Гомогенизации

(1% раствор NaOH, 10-15мин встряхивают. Нейтрализуют 10% NaCl или 30% уксусной кислотой и центрифугируют);

Флотации

(гомогенизируют мокроту 30мин на водяной бане при 55ºС. Затем добавляют 1-2 капли ксилола. 10мин встряхивают, отстаивают 20мин и наносят на нагретое стекло).

2. Основной метод - бактериологический позволяет определить 20-100 микробных клеток, определить их устойчивость к лекарственным препаратам, вирулентность, типовую принадлежность.

К исследуемому материалу приливают двойной объем 6% серной кислоты, встряхивают 10мин, центрифугируют, сливают и осадок нейтрализуют добавлением 1-2 капель 3% NaOH (едкого натра) или отмывают физиологическим раствором (убивают кислоточувствительные микроорганизмы) – после чего посев на специальные среды (растут медленно).

Используют ускоренные методы:

1)                Метод микрокультур (метод Прайса). Наносят толстым слоем материал на стекло, обрабатывают 5мин 6% серной кислотой, удаляют кислоту физиологическим раствором. Препараты помещают во флаконы с цитратной кровью. Посевы ставят в термостат. Через 48-72ч препарат извлекают, фиксируют и окрашивают по Цилю-Нильсену.

2)                Глубинный рост в гемолизированной крови (метод Школьниковой). В пробирки с цитратной кровью сеют материал, обработанный серной кислотой и промытый изотоническим раствором хлорида натрия. Через 6-8 дней пребывания в термостате среду центрифугируют и из осадка делают мазки.

Исторически сложилось, что питательные среды на яичной основе (Левенштейна-Йенсена, Финна-2, среда Новая, Огавы) получили наибольшее распространение среди плотных питательных сред для выделения M.tuberculosis. Однако появившиеся в последние годы агаровые среды Миддлбрука (агар 7Н10, 7Н11) позволяют быстрее обнаружить рост микобактерий (от 2 до 4 недель) и обеспечивают лучшие возможности для изучения морфологии культур, чем на яичных средах.

Культуральная диагностика туберкулеза переживает в настоящее время принципиальные изменения, связанные с внедрением в практику полностью автоматизированных систем культивирования микобактерий туберкулеза.

3. Биологический метод:

 используют для определения вирулентности – заражают морскую свинку, через 6 недель производят пробу Манту и забивают через 4 месяца (о вирулентности судят по количеству бугорков во внутренних органах, продолжительности жизни животных, уменьшению массы)

---

4. Аллергологический:

* проба Манту с туберкулином для определения инфицированности людей внутрикожно, учет через 24-48-72 ч.

< 1мм – отрицательный

2-4мм – сомнительный

> 5 мм - положительная

5. Серологический метод:

РСК, РНГА Миддбрука-Дюбо, реакция агглютинации.

Радиоимунный метод, иммуноблотинг, реакция агрегат- гемагглютинации (для обнаружения ЦИК).

Среди современных методов серодиагностики туберкулёза наибольшее распространение получили иммуноферментный и радиоиммуный анализы (ИФА и РИА).

6. Молекулярно-генетический метод. Говоря о современных методах диагностики туберкулёза, нельзя не упомянуть о методе полимеразной цепной реакции (ПЦР или PCR). Это высокоспецифичный и чрезвычайно чувствительный тест, с помощью которого принципиально возможно идентифицировать в анализируемой пробе наличие даже одной-единственной молекулы ДНК возбудителя.

Определение чувствительности к антибиотикам методом дисков и методом серийных разведений. Развитие современных технологий позволило более полно изучить геном микобактерии. Существует несколько подходов для определения генетических основ резистентности возбудителя туберкулеза. Оптимальным соотношением чувствительности, специфичности, себестоимости и трудоемкости проведения анализа отличается технология биочипов.

 

3.Профилактика и лечение туберкулеза.

 

- Специфическая профилактика: БЦЖ (вакцина получена Кальметтом и Гереном). Ученые 13 лет культивировали возбудитель в глицериново-картофельной среде с добавлением желчи, 230 пересевов. Обладает протективными и аллергизирующими свойствами.

Вакцинируют в/к детей в роддоме на 5-7 день, а затем ревакцинация лицам с отрицательной туберкулиновой пробой с интервалом 5-7 лет до 30 летнего возраста.

---

§    Химиопрофилактика (изониазид в суточной однократной дозе 10 мг/кг).

- Основа лечения - этиотропная химиотерапия. Её проводят с учётом возраста ребёнка, его анатомо-физиологических особенностей, формы и активности туберкулёзного процесса.

Химиотерапию начинают немедленно после установления диагноза, проводят длительно и непрерывно. Обычно назначают комбинацию из 2-х и более лекарственных средств. Противотуберкулёзные препараты классифицируют в зависимости от их эффективности.

·                     I группа (максимальная эффективность) – парааминосалициловая кислота (ПАСК), гидрозид изоникотиновой кислоты (ГИНК) – изониазид (тубазид), фтивазид и др. и препараты группы стрептомицина (рифампицин).

·                     II группа (средняя эффективность) – циклосерин, канамицин, флоримицин, рифампицин, биомицин (флоримицина сульфат), этамбутол, этионамид, протионамид, пиразинамид.

·                     III группа (умеренная эффективность) - аминосалициловая кислота (натрия пара-аминосалицилат).

III. СВОЙСТВА МИКОБАКТЕРИЙ ЛЕПРЫ

 

Лепра – хроническая генерализованная инфекционная болезнь, характеризуется поражением кожи, слизистых оболочек, периферической нервной системы и внутренних органов, вызывает M. leprae – открытая Гансеном в 1874 году в соскобе с поверхности разреза узла больного лепрой.

1.Морфологические и культуральные свойства.

 

M. leprae - прямые и изогнутые палочки с закругленными концами и колбовидными вздутиями 1-8мкм х 0,3-0,5мкм, встречаются разветвлено-сегментированные и зернистые формы.

В тканях расположены внутриклеточно в виде «пачек сигар», образуют большие округлые скопления  (лепрозные шары или глобулы). Спор и капсул не образуют, жгутиков не имеют, Грам+.

Содержат миколовую и лепрозиновую кислоты, кислотоустойчивы. Красятся по Цилю-Нильсену.

Размножение не наблюдается на питательных средах. Данный микроорганизм размножается при заражении мышей в мякоть подошвы лапки, время генерализации 20-30 дней. Много  M.leprae получается при заражении девятипоясных броненосцев.

Обладают цитохромоксидазой, щелочной фосфатазой, фенолоксидазой, пероксидазой и др. ферментами

Имеют 2 антигена: термостабильный полисахарид и термолабильный белок, который является специфичным.

---

 

 

 

2.Эпидемиология.

Резервуаром и источником заболевания является больной человек. Заражение происходит воздушно-капельным путем или при длительном контакте (семейном). В мире приблизительно 3 млн. больных. Заболевание встречается в Азии, Африке, Европе (Испания, Португалия).

3.Клиника и патогенез.

M. Leprae, попавшие на слизистые верхних дыхательных путей или поврежденную кожу разносятся лимфо- и гематогенным путем по всему организму во внутренние органы.

Инкубационный период 3-5 лет (иногда 20-30 лет) Протекает хронически. Различают: 1) лепроматозную форму – наиболее тяжелая – поражается кожа, слизистые, лимфатические узлы, нервная система, внутренние органы. Вначале высыпания на коже носят характер симметрично расположенных (на лице, разгибательных поверхностях кистей рук, предплечий, голеней и ягодицах) пигментных пятен, которые в течение длительного времени остаются без изменений, но чаще превращаются в инфильтраты, или лепромы. Последние обычно локализуются на лице, а также на кистях, голенях, бедрах, спине, ягодицах. При диффузной инфильтрации кожи лица формируется «львиная морда»: морщины и складки углубляются, нос утолщается, щеки, губы и подбородок приобретают дольчатый вид. На поздней стадии лепры у больного – множественные лепромы, выпадение бровей и ресниц, парезы, параличи, «львиная морда», изуродованные пальцы и др. нарушения

2) туберкулоидная форма характеризуется поражением кожи, периферических нервов и иногда некоторых внутренних органов. Поражение кожи может проявляться в виде одиночных слегка пигментированных пятен, папулезных высыпаний или бляшек, размер которых может варьировать от 1,0-1,5см до обширных очагов. Расположены высыпания ассиметрично. Поражение периферических нервов приводит к нарушению чувствительности, а крупных нервных стволов – к парезу, параличам, контрактуре пальцев, образованию трофических язв и т.п. Данная форма отличается более легким течением.

3) пограничные группы: погранично-туберкулоидная, пограничная и погранично-лепроматозная.

Резкие изменения иммунокомпетентных клеток и в первую очередь Т-системы. Происходят изменения тимус-зависимых зон селезенки и лимфатических узлов, которые замещаются гранулематозной тканью. Отмечается нарушение способности Т-лимфоцитов реагировать на специфические антигены (особенно при лепроматозной форме). Нарушение клеточного иммунитета при лепроматозном типе болезни  проявляется,

---

прежде всего в том, что фагоцитоз имеет незавершенный характер: микобактерии лепры не только не разрушаются макрофагами, но именно в них они активно размножаются. Кроме того лимфоциты у таких больных не подвергаются бласттрансформации и не подавляют миграции макрофагов (у больных туберкулоидным типом эти реакции положительны).

1.     Иммунитет и лабораторная диагностика.

Активность иммунитета определяют с помощью лепроминовой пробы (реакция Мицуды) – кожная реакция. В качестве антигена используют лепромин, его вводят внутрикожно в дозе 0,1 мл. Различают раннюю реакцию (реакция Фернандеса), которую учитывают через 48 ч (гиперемия, небольшая папула) и позднюю (реакцию Мицуды),  которая проявляется через 2-4 недели виде бугорка, узелка, иногда с некрозом. У больных лепроматозной формой поздняя реакция всегда отрицательная, у больных туберкулоидной формой и у большинства здоровых -80-98% - она положительная. При различных формах пограничной лепры реакция Мицуды может быть как положительной, так и отрицательной. Гуморальный иммунитет не нарушен: в крови выявляются аутоантитела, которые играют защитную роль.

Основной метод – бактериоскопический. Исследуемый материал – слизь или соскобы со слизистой оболочки носа, скарификаты из пораженного участка кожи, кусочки пораженного органа или ткани, из которых готовят гистологические срезы. Мазки и срезы окрашивают по Цилю-Нильсену. Для дифференциации M.leprae от M.tuberculosis  используют биологическую пробу на белых мышах, для которых M.leprae не патогенна.

2.     Профилактика и лечение.

Специфической профилактики нет. Неспецифическая – выявление и изоляция больных.

Комплексное использование 2-3 различных антилепроматозных препаратов, а также укрепляющие и стимулирующие иммунную систему средства. Наиболее активные препараты: производные сульфонового ряда – диафенилсульфон, солюсульфон, диуцифон и др.; рифампецин, лампрен, этионамид и др. Курс химиотерапии должен быть не менее 6 мес. 

   Формы микроорганизмов

   Кокковидные -микрококки, диплококки, стрептококки, стафилококки, тетракокки, сарцины 

   Извитые - спирохеты, спириллы 

   Масса микроорганизма ничтожно мала 100 млрд бактерий = 1г.

   Микробы быстро размножаются.

   Для воспроизведения отдельной особи микроорганизма необходимо

---

Смотрите также файлы

• Познавательный компонент.docx

• Невербальная коммуникация. Основные блоки невербальной коммуникации.doc

• Самостоятельная работа по дисциплине Финансовый анализ коммерческих организаций.docx

• Лабораторная работа 4 java аннотация Массивы и циклы Гурьев Данил Сергеевич риз120938у. Прикладная информатика.docx

• Учебнометодическое пособие по выполнению практических работ для студентов по специальности Техническая эксплуатация и обслуживание электрического и электромеханического оборудования.doc