Файл: 1. биопрепараты их применение при вирусных заболеваниях и принципы изготовления.docx
ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 02.05.2024
Просмотров: 24
Скачиваний: 0
ВНИМАНИЕ! Если данный файл нарушает Ваши авторские права, то обязательно сообщите нам.
Гемагглютинирующие свойства. Гемагглютинин вируса сорбируется на мышиных эритроцитах при температуре 4, 22 и 37 °С.
Диагностика. Диагноз ставят на основании эпизоотологических данных, клинических признаков,
Для лабораторной диагностики от больных свиней направляют носовые секреты, плоды и плаценту от абортировавших животных. От трупов являются миндалины, головной мозг, кусочки легких,. От латентно инфицированных свиней вирус может быть выделен из ганглиев тройничного нерва.
Лабораторная диагностика. Индикацию вируса в патологическом материале можно проводить с помощью экспресс-методов (ПЦР, РИФ, РИГА, ИФА) и биопробой.
-
(ПЦР) как метод индикации вируса обладает 100%-ной чувствительностью и 94,2%-ной специфичностью. -
РИФ дает возможность видеть при малом увеличении широкие полоски флуоресцирующих нейронов коры головного мозга с отдельными флуоресцирующими клетками. -
РИГА при использовании эритроцитарного иммуноглобулинового диагностикума обнаруживают вирусный антиген. -
ИФА прямым иммунопероксидазным методом обнаруживает антиген вируса болезни Ауески в мазках-отпечатках из мозга и слизистой оболочки гортани.
Активный вирус в патологическом материале можно обнаружить путем биопробы на лабораторных животных и в культуре клеток. Из лабораторных животных наиболее чувствительны к вирусу кролики массой 2—2,5 кг, которым внутримышечно или подкожно вводят по 1 мл 10%-ной суспензии исследуемого материала. Биопробу считают положительной, если кролики погибают с признаками болезни Ауески (нервная форма, зуд, расчесы) через 2—10 дней после заражения. Если кролики погибают без признаков болезни, биопробу повторяют, используя патологический материал второго пассажа. Гибель кроликов при биопробе без признаков зуда и расчесов может свидетельствовать о выделении вакцинных штаммов вируса болезни Ауески.
Материалом для выделения вируса от погибших кроликов служат ткани головного и спинного мозга, а также паренхиматозные органы (легкие, печень).
Биопроба в первично-трипсинизированных культурах клеток (почек и щитовидной железы свиней, семенников телят, фибробластов КЭ), перевиваемых культурах клеток (РК-15, ВНК-21) эффективна даже при диагностике атипичного течения болезни, при которой биопроба на кроликах может дать отрицательный результат.
Идентификацию выделенного вируса осуществляют PH в той же живой системе, на которой был выделен вирус. Могут быть использованы более быстрые методы идентификации: РИГА, РИФ, РДП, ИФА.
Дифференциальная диагностика. Болезнь Ауески у свиней следует дифференцировать от болезни Тешена, чумы, бешенства, гриппа, сальмонеллеза, отечной болезни, пастереллеза, стрептококкоза, гипогликемии, солевого отравления, аскаридоза, авитаминоза.
Специфическая профилактика.
Для специфической профилактики болезни Ауески у животных многих видов в нашей стране применяют живые вакцины (ВГНКИ, штаммы БУК 628 и УНИИЭВ-18) и инактивированную культуральную вакцину. Живые вакцины, в отличие от инактивированных, обеспечивают напряженный клеточный и относительно слабый гумморальный иммунитет. С учетом этого строится стратегия специфической профилактики.
16.Диагностика вируса бешенства
Бешенство (Rabies, Lyssaгидрофобия – острая инфекционная болезнь теплокровных, вызываемая нейротропным вирусом. Одна из самых опасных и тяжелых инфекционных болезней человека и животных. Протекает болезнь с признаками поражения центральной нервной системы, характеризуется необычным поведением, непровоцируемой агрессивностью и параличами. Возбудитель болезни - относительно крупный РНК – содержащий вирус семейства Rhabdoviridae, род Lyssavirus его удается обнаружить в таких органах, как молочная железа, селезенка, почки. Культивируется вирус в живых клетках, для накопления больших количеств вируса животных заражают непосредственно в мозг. В последнее время вирус адаптировали к куриным и утиным эмбрионам. Изменчивость - одно из важнейших биологических свойств вируса бешенства.
Диагностика бешенства Диагноз бешенства ставится на основании следующих данных:
Наличие контакта с больным или неизвестным животным за последний год (учитываются укусы животных и другие возможные контакты со слюной, обработка шкур животных и пр.)
Наличие симптомов, характерных для бешенства. Результаты анализов на бешенство у подозрительного животного (если оно было поймано). Результаты анализов на бешенство у человека.
В диагностике бешенства используются следующие методы:
Обнаружение антител против вируса бешенства возможно в коже человека (для этого анализа производится биопсия — берут участок кожи с задней поверхности шеи), либо в отпечатке с роговицы глаза. жидкости также показывает повышение уровня моноцитов.
17. РАЗМЕРЫ ВИРУСОВ И СПОСОБЫ ИХ ИЗМЕРЕНИЯ
. Вирусы – мельчайшие формы, значительно более мелкие, чем бактерии, и едва превышающие крупные молекулы. Они находятся на границе или за пределами видимости в оптических микроскопах. Размеры их составляют тысячные доли микрона и весьма варьируют у разных вирусов: у мельчайших (ящур, полиомиелит) – около 10-25 нм, у средних (грипп, парагрипп и др.) – 100-120 нм, у крупных (оспа, орнитоз, трахома) – превышают 200 нм. Благодаря ничтожности размеров вирусы проходят через все мелкопористые бактериальные фильтры. Массу вирусов измеряют в дальтонах, а размер – в нанометрах.
Титр вируса ‒ это количество вируса, содержащееся в единице объема материала. Поскольку количество вируса невозможно выразить в обычно применяемых (объем, масса и т. п.) единицах, прибегают к измерению в единицах действия или единицах активности. Вирусы обладают инфекционным и гемагглютинирующим действием. Отсюда и единицы количества вирусов инфекционные и гемагглютинирующие. Размерность этих единиц зависит от соотношения полноценных и неполноценных вирионов в используемой суспензии, объекта, способа титрования и других факторов. В практике нашли применение три типа единиц количества вируса:1-й − инфекционные единицы локальных повреждений, вызываемых вирусами и оцениваемых по единичному эффекту; 2-й − инфекционные единицы 50% действия вирусов на чувствительные живые объекты, оцениваемые статистически; 3-й – гемагглютинирующие единицы.
18. СЕМЕЙСТВО КОРОНАВИРУСЫ И ЕГО ПРЕДСТАВИТЕЛИ
Коронавирусы – семейство вирусов, объединяющее РНК-содержащие плеоморфные вирусы средней величины, включает 2 рода: Coronavirus и Torovirus. Диаметр различных коронавирусов варьирует от 80 до 220 нм. Для них характерно наличие оболочки с ворсинками более редкими, чему вируса гриппа. Ворсинки прикрепляются к вириону посредством узкого стебля и расширяются к дистальному концу, напоминая солнечную корону во время затмения (отсюда название семейства). Коронавирусы размножаются в цитоплазмеинфицированных клеток. При этом дочерние вирионы появляются через 4—6 часов после инфицирования.
Всем коронавирусам присуща способность фиксировать комплемента присутствии гипериммунных сывороток или сывороток, полученных от переболевших. Во внешней среде нестойки, разрушаются при температуре 56°С за 10—15 минут.
Культивирование. Используют культуру клеток почек плода КРС, обезьян и новорожденных телят, не получающих молозива.
Антигенные свойства. У коронавирусов сложный антигенный состав, они способный индуцировать выработку вируснейтрализующих, преципитирующих и антигемагглютинирующих антител.
Типовым видом коронавирусов принято считать вирусинфекционного бронхита птиц. В семейство коронавирусов также входят коронавирусы кошек, собак, гастроэнтерита свиней, гепатита мышей, а также человека.
19. РТГА
Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) основана на том, что антител при взаимодействии с гомологичными антигенами гемагглютинирующих вирусов образуют комплекс антиген-антитело, в котором вирус утрачивает и инфекционную, и гемагглютинирующую активность, поскольку блокируются белки, ответственные за гемагглютинацию. Индикатором в реакции являются эритроциты определенного вида животных, что зависит от вида гемагглютинирующего вируса.
Признак положительной реакции – отсутствие гемагглютинации, поскольку специфические антитела полностью блокируют гемагглютинирующую активность гомологичного вируса.
РТГА можно ставить в 96-луночных планшетах с U- или V-образным дном в двух форматах: для идентификации вируса и для обнаружения антител в сыворотке.
Для идентификации вируса в лунках планшета к последовательным двукратным разведениям вируса добавляют специфическую сыворотку в постоянной рабочей концентрации.
Для обнаружения и определения титра антител пробы исследуемой сыворотки предварительно освобождают от термолабильных и термостабильных ингибиторов общепринятыми способами, а затем к последовательным двукратным разведениям добавляют гомологичный антиген с рабочим гемагглютинирующим титром. В обоих случаях после контакта вносят индикатор 0,5-1 % взвесь эритроцитов, результат реакции учитывают визуально по наличию осадка не агглютинированных эритроцитов на 2 лунки – «пуговки».
К достоинствам РТГА относят ее высокую специфичность, простую технику постановки и возможность ранней диагностики болезней. Однако эта реакция используется только для идентификации гемагглютинирующих вирусов. Кроме того, она не относится к экспресс-методам, поскольку перед ее постановкой требуется провести индикацию гемагглютинирующего вируса методом капельной реакции гемагглютинации.
20. ИСТОЧНИКИ И МЕТОДЫ ПОЛУЧЕНИЯ ВИРУСОСОДЕРЖАЩЕГО МАТЕРИАЛА
Не так много времени прошло с тех пор, когда восприимчивые животные были единственным источником получения вирусосодержащего сырья для изготовления биопрепаратов, что тормозило развитие исследований по совершенствованию технологии производства вакцин. В настоящее время в ветеринарной практике используют несколько вакцин, изготовленных из вирусного материала от животных (живая вакцина против африканской чумы лошадей, бешенства и некоторые другие).
Значительных успехов производство вирусного сырья достигло после внедрения метода выращивания вирусов в развивающихся куриных эмбрионах. В последние годы почти третья часть выпускаемых в мире вакцин готовится с использованием этих объектов. Однако наиболее перспективные и прогрессивные – способы выращивания вирусов в культурах клеток.
Вакцины классифицируют в зависимости от состояния в них вируса, характера биологической системы, видовой принадлежности штамма вируса, количества типов или видов вирусов, входящих в состав вакцины, и физического состояния препарата.
I. В зависимости от состояния вируса вакцины подразделяют:
1) на живые (вирус-вакцины); в их состав входят живые ослабленные (аттенуированные) вирусы;
2) инактивированные (убитые); вирус инактивирован с помощью физического или химического воздействия.
II. В зависимости от характера биологической системы различают:
1) тканевые вакцины изготовляют из ткани зараженных восприимчивых животных. Например, овец заражают фиксированным штаммом вируса бешенства для накопления вируса в мозговой ткани; после их убоя вакцину готовят из мозговой ткани;
2) лапинизированные вакцины готовят из тканей крольчат, зараженных адаптированным к ним вакцинным штаммом. Они близки ктканевым вакцинам. Таким методом получают вакцины против ящура, классической чумы свиней;
3) авианизированные (эмбрион) вакцины готовят из эмбриональных жидкостей и тканей развивающихся эмбрионов птиц (кур, реже уток, японских перепелов), зараженных вакцинным штаммом;
4) культуральные вакцины готовят из зараженных вирусом переживающих тканей и культур клеток.
III. В зависимости от видовой принадлежности штамма вируса вакцины подразделяют:
1) на гомологичные, содержащие тот вид вируса
