli, клебсиеллы, цитробактеры, энтеробакторы, клебсиеллы и др. представители семейства энтеробактерий. При наличии признаков, характерных для БГКП, определяют коли-титр и коли-индекс по таблице, учитывая количество забродивших проб на ГПС.
Метод мембранных фильтров. Через стерильный (прокипяченный в дистиллированной воде 10 минут) мембранный фильтр пропускают исследуемую воду в объеме 333 мл. Затем фильтр помещают в чашку Петри со средой Эндо и после инкубации при 370С 24 часа подсчитывают количество выросших колоний, типичных для БГКП и определяют коли-индекс.
Например, если в чашке выросло две колонии, то коли-индекс равен: 2 х 3=6 Нормативы для питьевой воды: Микробное число – не более 100 Коли-индекс – не более 3 Коли-титр – не менее 333
18 Микрофлора воздуха и санитарно-бактериологическое исследование воздуха.
Санитарное состояние воздуха закрытых помещений определяется по двум показателям: - общему количеству микробов, содержащихся в 1 м3 воздуха; - наличию патогенных стафилококков, гемолитических стрептококков и других патогенов. Количественные микробиологические методы исследования воздуха основаны на принципах осаждения (седиментации) и аспирации.
Седиментационный метод. Две чашки Петри с МПА оставляют открытыми в течение 60 минут, затем закрывают и инкубируют в термостате при t 370С. Результаты оценивают по суммарному числу колоний, выросших в чашках. При наличии менее 250 колоний – воздух чистый, более 500 – загрязненный.
Аспирационный метод. Более достоверный. Посев воздуха осуществляется с помощью приборов (Кротова, Дьякова, Речменского и др.). Для этого чашку с питательной средой помещают в аппарат напротив отверстия, через которое просасывается воздух с заданной скоростью (25 л/мин.). Количество пропущенного воздуха – 100 литров для определения общего количества бактерий, 250 л для определения золотистого стафилококка, дрожжевых и плесневых грибов. После инкубации посева в термостате подсчитывают количество выросших колоний и производят пересчет на 1 м3 воздуха по формуле: Х = N x 1000 V где Х – микробное число воздуха; 2 N – количество выросших колоний; V – объем пропущенного через прибор воздуха. Для определения золотистого стафилококка используют желточно-солевой агар (ЖСА), гемолитических стрептококков – кровяной агар, плесневых и дрожжевых грибов – среда Сабуро (культивирование при 240С, 4 суток). Нормативы: Для асептического блока до работы – не более 500 микроорганизмов в 1 м 3 воздуха; Для асептического блока после работы - не более 1000 микроорганизмов в 1м3 воздуха; Патогенных не должно быть (в том числе дрожжевых и плесневых) в 250 л воздуха.
19 Действие физических факторов на микроорганизмы. Стерилизации, используемые методы, аппаратура для стерилизации.
1. Психрофилы (холодолюбивые). Это обитатели почвы, морей, пресных водоемов (сапрофиты) и некоторые паразиты: паразиты холодолюбивых животных, некоторые виды иерсиний, клебсиелл, псевдомонад, вызывающих заболевания у человека.
2. Мезофилы. Обитают в организме теплокровных животных. К ним относятся большинство патогенных и условно-патогенных микроорганизмов.
3. Термофилы. Обитают в горячих источниках, участвуют в процессах самонагревания навоза, зерна. Они не способны размножаться в организме теплокровных животных, поэтому не имеют медицинского значения.
Благоприятное действие оптимальной температуры используется при выращивании микроорганизмов с целью лабораторной диагностики, приготовления вакцин и других препаратов.
Тормозящее действие низких температур используется при хранении продуктов и культур микроорганизмов в условиях холодильника. Низкая температура приостанавливает гнилостные и бродильные процессы. Механизм действия низких температур – затормаживание в клетке процессов метаболизма и переход в состояние анабиоза.
Губительное действие высокой температуры (выше максимальной) используется при стерилизации. Механизм действия – денатурация белка (ферментов), повреждение рибосом, нарушение осмотического барьера. Наиболее чувствительны к действию высокой температуры психрофилы и мезофилы. Особую устойчивость проявляют споры бактерий.
Ионизирующее излучение обладает мощным проникающим действием и повреждает клеточный геном. Механизм повреждающего действия: ионизация макромолекул, что сопровождается развитием мутаций или гибелью клетки. При этом летальные дозы для микроорганизмов выше, чем для животных и растений.
Механизм повреждающего действия УФ-лучей: образование димеров тимина в молекуле ДНК, что прекращает деление клеток и служит основной причиной их гибели. Повреждающее действие УФ-лучей в большей мере выражено для микроорганизмов, чем для животных и растений.
Ультразвук (звуковые волны 20 тыс. гц)обладает бактерицидным действием. Механизм: образование в цитоплазме клетки
кавитационных полостей, которые заполняются парами жидкости и в них возникает давление до 10 тыс. атм. Это приводит к образованию высокореактивных гидроксильных радикалов, к разрушению клеточных структур и деполимеризации органелл, денатурации молекул.
Ионизирующее излучение, УФ-лучи и ультразвук используются для стерилизации.
ода необходима для нормальной жизнедеятельности микроорганизмов. Снижение влажности среды приводит к переходу клеток в состояние покоя, а затем и к гибели. Механизм губительного действия высушивания: обезвоживание цитоплазмы и денатурация белков.
Более чувствительны к высушиванию патогенные микроорганизмы: возбудители гонореи, менингита, брюшного тифа, дизентерии, сифилиса и др. Более устойчивы споры бактерий, цисты простейших, бактерии, защищенные слизью мокроты (туберкулезные палочки).
В практике высушивание используется для консервирования мяса, рыбы, овощей, фруктов, при заготовке лекарственных трав.
Высушивание из замороженного состояния под вакуумом – лиофилизация или лиофильная сушка. Ее используют для сохранения культур микроорганизмов, которые в таком состоянии годами (10-20 лет) не теряют жизнеспособности и не меняют свойств. Микроорганизмы находятся при этом в состоянии анабиоза. Лиофилизация используется в производстве препаратов из живых микроорганизмов: эубиотиков, фагов, живых вакцин против туберкулеза, чумы, туляремии, бруцеллеза, гриппа и др.
Стерилизация определяется как процесс, посредством которого изделие, поверхность или среда освобождаются от всех живых микроорганизмов как от вегетативных форм, так и от спор. Различают физические, механические и химические методы стерилизации.
К механическим методам относится фильтрование, которое может быть применено для стерилизации жидкостей, биологических препаратов (сыворотки, лекарственные вещества). Фильтрование производят через специальные материалы, задерживающие микроорганизмы (бактерии, простейшие, грибы, многие вирусы). Фильтры могут быть керамическими, стеклянными, асбестовыми (фильтр Зейтца), мембранные (коллодийные) с разным диаметром пор в мембране. Физические методы стерилизации включают в себя: прокаливание, сухой жар, пар под давлением, воздействие излучения. Прокаливание. Производят в пламени спиртовке, газовой горелке. Прокаливают до красного каления бактериологические петли, мелкие металлические инструменты (иглы, петли). Стерилизация сухим жаром. Осуществление стерилизации производят в воздушных стерилизаторах (сухожаровой шкаф, печь Пастера) при разных режимах: 160°С - 120 мин, 200°С - 30 мин, 180°С - 40 мин.Стерилизации подвергается лабораторная посуда, изделия из стекла, инструменты, силиконовая резина и другие предметы, которые не теряют своих качеств при нагревании. Стерилизация паром под давлением (автоклавирование). На микроорганизмы и споры воздействуют высокая температура и пар под давлением и, как правило, время стерилизации уменьшается с повышением температуры кипения и атмосферного давления. Режимы: 120°С, 45 мин – 1 атм., 132°С, 20 мин – 2 атм. Стерилизации подвергаются питательные среды (МПБ, МПА), перевязочный материал, белье, коррозионно-устойчивые металлические инструменты, растворы, инфекционный материал и т. д. Стерилизация текучим паром (дробная стерилизация) является одной из разновидностей тепловой стерилизации. Процедура заключается в нагревании материала до 100°С в течение 30 мин (погибают вегетативные формы) и выдерживании в термостате (способствует прорастанию спор), повторяют в течение 3 дней. Используется для стерилизации питательных сред с углеводами, витаминами. Тиндализация (дробная стерилизация) также является видом дробной стерилизации. Осуществляют для стерилизации питательных сред, в том числе содержащих белки, при режимах: 70-80°С в течение 1 часа - 3 дня или 56-58°С в течение 1 часа – 5-6 дней подряд. Гласперленовая стерилизация. Данный вид стерилизации заключается в нагревании стеклянных шариков до температуры 190-240°С, помещении материала, требующего обработки (мелкие инструменты), время экспозиции составляет 3-5 мин.
