Файл: Обычные Bacillus subtilis 0,70,8x23 Escherichia coli 0,31х16 Staphylococcus aureus 0,51,0 Thiobacillus thioparus 0,5х13 Rickettsia prowazeki 0,30,6x0,82 Мелкие.docx
ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 30.04.2024
Просмотров: 159
Скачиваний: 8
ВНИМАНИЕ! Если данный файл нарушает Ваши авторские права, то обязательно сообщите нам.
Таинственный мир бактерий, риккетсий, вирусов, грибов окружает нас повсюду. Микробы сопровождают нас от рождения до смерти.
В биоценозах человека обитает 1014-1015 микроорганизмов, которые приходятся на 1013 клеток организма. То есть на каждую клетку человека приходится 10-100 микробных клеток.
Нормальная микробная флора ЖКТ насчитывает 500 видов
Несмотря на значительные научные достижения наши знания микромира по-прежнему недостаточны. Из всех существующих на планете микроорганизмов идентифицировано всего лишь 15%.
Микробы – мельчайшие живые существа. Размеры бактериальных клеток исчисляются в микрометрах
Крупные
Achromatium oxaliferum 5-33х15-100
Beggiatoa alba 2-10х1-50
Cristispira pectinis 1,5х36-72
Macromonas mobilis 6-14х10-30
Thiovulum majus 5-25
Spirochaeta plicatilis 0,2-0,7х80-250
Обычные
Bacillus subtilis 0,7-0,8x2-3
Escherichia coli 0,3-1х1-6
Staphylococcus aureus 0,5-1,0
Thiobacillus thioparus 0,5х1-3
Rickettsia prowazeki 0,3-0,6x0,8-2
Мелкие
Mycoplasma mycoides 0,1х0,25
Bdellovibrio bacteriororus 0,3x1,2
Haemobarfonella muris 0,1x0,3-0,7
Wolbachia melophagi 0,3х0,6 Простые методы окраски
Простые и сложные методы окраски микроорганизмов. Способы окраски спор, жгутиков, капсул, включений.
Для окрашивания препаратов пользуются кислыми, щелочными и нейтральными анилиновыми красителями. Наиболее широкое применение нашли основной и кислый фуксин, метиленовый синий, генцианвиолет и везувин.
Простой способ окраски мазков производится водным фуксином Пфейффера и метиленовым синим Леффлера. Готовят водный фуксин из фенолового фуксина Циля, разводя его дистиллированной водой в соотношении 1:10. Состав РАСТВОРА ФУКСИНА ЦИЛЯ: основной фуксин - 1 г; спирт этиловый 96 % - 10 мл; фенол кристаллический - 5 г; глицерин - несколько капель; вода дистиллированная - 100 мл.
Метиленовый синий Леффлера готовят, прибавляя к 30 мл насыщенного раствора метиленового синего (10 г метиленового синего в 100 мл 96 % этилового спирта) 1 мл 1% NaOH или KOH и 100 мл дистиллированной воды.
После окрашивания красители сливают, препарат промывают водой и высушивают между листками фильтровальной бумаги. На сухой мазок наносят каплю масла и микроскопируют с использованием иммерсионного объектива оптического микроскопа. Способность микробов воспринимать красители называется
тинкториальными свойствами.
При окраске щелочным метиленовым синим по Леффлеру (3-5 мин) гранулы волютина у дифтерийных коринебактерий приобретают темно-синий, а палочка - голубой цвет.
Вопрос: метод окраски мазков по Цилю-Нильсену является простым? (Да/Нет)
Сложные методы окраски
При сложных методах окраски мазков применяют два-три различных по цвету красителя, что позволяет дифференцировать микробы и выявить некоторые нюансы в деталях их строения. К таким методам относят окраску по Граму, Цилю-Нельсену, Нейссеру, Бурри-Гинсу, Романовскому-Гимзе и некоторые другие.
При окраске по НЕЙССЕРУ гранулы ВОЛЮТИНА у дифтерийных коринебактерий окрашиваются в сине-черный, а бактерия - в желтый цвет. Мазок окрашивают: 1) 1 мин уксуснокислым метиленовым синим (метиленовый синий - 0,1 г, спирт - 2 мл, ледяная уксусная кислота - 5 мл, дистиллированная вода - 100 мл); 2) сливают краситель и мазок промывают водой; 3) на 20- 30 с наносят раствор Люголя; 4) 1 -3 мин окрашивают везувином (прокипяченная и отфильтрованная взвесь 2 г везувина в смеси 60 мл спирта и 40 мл дистиллированной воды).
Количественное содержание ПЕПТИДОГЛИКАНА, содержащегося в # стенке, определяет характер окраски бактерий и других прокариот по ГРАМУ. Те из них, которые содержат в клеточной стенке большое его количество (около 90 % пептидогликана), окрашиваются по Граму в сине-фиолетовый цвет и их называют грамположительными, все другие, содержащие в оболочке 5-20 % пептидогликана, - в розовый цвет и их называют грамотрицательными. Толщина слоя пептидогликана в клеточной стенке грамположительных бактерий в несколько раз больше, чем у грамотрицательных. Техника окраски по Граму: 1. Фиксированный мазок 1-2 мин окрашивают раствором генцианвиолета (генцианвиолет - 1 г, этанол 96 % - 10 мл, фенол кристаллический - 2 г, вода дистиллированная - 100 мл; по методу Синева его покрывают пропитанной тем же красителем полоской фильтровальной бумаги, которую смачивают 2-3 каплями воды). 2. Слив генцианвиолет (сняв полоску бумаги Синева), мазок 1 мин обрабатывают раствором Люголя и, не промывая водой, сливают его. 3. Обесцвечивают спиртом в течение 0,5 мин, промывают водой. 4. Окрашивают 1-2 мин фуксином Пфейффера. 5. Мазок ополаскивают водой и высушивают.
Для выявления грамположительных КИСЛОТО- И СПИРТОУСТОЙЧИВЫХ микобактерий туберкулеза и лепры, которые из-за большого количества в клеточных оболочках жировосковых веществ, миколовой кислоты и других оксикислот непроницаемы для разведенных растворов красителей, используют окраску по методу ЦИЛЯ - НИЛЬСЕНА. Окрашивание их по этому способу достигается при помощи концентрированного фенолового фуксина Циля с подогреванием над пламенем горелки до закипания и отхождения паров. Окрашенные с применением термокислотной обработки микобактерии не обесцвечиваются слабыми растворами минеральных кислот и этилового спирта. Техника окраски. 1. Фиксированный мазок покрывают полоской фильтровальной бумаги, на которую наносят фуксин Циля, и несколько раз подогревают над пламенем горелки до появления паров, подливая краситель, далее бумагу снимают и промывают водой. 2. Препарат обрабатывают (обесцвечивают) 5 % раствором серной кислоты и промывают водой. 3. На мазок наливают водно-спиртовой раствор метиленового синего, спустя 3-5 мин промывают водой и высушивают. Кислотоустойчивые бактерии окрашиваются в интенсивно красный цвет, остальные виды микробов, обесцвечивающиеся в процессе обработки препарата кислотой, - в светло-синий.
Окраска структурных элементов микробной клетки
Для обнаружения КАПСУЛ бактерий, плохо воспринимающих красители, используют метод БУРРИ-ГИНСА: в каплю туши, разведенной в 10 раз водой, вносят исследуемые бактерии и равномерно распределяют их петлей по предметному стеклу; мазок высушивают, фиксируют (наносят 2-3 капли спирта и сжигают его на стекле), окрашивают в течение 3-5 мин фуксином Пфейффера, промывают водой, высушивают; на темном фоне препарата капсулы видны в виде светлых ореолов вокруг красных бактерий.
О наличии ЖГУТИКОВ чаще всего судят по направленному характеру движения бактерий в раздавленной и висячей каплях. Но можно использовать и некоторые методы окраски, например по МОРОЗОВУ: 1) обработка препарата кислотой, при этом оболочки и жгутики разрыхляются; 2) закрепление разрыхленных структур танином; 3) обработка азотнокислым серебром, оно окутывает каждый жгутик и саму # толстым слоем, давая различные оттенки от жёлтого до тёмно-коричневого.
СПОРЫ. Эндоспоры бактерий выдерживают длительное кипячение, действие горячего воздуха (140-150°С) и химических дезинфицирующих веществ, многие годы сохраняются в почве, на растительности и предметах. Попадая в организм человека и животных, споры патогенных бактерий прорастают в материнские клетки за несколько часов.
Водным фуксином, водно-спиртовым метиленовым синим и по Граму эндоспоры не окрашиваются, так как их плотная многослойная оболочка непроницаема для обычных красителей. В мазках из патологических материалов, культур бацилл и клостридии, окрашенных простыми красителями, споры выглядят в виде бесцветных телец внутри окрашенных в соответствующий цвет вегетативных клеток или вне их. Окрашивать их можно по методу Циля-Нельсена, используя для обесцвечивания мазков после обработки их фуксином Циля не 5%, а 1% серную кислоту. При этом эндоспоры, так же как микобактерии туберкулеза, красятся в розовый цвет и будут хорошо видны на синем фоне бактерий. Для окрашивания спор можно использовать метод по ОЖЕШКО: 1) протравка оболочки споры горячей кислотой; 2) окраска по Цилю-Нильсену.
При исследовании морфологии паразитов крови (спирохеты - бледная трепонема, простейшие - малярийный плазмодий), а т/же ФЭ, используют
окраску по РОМАНОВСКОМУ-ГИМЗА. Краска состоит из смеси азура, эозина и метиленовой сини. Окрашивает ЦИТОПЛАЗМУ в голубой, а ЯДРА в красно-фиолетовый цвет. Этот метод позволяет обнаружить различные цитологические детали.
Мазок для люминесцентной микроскопии готовят обычным образом, фиксируют в ацетоне и наносят на него флюорохром на 20-30 мин. Сделанный препарат промывают проточной водой, покрывают покровным стеклом и микроскопируют.
ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ
По составу питательные среды подразделяются на:
1. Естественные среды состоят из натуральных продуктов животного или растительного происхождения. Основой таких сред являются молоко, яйца, овощи, животные ткани, желчь, сыворотка крови.
2. Синтетические среды -- это такие среды, в состав которых входят только определенные, химически чистые соединения, взятые в точно указанных концентрациях. Синтетические среды могут иметь большой набор компонентов, но могут быть и простыми по составу.
По консистенции среды бывают:
1. Жидкие среды применяют для изучения физиолого-биохимических особенностей микроорганизмов, для накопления биомассы или продуктов обмена микроорганизмов (МПБ).
2. Плотные среды необходимы для выделения и изучения свойств чистых культур микроорганизмов, так как на них можно получить изолированный рост отдельных клеток. Плотные питательные среды (мясо-пептонный агар (МПА)) готовят из жидких посредством добавления к ним агар-агара. Агар-агар (по-малайски -- желе) получают из водорослей.
3. Сухие питательные среды изготовляются в виде сухих порошков, которые хорошо растворяются в воде при комнатной температуре. Чаше всего применяют сухой питательный агар, среду Эндо.
По назначению среды подразделяются на:
1. Универсальные (основные) среды используют для культивирования большинства микроорганизмов. Это мясо-пептонный бульон (МПБ), мясо-пептонный агар (МПА).
2. Специальные среды -- это среды, предназначенные для выявления тех или иных микроорганизмов или получения культуры микроорганизмов, обладающих особыми свойствами. Среди специальных сред различают: элективные (избирательные) и дифференциально-диагностические (индикаторные) среды.
2а. Элективные (селективные) среды
