Файл: Обычные Bacillus subtilis 0,70,8x23 Escherichia coli 0,31х16 Staphylococcus aureus 0,51,0 Thiobacillus thioparus 0,5х13 Rickettsia prowazeki 0,30,6x0,82 Мелкие.docx
ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 30.04.2024
Просмотров: 161
Скачиваний: 8
ВНИМАНИЕ! Если данный файл нарушает Ваши авторские права, то обязательно сообщите нам.
1) патогенные и условно-патогенные (потенциально патогенные) и
2) сапрофиты.
Для их ускоренной предварительной дифференциации учитывают, прежде всего, 3 признака:
а) скорость и условия роста;
б) способность к пигментообразованию;
в) способность синтезировать никотиновую кислоту (ниацин).
Для дифференциации микобактерий на быстро- и медленнорастущие учитывают ряд их биохимических признаков: восстановление нитратов, теллурита; наличие каталазы, уреазы, никотин- и пиразинамидазы, способность синтезировать ниацин; а также пигментообразование.
По скорости роста различают:
1) Быстрорастущие – крупные видимые колонии появляются ранее 7-го дня инкубации (18 видов).
2) Медленнорастущие – крупные видимые колонии появляются после 7-ми и более дней инкубации (20 видов).
3) Микобактерии, которые требуют специальных условий для роста или не растут на искусственных питательных средах. К этой группе относятся 2 вида: M.leprae и М.lepraemurium.
По способности к пигментообразованию различают:
1. образующие пигмент лимонно-желтого цвета при росте на свету.
2. образующие пигмент оранжево-желтого цвета при инкубации в темноте.
3. пигмента не образующие (независимо от наличия света), иногда культуры имеют светло-желтоватую окраску.
Установлено, что микобактериям туберкулеза присуща L-трансформация, т.е. появление форм с дефектом клеточной стенки под влиянием различных причин, в т.ч. и некоторых противотуберкулезных препаратов. У впервые выявленных больных с деструктивным туберкулезом L-формы выявляются также часто, как и бактериальные, а сохраняются в мокроте еще длительное время после исчезновения бактериальных форм. Это позволяет рассматривать L-формы как закономерный этап размножения и существования МБТ в организме. Кроме бактериальной и L-формы микобактериям туберкулеза выявлены и ультрамелкие, фильтрующиеся формы. Они меньше типичных более чем в 20 раз и вегетируют в полостях, которые образуются у больных туберкулезом. При этом они сохраняют вирулентность и способность реверсировать в типичные бактериальные формы.
2.Морфологические и культуральные свойства.
- Микобактерии – прямые или слегка изогнутые палочки длиной 1-4мкм х 0.3-0,6 мкм, встречаются зернистые и ветвящиеся формы. Грам +. Кислото- и щелочеустойчивы, по Цилю-Нильсену окрашиваются в ярко-красный цвет, спор не образуют, жгутиков не имеют. Данные микроорганизмы имеют высокое содержание липидов (воски, фтионовая, туберкулостеариновая и др. жирные кислоты, фосфолипиды и пр.), что придает им кислотоустойчивость.
- Растут данные микобактерии на сложных питательных средах, таких как:
среда Левенштейна-Йенсена (яичная среда с добавлением картофельной муки, глицерина и солей), среда Петраньяни (яичная среда с добавлением молока, картофельной муки, кусочков картофеля и глицерина) и (глицериновый бульон, картофельно-глицериновая среда), синтетическая среда Сотона.
Для подавления посторонней микрофлоры в яичные среды добавляют малахитовую зелень или антибиотики (пенициллины, амфотерицин В, полимиксин и др.)
На плотных средах M.tuberculosis образует морщинистые, суховатые, с неровным краем колонии (R-формы). Для него характерная глицеринофильность (более обильный и быстрый рост на средах с глицерином).
М.bovis для роста не нуждается в глицерине. Культуры растут медленно, образуя небольшие, слегка выпуклые, с изрезанными, но более гладкими, чем у M.tuberculosis краями. Иногда образуют колонии S-типа.
На жидких питательных средах возбудитель туберкулеза растет, образуя пленку. Период генерации у M.tuberculosis равен 14-15 часов. Этим объясняется медленный его рост и длительность выделения культуры. Так для получения роста M.tuberculosis требуется 12-25 дней, а для М.bovis – 24-40 дней. При пересевах культуры вырастают за 10-21 день. Оптимальная температура 37ºС, рН – 7,0.
- Возбудители туберкулеза аэробы, обладают каталазной активностью, которая теряется при температуре +68ºС в течении 10-30 минут в отличие от других микобактерий. Восстанавливают нитраты, обладают уреазой, не способны превращать ниацин в ниацинрибонуклеотид и накапливать его в среде. М.bovis обладает уреазой, не восстанавливает нитраты, не накапливает ниацина, не продуцирует никотинамидазу. Имеют пероксидазу в отличие от некоторых патогенных и атипичных микобактерий.
Таблица 1. Дифференциальные признаки некоторых медленнорастущих видов Mycobacterium
| Признак | M. tuberculosis | М. bovis | M. microti | M. africanum | M. cansasii | M. avium |
| Уреаза | + | + | + | + | + | - |
| Никотинамидаза | + | - | + | + | + | + |
| Пиразинамидаза | + | V | - | + | V | + |
| Восстановление нитратов | + | - | - | - | + | - |
| Синтез ниацина | + | - | + | - | - | - |
| Каталаза 68ºС | - | - | - | - | + | + |
| Образование пигмента | - | - | - | - | ф | - |
| Рост при температуре ºС | | | | | | |
| 25 | - | - | - | - | + | V |
| 37 | + | + | + | + | + | + |
| 40 | + | + | ? | ? | + | + |
(+) – признак положительный; V – признак непостоянный; (-) – признак отрицательный; Ф –фотохромогенный
В настоящее время идентификация бактерий представляет большие трудности. В результате химиотерапии изменились биологические и морфологические свойства возбудителя туберкулеза, а также участились случаи выделения из патологического материала атипичных микобактерий. Некоторые из атипичных микобактерий могут обусловить патологические процессы в легких, лимфатических узлах и других внутренних органах человека. Поэтому идентификация, выделенных из патологических материалов микобактерий имеет не только теоретическое, но и существенное практическое значение.
Различают:
1. Микобактерии человеческого типа (Mycobacterium tuberculosis)
2. Микобактерии бычьего типа (Mycobacterium bovis)
3. Микобактерии птичьего типа (Mycobacterium avium) единичные случаи
4. Атипичные микобактерии
- Каталазная активность определяется у всех микобактерий, а пероксидазная активность только у M.tuberculosis и bovis. Каталаза у этих же бактерий термолабильна (инактивируется при температуре 68ºС в течение 10 минут), а других бактерий термостабильна.
Техника определения каталазы и пероксидазы: берут ex tempore 0,5% раствор пирогаллола + 2% раствор пергидроля и наливают в пробирку с культурой, чтобы покрыть всю культуру. Учет активности каталазы производят через 5 минут по выделению пузырьков кислорода: (+++) – обильное выделение; (++) -умеренное выделение; (+) - единичные пузырьки и (-) – отсутствие реакции (отсутствие каталазы).
Активность пероксидазы оценивают в этих же пробирках через 1,5-2 часа: (+++) – темнокоричневая окраска культуры, (++) - коричневая окраска, (+) – бледнокоричневая окраска, (-) – цвет культуры не меняется.
Определение термостабильности каталазы позволяет дифференцировать патогенные микобактерии от непатогенных и атипичных: для этого 3 петли культуры (3 мг) растворяют в 3 мл дистиллированной воды. 1,5 мл из них прогревают на водяной бане при 68ºС 10 минут, затем охлаждают. На один край предметного стекла наносят каплю прогретой взвеси, на другой – непрогретую. К обеим каплям добавляют по 1 капле 2% пергидроля. Образование пузырьков в прогретой культуре свидетельствует о термостабильности фермента.
3. Эпидемиология и резистентность.
Заражение при туберкулезе происходит воздушно-капельным путем, воздушно-пылевым, алиментарным, контактным и трансплацентарным.
Капельки мокроты больного туберкулезом содержат до 5000 бактерий и заражение происходит вблизи больного около 1,5 метров, иначе они же оседают (воздушно-капельный путь).
Выживание бактерий длительное при высушивании служит предпосылкой для передачи возбудителя через пыль.
Контактный механизм (при поцелуе), а также контактно-бытовой через посуду, полотенце и др. предметы. Возможен путь инфицирования (от беременной к плоду).
Факторы передачи инфекции - длительный контакт с бактериовыделителем, плохие социально-бытовые условия, голодание, иммунодепрессия. Заражение бычьим типом происходит преимущественно алиментарным путем через молоко и молочные продукты.
- В помещениях, в высохших частицах мокроты, загрязняющей предметы, он сохраняет жизнеспособность 2-10 месяцев. В проточной чистой воде бактерии выживают более 1 года, в уличной грязи – 4 месяца, в навозе – 4-5 месяцев. В молочных продуктах сохраняется значительно дольше сроков реализации.
Бактерии туберкулеза устойчивы к кислотам, щелочам и ряду дезинфицирующих средств. Губительна для микобактерий высокая температура: при 90ºС они погибают через 30 минут, при 100ºС – через 2-5 минут. Ультрафиолетовые лучи уничтожают микобактерии в течение нескольких минут.
Бактерии туберкулеза чувствительны к ряду антибиотиков (стрептомицин, канамицин, рифампицини др.) и химиотерапевтическим препаратам (гидразин изоникотиновой кислоты и его производные, парааминосалициловая кислота и др.).
4.Токсинообразование и патогенность.
- Не образуют экзотоксинов, токсическими свойствами обладают многие химические компоненты клетки.
- В патогенном действии имеют значение липиды микобактерий туберкулеза, в частности и фосфалипиды, жирные кислоты, воски.
При внутривенном введении морским свинкам фосфалипидов образуются специфические гранулемы в легких, печени, лимфатических узлах легких. При подкожном введении развивается местная клеточная реакция.
Воск Д (содержит миколовую кислоту) вызывает гранулематозные изменения у здоровых животных на месте введения, в регионарных лимфатических узлах и легких.
Токсическое действие оказывает корд-фактор (гликолипид, состоящий из сахара трегалозы и димиколата). Он высокотоксичен для мышей.
II. ТЕЧЕНИЕ ТУБЕРКУЛЕЗА, ПРОФИЛАКТИКА И ЛЕЧЕНИЕ
1. Патогенез и клиника
- Первичное заражение туберкулезом наступает преимущественно в детском возрасте. Входные ворота: чаще всего органы дыхания, в отдельных случаях кожа. Инкубационный период 20-60 дней. Патогенез складывается из трёх основных этапов: инфицирования, развития первичного очага в каком-либо органе, прогрессирования заболевания с появлением новых симптомов. Проникновение микобактерий в первичный очаг даёт начало процессу взаимодействия макро- и микроорганизма. Одна часть возбудителей остаётся на месте внедрения, другая часть попадает с макрофагами в регионарные лимфатические узлы. Первичный очаг, лимфангиит и регионарный лимфаденит образуют первичный туберкулёзный комплекс. Фагоцитарные реакции незавершённые, поэтому в области первичного туберкулёзного комплекса микобактерии размножаются и, периодически попадая в кровеносные и лимфатические сосуды, разносятся по всему организму. Первичная бактериемия клинически никак не проявляется. Спустя 4-8 недель развивается сенсибилизация, туберкулиновые пробы становятся положительными (вираж). Формируется «нестерильный» иммунитет. У большинства детей и взрослых развивающиеся защитные реакции, которые подавляют инфекционный агент в зоне первичного аффекта, последний постепенно фиброзируется и обызвествляется. В противном случае микобактерии могут распространиться из первичного очага на близлежащие ткани или по току крови в отдалённые органы, вызывая в них прогрессирующие морфологические изменения. Проявлением этого процесса на начальных этапах становятся параспецифические,
аллергические и токсико-аллергические реакции, соответствующие понятию «ранняя туберкулёзная интоксикация».
Особенность туберкулёзной инфекции - длительное (в течение многих лет, а иногда и пожизненное) сохранение жизнеспособного возбудителя в первичном очаге, лимфатических узлах, очагах диссеминации. Ослабление организма, снижение иммунитета при инфекционных (корь, вирусный гепатит, ВИЧ-инфекция) и других заболеваниях приводят к активации, казалось полностью «заживших» очагов.
Туберкулез, развивающийся после полного затихания первичной инфекции, называется вторичным. Возникновение вторичного туберкулеза может быть следствием оживления эндогенной латентной инфекции или результатом экзогенной массивной суперинфекции. В отличие от большинства инфекций туберкулезу свойственно хроническое (годами) волнообразное течение. Чаще поражаются легкие, но могут быть поражены лимфоузлы, почки, кости и др. органы и ткани.
- В соответствии с существующей классификацией 1973 г., принятой на VIII Всесоюзном съезде фтизиатров, выделяют 3 группы основных клинических форм туберкулёза.
* Группа I. Туберкулёзная интоксикация у детей и подростков.
* Группа II. Туберкулёз органов дыхания (первичный туберкулёзный комплекс, туберкулёз внутригрудных лимфатических узлов, диссеминированный туберкулёз лёгких, очаговый туберкулёз лёгких, прочие формы).
* Группа III. Туберкулёз других органов и систем (туберкулёз мозговых оболочек и ЦНС, туберкулёз костей и суставов, туберкулёз мочевых и половых органов, туберкулёз кишечника, прочие формы).
2.Иммунитет и лабораторная диагностика.
- Основу противотуберкулезного иммунитета составляют 2 клеточные иммунные реакции – иммунный фагоцитоз, осуществляемый активированными макрофагами и гиперчувствительность замедленного типа, что реализуется с участием эффекторных Т-лимфоцитов.
- Диагноз туберкулёза основывается на клинико-анамнестических и лабораторных данных (бактериоскопическое, бактериологическое, серологическое исследования, ПЦР), определении чувствительности к туберкулину и результатах инструментальных исследований.
1. Бактериоскопический метод
1) окраска по Цилю-Нильсену;
2) люминисцентная микроскопия: окрашивают аурамином 1:1000 обесцвечивают солянокислым спиртом и докрашивают кислым фуксином.
