Файл: 1. биопрепараты их применение при вирусных заболеваниях и принципы изготовления.docx
ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 02.05.2024
Просмотров: 34
Скачиваний: 0
ВНИМАНИЕ! Если данный файл нарушает Ваши авторские права, то обязательно сообщите нам.
Для определения типов выделенного вируса ящура при диагностике используют реакцию связывания комплемента (РСК) по 100%-ному гемолизу эритроцитов барана. 6 компонентов (1 - вируссодержащийй материал (афты и их содержимое), 2 - стандартные моноспецифические сыворотки, 3 - сыворотка крови морских свинок, 4 - гемолизин(специфич.антитело на эритроциты барана), 5 - эритроциты барана, 6 - гипоспецифические ящурные антигены в удвоенных титрах для контроля
8. Классификация культуры клеток и её применение. техника получения культур клеток
1. Первично-трипсинизированная культура клеток клетки, полученные из органов или тканей эмбриона, путем разрушения соединительно-тканных мостиков между клетками под действием ферментов (трипсин, панкреатин) с последующим выращиванием в питательной среде in vitro. Используют эмбриональные органы (почки, легкие), т.к. они обладают высокой скоростью роста.
2. Перевиваемые культуры клеток — это клетки, способные к размножению вне организма неопределенно длительное время. В лабораториях их поддерживают путем пересевов из одного сосуда в другой (пассаж).
Получают перевиваемые клетки из первичных культур клеток с повышенной активностью роста путем длительных пересевов. Клетки перевиваемых культур имеют одинаковую форму, гетероплоидный набор хромосом (у первичных клеток он диплоидный), стабильны в условиях роста in vitro, некоторые из них обладают онкогенной активностью. Перевиваемые культуры клеток можно получать как из здоровых тканей животных, так и из опухолевых.
3. Диплоидные культуры клеток - клетки содержат диплоидный набор хромосом и выдерживают до 50-ти пассажей в течение 8-10 месяцев.
4. Суспензионные культуры клеток – это клетки, полученные из органов и тканей, находящихся в питательной среде во взвешенном состоянии при постоянном перемешивании.
5. Органные культуры клеток готовят из органов и тканей путем измельчения их до минимальных размеров (приблизительно 3 мм). Находятся в питательной среде во взвешенном состоянии.
Приготовление культур клеток.
Для приготовления первично- трипсинизированной культуры из кожно-мышечной ткани развивающихся куриных эмбрионов используют 10 суточные куриные эмбрионы. Сначала их овоскопируют, отбирают яйца с подвижными эмбрионами и хорошо выраженными сосудами. Ha скорлупе отмечают границы воздушной камеры и расположение зародыша. Скорлупу над воздушной камерой протирают йодированным спиртом. Стерильными ножницами срезают скорлупу на 2-3 мм выше границы воздушной камеры, разрывают подскорлупную И хорионаллантоисную оболочки и за шейку извлекают эмбрион в стерильную чашку Петри. У эмбриона удаляют голову, лапки, крылья и внутренние органы. Оставшийся кожно-мышечный мешок переносят в стерильную банку и измельчают ножницами на кусочки 3-4 мм.
Измельченную ткань 2-3 раза отмывают раствором Хенкса от слизи и кровяных элементов и переносят в колбу для трипсинизации. В колбу наливают 0,25%-ный раствор трипсина (в соотношении 1:3), вносят стерильный магнитик и ставят на магнитную мешалку.
Трипсинизацию проводят дробно, т.е. через каждые 3-5 мин отделившиеся клетки вместе с трипсином сливают в центрифужные флаконы и помещают на в холод (4°C) для прекращения действия трипсина на клетки. К оставшемуся в колбе содержимому добавляют новую порцию трипсина. После полного истощения кусочков тканей все полученные порции суспензии клеток в растворе трипсина центрифугируют при 600 об/мин 2-3 мин, надосадочную жидкость сливают, а осадок клеток ресуспендируют в теплой (37°C) питательной среде.
После тщательного перемешивания клеток берут 1 мл для подсчета клеток, для определения посевной дозы в камере Горяева
После подсчета клетки разводят питательной средой с таким расчетом, чтобы в 1 мл содержалось от 700 тыс. до 1 млн клеток (для куриных фибробластов).
В пробирки с питательной средой заливают по 2 мл взвеси клеток. Пробирки плотно закрывают стерильными резиновыми пробками и помещают в термостат при 37 °C. Пробирки помещают под углом.
Обычно сплошной монослой куриные фибробласты образуют через 24-48 ч. Культуры клеток куриных фибробластов используют при работе с вирусом болезни Ауески, оспы птиц, ньюкаслской болезни, гриппа птиц и др..
9. Гуморальные факторы противовирусного иммунитета
Иммунную защиту макроорганизма при вирусных инфекциях осуществляет противовирусный иммунитет. Его особенности обусловлены двумя формами: внеклеточной и внутриклеточной. Основными факторами, являются специфические антитела, Т-киллеры, интерферон и сывороточные ингибиторы вирусных частиц. Специфические противовирусные антитела способны взаимодействовать только с внеклеточным вирусом, внутриклеточные структуры прижизненно для них недоступны. Антитела нейтрализуют вирусную частицу, препятствуя ее адсорбции на клетке-мишени, инфицированию и генерализации процесса, и обеспечивают иммунный фагоцитоз «маркированных» вирусных частиц. Специфические антитела также связывают вирусные белки и нуклеиновые кислоты, которые попадают в межклеточную среду и секреты после разрушения зараженных вирусами клеток.
Гуморальные факторы неспецифической защиты. Многочисленны, содержатся в крови и других жидкостях организма человека, вырабатываются Т-лимфоцитами и макрофагами. К ним относят:
Комплемент - неспецифическая ферментная система крови, состоящая из 9 различных протеиновых фракций, адсорбирующихся в процессе каскадного присоединения на комплексе антиген + антитело и оказывающих лизирующее действие на связанные антителами клеточные антигены
Лизоцим - белок, содержащийся в слюне, крови, слезной и тканевой жидкости, активен в отношении грамположительных бактерий, т.к. нарушает синтез муреина в клеточной стенке.
в-лизины - освобождаются из лейкоцитов и более активны по отношению к грамотрицательным бактериям
лейкины - протеолитические ферменты, освобождающиеся при разрушении лейкоцитов и нарушающие целостность поверхностных белков микробных клеток
интерферон - б и в, продуцируются соответственно мононуклеарными фагоцитами и фибробластами и обладают противовирусной активностью
пропердин - комплекс белков, обладающих противовирусной, антибактериальной активностью в присутствии солей магния, вызывая лизис микроорганизмов и усиливая фагоцитарную реакцию и воспалительный процесс
эритрин - обладает ингибирующим действием на коринебактерии дифтерии и высвобождается при разрушении эритроцитов
нормальные антитела - обнаруживаются в крови новорожденных в очень низких титрах, обладают цитофильным действием, уровень их возрастает под действием микроорганизма как пускового сигнала.
10. Вирус инфекционного трансмиссивного гастроэнтерита свиней
Инфекционный гастроэнтерит свиней) — остро протекающая, высококонтагиозная болезнь. Поражает главным образом поросят до 3-месячного возраста. Проявляется рвотой, тяжелой диареей и высокой смертностью среди поросят до 2-недельного возраста.
Характеристика возбудителя. Вирус относится к семейству Coronaviridae роду Coronavirus. Вирионы полиморфны, Вирион содержит геном в виде односпиральной плюс-РНК и капсида кубического типа симметрии. Нуклеокапсид покрыт оболочкой с булавовидными отростками (пепломерами), которые и придают оболочке вид солнечной короны. Оболочка вириона клеточного происхождения.
Устойчивость к физико-химическим воздействиям. Вирус чувствителен к эфиру, хлороформу, но устойчив к трипсину. Хорошо инактивируется дезинфицирующими растворами, устойчив к замораживанию (сохраняется до 8 нед).
Антигенная активность ВИГС выражается способностью индуцировать синтез вируснейтрализующих антител, активность которых после переболевания обусловлена IgA, а после иммунизации — IgG. Вирусный нуклеопротеин (N) не способен индуцировать синтез вируснейтрализующих антител.
Пассивный иммунитет поросят против кишечной инфекции обусловлен получением IgA с молозивом и молоком, в которых титр антител выше, чем в сыворотке крови свиноматок. Высокий уровень IgA в молозиве и молоке обнаруживают только после поедания свиноматками вируссодержащего материала. Поросята в течение нескольких недель могут получать IgA с молозивом и молоком от свиней-реконвалесцентов.
Культивирование вируса. Лабораторные животные к вирусу нечувствительны. Естественно-восприимчивые животные, лучше поросята-сосуны в возрасте 1 — 15 дней, легко заражаются введением вируса интраназально.
Клинические признаки. Инкубационный периоду 1 — 15-дневных поросят длится всего 12—18 ч.. С возрастом животных инкубационный период увеличивается, смертность уменьшается. У больных кормящих свиноматок снижается продукция молока. Высокую чувствительность новорожденных к вирусу ИГС связывают со снижением у них и у свиноматок при опоросе цитотоксичности лимфоцитов в отношении клеток, инфицированных вирусом. В этих условиях поросята могут быть защищены только антителами матери, полученными с молозивом и молоком.
Различают три стадии болезни: предклиническую, клиническую и выздоровления. В предклинической стадии наблюдают снижение аппетита, сонливость, повышенную жажду..
Клинический период характеризуется сильной диареей с выделением газов. Фекалии серо-красного или желто-зеленого цвета.
У свиноматок, зараженных при контакте с больными поросятами, повышается температура тела, исчезает аппетит. Патологоанатомические изменения. У поросят-сосунов, павших в первые 3 дня жизни, в желудке и тонком кишечнике находят свернувшееся молозиво, набухание и покраснение слизистой. Труп поросят 2-недельного возраста истощен, слизистые бледные..
Источник инфекции. Основной источник ИГС —Инфекцию могут распространять собаки и лисицы, которые являются инапарантным (бессимптомным) источником для свиней. Вирус может передаваться и домашними мухами, в тонком кишечнике которых его можно обнаружить в течение 3 мес, а в органах дыхания — до 11 дней.
Диагностика. Диагноз ставят на основании анализа эпизоотологических данных, симптомов болезни и результатов лабораторных исследований.
Патологический материал для лабораторных исследований берут от 8—9 больных поросят (2—3 поросенка из помета) в начальной стадии проявления клинических признаков болезни. Берут отрезок тощей или подвздошной кишки длиной 10—12 см с содержимым, мезентериальные лимфатические узлы.
Для выделения вируса поросят убивают через 24 ч после появления диареи, и полученные от них материалы подвергают вирусологическому исследованию.
Идентификацию выделенного вируса проводят: гистологическими исследованиями. Обнаруживают атрофию ворсинок в тонком кишечнике; в цитоплазме эпителиальных клеток выявляют вакуоли;
РИФ; PH в культуре клеток и на восприимчивых поросятах в возрасте 1—5 дней; твердофазным ИФА с использованием моно — и поликлональных антител.
11. Вирус африканской чумы свиней Вирус африканской чумы свиней - контагиозная болезнь свиней, характеризующаяся лихорадкой, геморрагическим диатезом и некродистрофическими изменениями паренхиматозных органов. Семейство -Asfarviridae, содержит ДНК. Вирионы округлой формы, состоят из плотного нуклеотида, двухслойного икосаэдрического капсида и наружной оболочки. Двухслойный капсид из 1892–2172 капсомеров; тип укладки капсомеров кубический. Устойчивость. Вирус исключительно устойчив в широком диапазоне температур и рН среды, включая высушивание, замораживание и гниение, поэтому длительно сохраняется во внешней среде .