Файл: Титаев А.А. Эволюция органических соединений на Земле. От углерода до биополимеров.pdf

ньш объемом этанола, осадки переосаждали дважды этанолом, промывали 1—2% НСЮ4 при охлаждении для удаления пуклеотидов и подвергали длительному диализу против растворителя при 0 - | - 1 0 , после чего снова осаждали спиртом, промывали спиртом и эфиром, сушили. Часть препаратов подвергали очистке иа ко­ лонке с ДЭАЭ-сефадексом [207, 209].

Полученные препараты для выяснения однородности были подвергнуты хроматографии на бумаге последовательно в двух растворителях: бутанол, уксусная ледяная кислота, вода (4 : 1 : 5) или бутанол, этанол, ацетат аммония (4 : 1 : 2) в течение суток

при 260, 280 и 290 нм и его изменения при 60° [208, 210]. Приго­ товленные по известным прописям гидролиза™ препаратов в 0,3 и. NaOH, в 6 н. НС1, в 98%-ной муравьиной кислоте пли в хлор­ ной кислоте хроматографировали иа бумаге в указанных разде­ лительных смесях, определяли содержание оснований, вычисляли коэффициенты специфичности [206—210]. Кроме того, в препаратах определяли содержание рибозы 1148], фосфора по Фиске — Субарроу, азота по Кьельдалю и молекулярный вес [209, 211].

При вычислении содержания пурииовых и пиримндииовых оснований в препаратах были использованы известные расчетные коэффициенты [202].

Исходное количество нуклеотпдов в объеме щелочного гидролпзата РЫК, взятого для опыта, составляло 18 мг. Выход синтези­ рованного продукта, измеряемый по сухому весу очищенного продукта, совпадал с определением содержания РЫК по фосфату или рибозе.

87

опытной смеси в среднем составил 7,55 мг, или 42% от исходи ого количества нуклеотидов (18 мг). В одном из опытов исходный гпдролпзат РЫК содержал 0,5 г пуклеотндоп. В результате ин­ кубации было получено 225 мг очищенного продукта, в 50 мкг ко­ торого содержалось 5,2 мкг фосфора.

Выход синтезированного продукта в зпачптелыюй степени изменялся в зависимости от взятого количества основных ин­ гредиентов инкубационной смеси при одном п том же количестве гпдролизата (18 мг на сухой вес) (табл. 9).

88

п осле нейтрализации и соответствующей обработки были исследо­ ваны хроматографией па бумаге в вышеуказанных растворителях. Пятна нуклеотндов (рис. 10) пли оснований, как и пятна соответ­ ствующих свидетелей, обнаруженные в ультрафиолете, вырезали, элюпровали 0,01 н. ЫС1 в течение 20 час. прпО + 1°, подвергали анализу, как указано выше.

Результаты испытаний трех препаратов представлены в табл.

12.

Из данных следует, что во всех препаратах содержались все че­ тыре, присущие РНК основания. Количественные отношения осно­ ваний в разных препаратах оказались различными. По мо­ лярному соотношению оснований синтезированные препараты

дрожжевой РНК, в препарате № 1 оно сильно отличалось от ис­ ходного.

По составу оснований препарат № 2 был близок к составу рас­ творимой -РНК дрожжей, печени. Другие препараты соответство­

эффектом как при нагревании до температуры «плавления» — 60°, так и после щелочного гидролиза. Как известно, светопоглощение

1 Часть измерений выполнена под руководством докт. мед. наук Р. П. Нарцисова, которому приносим здесь искреннюю благодарность.

90

Т а б л и ц а 13 Гнперхромный эффект при нагревании синтезированных препаратов РНК

Т а б л и ц а 14 Гнперхромный эффект после щелочного гидролиза синтезированных

препаратов РНК при -Б^би ~

Данные по этим параметрам для наших препаратов представле­ ны в табл. 13, 141 .

По-видимому, полученные нами синтетические препараты РНК имели неодинаковое содержание отдельных нуклеотидов.

Данные по увеличению светопоглощения (при 260 им) некото­ рых наших препаратов при нагревании растворов до 60° свиде­ тельствуют, что эти препараты, особенно N 2 и 3, обладали вторич­ ной структурой в форме спирали, которая при нагревании развер­ тывалась, что и обусловливало появление гнперхромного эффекта. Остальные препараты, видимо, почти не имели вторичной струк­ туры.

Гнперхромный эффект после щелочного гидролиза был присущ всем нашим препаратам; он был достаточно велик и близок во всех препаратах. Это означало, что первичная структура препаратов довольно однородна, что основания приблизительно в равной степени перекрывали одно другое в цепи полпнуклеотида, расстоя­ ние между их плоскостями укорачивалось. Кроме того, надо при­ нять во внимание, что некоторые наши препараты в растворе 0,14 моля NaCl были весьма склонны к агрегации, вследствие чего при комнатной температуре растворимость их постепенно пони­ жалась.

91