Дни	Исследование
1-й день Отбор проб Первичный посев	Скорость протягивания воздуха 30л/мин. Желатиновые фильтры Объем протягиваемого воздуха: 100л 250л 250л ОМЧ ОЧГ St.aureus ср.РСА (2) ср.Sab. (2)ср.St.agar (1) После аспирации фильтры перекладываются на ч. Петри с соответствующими средами. После отбора проб, чашки Петри доставляются в микробиологическую лабораторию. Чашки Петри с фильтрами остаются на столе 15 минут до растворения фильтров. Режим инкубации: пит.ср. РСА,TSA, Среда №1при 35С0, 48ч. пит.ср. St.agar при 35С0, 48ч. пит.ср. Sab, среда №2при 230С, 5 сут.
2-й день	Предварительный просмотр установленных в термостаты, чашек Петри с питательными средами.
3-й день	Просмотр чашек, подсчет колонии, описание колонии, приготовление мазков, окраска по Граму микроскопирование идентификация
4-й день	Предварительный просмотр установленных в термостаты, чашек Петри с питательными средами.
5-й день	Просмотр чашек, подсчет колонии, описание колонии, приготовление мазков, окраска по Граму, микроскопирование, идентификация.
	Регистрация результатов, оформление протоколов, выдача протоколов

21.Микрофлора лекарственного растительного сырья, фитопатогенные микробы

Лекарственное растительное сырье может инфицироваться патогенными микроорганизмами на всех этапах заготовки (сбор, первичная обработка, сушка, измельчение, упаковка) и хранения. Увеличение микробной обсемененности вызывают повышенная влажность, пыль, насекомые и другие факторы. Достаточно быстро портятся плоды, ягоды и корневища, так как они богаты углеводистыми соединениями. Более устойчивыми являются сухие листья, корешки, кора. Внешними проявлениями микробной порчи растительного сырья являются изменение цвета и консистенции, загнивание всего растения либо его частей. Инфицирование лекарственного сырья приводит не только к резкому снижению или полному исчезновению биологически активных веществ, но и накоплению веществ, ядовитых для организма человека. В связи с этим внедрение такого сырья становится бесполезным или даже вредным. Состав микрофлоры растительного сырья определяется составом нормальной микрофлоры растения (эпифитная и ризосферная микрофлора), а также зависит от вида лекарственного сырья, его структуры и фармакологических параметров. Преобладают грибы (Mucor, Penicillium, Aspergillus, Saccharomyces, Candida), актиномицеты и спорообразующие виды микробов (Bacillus subtillis, Bacillus megatherium). Для предупреждения порчи лекарственного сырья необходимо проводить следующие мероприятия: уничтожать больные растения; соблюдать технологию транспортировки, сушки, хранения и переработки растительного лекарственного сырья.

---

К фитопатогенным микроорганизмам относят бактерии, вирусы и грибы, вызывающие инфекционные заболевания растений. Болезни, вызываемые бактериями, называют бактериозами. Различают общие и местные бактериозы. Общие бактериозы вызывают гибель всего растения или его отдельных частей вследствие распространения возбудителя в сосудистой системе. Местные бактериозы ограничиваются поражением отдельных участков растений и возникают при интрацеллюлярном распространении. По совокупности анатомических и физиологических нарушений можно выделить следующие типы болезней растений:

-Камеде-, смоло-, слизетечения.

-Сухая и мокрая гниль проявляется размягчением и разрушением отдельных участков тканей растения за счет деятельности микробов.

-Мучнистая роса. При этом на листьях и побегах возникает белый налет.

-Пожелтение, увядание, засыхание. Некоторые бактерии способны повреждать клеточные мембраны сосудов, в результате чего происходит закупорка сосудов и гибель растения.

-Чернь. При этом на листьях и побегах возникает темная пленка.

-Ожог. Заболевание характеризуется почернением листьев, молодых побегов, цветов, плодов.

-Пятнистость – образование пятен на листьях, плодах, семенах различного цвета, формы, размеров.

-Опухоли – местное увеличение ствола, веток, корней, корневищ в виде наростов, вздутий, утолщений за счет гиперплазии клеток.

-Язвы – углубления, часто окруженные наплывом.

-Мозаика листьев: проявляется в виде бледно окрашенных пятен на листьях. -Ведьмины метлы – образование побегов из спящих почек.

-Деформация: проявляется в изменении формы органов (искривление побегов, курчавость листьев, карликовость).
22.Микробиологический контроль воды очищенной в соответствии с Государственной Фармакопей (ГФ) РК

На всех фармацевтических предприятиях производится постоянный контроль качества используемой воды. Отбор проб и их анализ являются неотъемлемой частью системы отслеживания качества воды, которая была создана на основании проведенных валидационных испытаний. Объектами контроля являются:

• 
  вода питьевая как материал для получения воды очищенной. В основном проверяется сторонними организациями, например, водоканалом.
  
• 
  вода очищенная – вода, полученная дистилляцией, обратным осмосом, деионизацией, ультрафильтрацией или комбинацией перечисленных методов, используемая в нестерильном фармацевтическом производстве.
  
• 
  вода для инъекций, полученная дистилляцией в несколько этапов и предназначенная для растворения лекарственных веществ перед фильтрацией и для последнего ополаскивания первичной тары фармацевтической продукции, приготовляемой асептически.
  

---

Отбор проб

Отбор проб проводится в определенных точках

Пробы должны отбирать обученные работники, метод отбора проб должен быть задокументирован

Пробы воды для проведения микробиологических анализов должны помещаться в стерильную тару

Пробы воды в тот же день должны быть проанализированы в микробиологической лаборатории

Пробы для определения эндотоксинов должны отбираться в специальную апирогенную тару

Порядок пробоотбора – микробиология, эндотоксины, химический разбор, остальные анализы

PW – вода очищенная

Микробиологическая чистота – предельно допустимый показатель по Фармакопее – 100 КОЕ/1 мл (пример лимита действия — 30 КОЕ / мл)

Эндотоксины – макс. 0,25 МЕ/ мл

Лимиты тревоги и действия (для воды WFI и PW) устанавливаются на основании годового тренда на год вперед индивидуально для каждого производства. Если имеется несколько контуров воды, лимит действия устанавливается для каждого контура отдельно.
Схема исследования очищенной воды по методу мембранной фильтрации

Используемые материалы и питательные среды	Целлюлозно-нитратные фильтры: для ОМЧ   - тип фильтра: 14063; размер пор: 0,45 мкм; цвет фильтра: зеленый; цвет сетки: зеленый. для ОЧГ - тип фильтра: 14069; размер пор: 0,65 мкм; цвет фильтра: серый; цвет сетки: белый. для  энтеробактерий, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus -  тип фильтра: 14097, 14075, 14074; размер пор: 0,45 мкм; цвет фильтра: белый; цвет сетки: зеленый. Питательные среды: для определения общего микробного числа – R2А, 2 чашки Петри. для определения дрожжевых и плесневых грибов – агар Sabouraud (Sab.), 2 чашки Петри. для определения бактерии семейство Enterobacterеacae – агар Endo. для определения Staphylococcus aureus – Staphylococcus agar. для определения Pseudomonas aeruginosa – Pseudomonas agar. Аппарат мембранной фильтрации: фильтродержатель, воронки, крышки воронки, фритты, колба 5 л, пинцет, вакуумный насос, соединительные шланги Дополнительно: стерильная очищенная вода ватный тампон спирт этиловый 96%, 76%.
Отбор проб	Проба отбирается в стерильный флакон с завинчивающейся крышкой, объемом 200 мл, 500 мл. Флакон открывают непосредственно перед отбором, во время отбора пробка и края емкости не должны чего-либо касаться. Отбор воды из крана должен производится после спуска воды в течение 5 минут при полностью открытом кране. Отобранную пробу маркируют, указывают дату и время отбора. Заполняют Форму «Микробиологический контроль воды очищенной» – ФМ 13-01-01. Объём пробы должен быть не менее 200 мл. Исследования отобранной пробы следует провести в течение 2 часов после забора.
1 день исследования	Готовят рабочее место, протирают рабочий стол спиртом этиловым 76 % или дезинфицирующим раствором; Лабораторные инструменты, помещают в лабораторный стакан с небольшим количеством спирта этилового 96 %. Собирают аппарат мембранной фильтрации, устанавливают его в ламинарную кабину, подключают к сети, зажигают спиртовку и дальше работают при зажжённой спиртовке. Воронку одевают на основание фильтродержателя и надежно закрепляют зажимом. Сначала нужно смочить стерильной очищенной водой фритты, налив в воронки небольшое количество стерильной воды. Открывают краны, удаляя воду, закрывают краны. Достают профламбированным пинцетом стерильный мембранный фильтр вместе с прокладочным диском (защитная пленка) и снимают воронку, мембранный фильтр устанавливают на поверхность фритты, затем снимают пинцетом прокладочный диск. Смачивают мембранные фильтры небольшим количеством стерильной очищенной воды. Открывают краны и удаляют воду, затем снова закрывают краны. Для посева на среды R2A и Sab, наливают по 10 мл исследуемой очищенной воды в воронку и немедленно фильтруют, открыв кран. Для посева на среды Staph. agar, Pseu. agar, Endo наливают по 100 мл исследуемой очищенной воды в воронку и немедленно фильтруют, открыв кран. Каждый мембранный фильтр промывают тремя порциями, 100 мл каждая, стерильной водой. После окончания фильтрования воронку снимают, фильтр осторожно поднимают за край фламбированным пинцетом и переносят его, не переворачивая, на питательную среду, разлитую в чашки Петри, избегая пузырьков воздуха между средой и фильтром. Поверхность фильтра с осевшими на ней бактериями должна быть обращена вверх. Перед следующим фильтрованием обжигают воронки смоченным в 96% этиловым спирте ватным тампоном, затем ополаскивают, налив до крайней метки воронки стерильную очищенную воду. Режим инкубации: пит. ср. R2A при 350С, 4 суток. пит. ср. Sab, при 230С, 5 суток. пит. ср. Staph. agar, при 350С, 48ч. пит. ср. Pseu.agar, при 350С, 48ч. пит. ср. Endo, при 430C, 24ч.
2-5 дни исследования	Просмотр чашек, подсчет колонии, описание колонии, приготовление мазков, окраска по Грамму, микроскопирование, идентификация.
	Регистрация результатов, оформление протоколов, выдача протоколов.

---

23.Определение эффективности антимикробных консервантов по требованиям ГФРК

Антимикробные консерванты – это вещества органической или неорганической природы, обладающие антимикробным действием, которые добавляют в ЛП для предотвращения роста и развития микроорганизмов, которые могут попасть в них в процессе производства или при многократном применении. Эффективная концентрация консерванта в готовом ЛП должна быть ниже дозы, токсичной для человека.

Эффективность антимикробных консервантов – это способность вещества ингибировать рост микроорганизмов в ЛП на протяжении срока годности. ЭФФЕКТИВНОСТЬАНТИМИКРОБНЫХ КОНСЕРВАНТОВ

Если готовое лекарственное средство само по себе не обладает достаточной антимикробной активностью, то в его состав могут быть введены антимикробные консерванты, что особенно важно для лекарственных средств в виде водных растворов. Поскольку микробное загрязнение может вызвать инфицирование пациента или порчу готового лекарственного средства, антимикробные консерванты предназначены для предотвращения размножения микроорганизмов либо ограничения микробной загрязненности готового лекарственного средства в процессе хранения и применения, особенно в случае использования много дозовых упаковок. Антимикробные консерванты не должны использоваться как альтернатива надлежащей производственной практике. Эффективность антимикробного консерванта может усиливаться или ослабляться в результате взаимодействия с действующим веществом или другими компонентами готового лекарственного средства, а также с упаковочными или укупорочными материалами. Поэтому на протяжении срока годности следует контролировать антимикробную активность готового лекарственного средства, хранящегося в контейнере, с целью доказательства того, что она не снижается в процессе хранения. Для такого контроля могут быть использованы образцы, извлеченные из контейнера непосредственно перед испытанием. На стадии разработки лекарственного средства следует доказать, что антимикробная активность самого лекарственного средства или при необходимости лекарственного средства с добавкой подходящего консерванта(ов) обеспечивает надлежащую защиту от нежелательных эффектов, которые могут быть результатом микробного загрязнения лекарственного средства или размножения в нем микроорганизмов в процессе хранения и использования.

---

Настоящая общая фармакопейная статья устанавливает общие требования к определению эффективности антимикробных консервантов, входящих в состав лекарственных препаратов. Антимикробные консерванты предназначены для предотвращения размножения микроорганизмов или ограничение микробной загрязненности лекарственного препарата в процессе хранения и применения, особенно вслучае использования многодозовых упаковок. Антимикробные консервантыне должны заменять выполнение требований надлежащей производственной практики (GMP). Эффективная концентрация консерванта в готовом лекарственном препарате должна быть ниже дозы, токсичной для человека. Эффективность антимикробных консервантов – это способность вещества ингибировать рост микроорганизмов в лекарственном препарате напротяжении срока годности.

Испытание эффективности консервантов – это процедура, состоящая из искусственной контаминации образца лекарственного препарата суспензиями определенных тест микроорганизмов, инкубации контаминированных образцов при определенной температуре, отбора проб через указанные интервалы времени и подсчете жизнеспособных клеток микроорганизмов в 1 г (мл)лекарственного препарата на протяжении периода испытания, расчетов и оценки полученных результатов.

Недопустимо вносить консерванты в лекарственный препарат для внутриполостных, внутрисердечных, внутриглазных инъекций, имеющих доступ к спинномозговой жидкости, а также при разовой дозе, превышающей15 мл.

Эффективность консервантов лекарственных препаратов определяют вотношении определенных видов бактерий и дрожжевых и плесневых грибов.

При испытании применяют следующие виды микроорганизмов: Escherichiacoli , Pseudomonas aeruginosa , Staphylococcus aureus, Candida albicans, Aspergillus brasiliensis

Набор тест-штаммов микроорганизмов может быть уменьшен или увеличен в

зависимости от способа применения, состава или возможных микроорганизмов-контаминантов испытуемого лекарственного препарата.
24.Метод определения бактериальных эндотоксинов по требованиям ГФРК в стерильных лекарственных препаратах

При проведении испытания на бактериальные эндотоксины(ЛАЛ-теста) используют лизат амебоцитов мечехвоста Limuluspolyphemus. Прибавление раствора, содержащего эндотоксины, к раствору лизатаприводит к появлению мутности, осаждению или геле-образованию смеси. Скорость реакции зависит отконцентрации эндотоксинов, рН и температуры. Дляреакции необходимо наличие определенных двухвалентныхкатионов, ферментной системы, беспечивающейобразование тромба, и белка, способного кобразованию тромба, содержащихся в лизате. Концентрациюэндотоксинов можно также рассчитыватьпо концентрации высвободившегося красителя в реакциилизиса хромогенного пептида в растворе лизатапосле активации его эндотоксинами.Описаны следующие пять методов:Метод А - метод гелеобразования: предельноеиспытание;

---

Смотрите также файлы

• Организация и управление внешнеэкономической деятельностью предприятия.docx

• Допуски.docx

• Тематическое планирование по элективному курсу Актуальные вопросы обществознания.docx

• Сформулируйте наиболее важные экономические условия для удовлетворения спроса населения на товары.doc

• Занятие 1 по темам 13 Тема Понятие, предмет, метод и система гражданского права.pdf