Файл: Новые методы анализа аминокислот, пептидов и белков..pdf

Скачать файл (25,37Мб)

Заказать решение

ВУЗ: Не указан

Категория: Не указан

Дисциплина: Не указана

Добавлен: 14.10.2024

Просмотров: 114

Скачиваний: 0

ВНИМАНИЕ! Если данный файл нарушает Ваши авторские права, то обязательно сообщите нам.

	СОДЕРЖАНИЕ			459
4.6.3.	Масс-спектрометрия как средство	контроля чистоты		226
4.7.	синтетических пептидов .....................................................		хи	226
4.7.	Возможности и ограничения масс-спектрометрии в		хи	229
	мии пептидов............................ ..........................................			229
	Список литературы...............................................................			231
Глава 5.	ХРОМАТОГРАФИЯ БЕЛКОВ НА МОЛЕКУЛЯРНЫХ			236
	СИТАХ. С. Хьёртен.............................	....................... -	-	236
5.1.	Введение.................................................................................			233
5.2.	Терминология........................................................................			237
5.3.	Механизм разделения.........................................................			238
5.3.1.	Принцип эксклюзии..............................................................			238
5.3.2.	Принцип ограниченной диф ф узии	.................................		239

5.3.3.Гипотеза, основанная на осевой миграции частиц в ла

минарном потоке...................................................................

240

5.3.4.Гипотеза, основанная на использовании распределения

	Больцмана.............................................................................	240
5.3.5.	Анализ термодинамики процесса......................................	241

5.4.Замечания относительно механизма разделения по

принципу молекулярных с и т ...........................................

242

5.5.Определение размеров молекул методом молекуляр

ных с и т .................................................................................

243

5.6.Факторы, определяющие эффективность разделения на

	колонках, заполненных		гелем ...........................................	244
5.6.1.	Высота	колонки.........................		246
5.6.2.	Влияние	факторов R и	A R ................................................	246

5.6.3.Зависимость разрешения от диаметра частиц геля . . 249

5.6.4.Зависимость разрешения от скорости элюирования . . 250

5.7.	Техника гель-фильтрации..........................................		250
5.7.1.	Выбор типа г е л я ...................................................................		250
5.7.2.	Конструкция колонки ..........................................................	;	251
5.7.3.	Заполнение колонок........................	;	252
5.7.4.	Внесение образца...................................................................		252
5.7.5.	Элюирование........................................................................	материала в элюате	253
5.7.6.	Анализ распределения	материала в элюате	253

5.7.7.Поддержание постоянной скорости элюирования . . . 253

5.8.	Применение молекулярных с и т ......................................		254
	Список литературы..............................................................		254
Глава 6.	ГЕЛЬ-ФИЛЬТРАЦИЯ В ТОНКОМ СЛОЕ И ЕЕ МО
	ДИФИКАЦИИ. Б. Г. Иоханссон......................................		256
6.1.	Методика	гель-фильтрации в тонкомсл о е ......................	256
6.1.1.	Подача элюента...................................................................		256
6.1.2.	Качество	суспензии..............................................................	257
6.1.3.	Нанесение	с л о я ...................................................................	258
6.1.4.	Аппаратура............................................................................		258
6.1.5.	Нанесение образца и маркеров; скоростьэлюирования		259
6.1.6.	Обнаружение в тонком слое г е л я .................................		260
6.2.	Область	применения.........................................................	263
6-2.1.	Применения в различных областях биохимии (исклю		263
6-2-2.	чая биохимию белков).........................................................		263
6-2-2.	Тонкослойная гель-фильтрация в биохимии белков . .		263
6-2-3.	Определение молекулярного веса.......................................		267

460	СОДЕРЖАНИИ
6.2.4.	Дальнейшее развитие м етода ...........................................	268

6.3.Электрофорез в тонком слое и его сочетание с гель-

	фильтрацией ............................................................................	268
6.4.	Иммуно-гель-фильтрдция...................................... ....	, , 271

6.4.1.Иммунодиффузия . .............................................................. 271

6.4.2.	Иммунологическая количественная оц ен к а ...................	272
6.4.3.	Область применения..............................................................	274
	Список литературы...............................................................	275
Глава 7.	МИКРОЭЛЕКТРОФОРЕЗ КАК МЕТОДОПРЕДЕЛЕ
	НИЯ И КОНТРОЛЯ ЗА БИОСИНТЕЗОМ БЕЛКА
	НА УРОВНЕ 10-7—Ю-9 г. X. Хидён, Р. В. Ланге . .	277

7.1.Приготовление образцов клеточного материала . . . 278

7.1.1.

Выделение нервных клеток и глий...........................

278

7.1.2.Образцы, выделенные из областей мозга, содержащих

	гомогенные клетки ........................................................	280
7.1.3.	Гомогенизация..................................................................	281

7.2.Приготовление капилляров и полимеризация гелей . . 281

7.2.1.	Полимеризация	нижнего г е л я .....................................	282
7.2.2.	Полимеризация верхнего г е л я ....................................		283
7.3.	Электрофорез...................................................................		283
7.3.1.	Экструзия геля	и окрашивание белка.......................	286

7.4.Радиометрическое определение белковых фракций . . 286

7.5.Определение белка методом интерференционной ми

кроскопии

287

7.6.Поправка на изменения в концентрациипредшествен

7.7.

Глава 8.

8. 1.

8.1.1. 8.1.2.

8.1.3.

8.1.4.

8.1.5.

8. 1.6.

8.2.

ников	292
Применение.......................	294
Список литературы........................................................	296
ЭЛЕКТРОФОКУСИРОВАНИЕ БЕЛКОВ. К. В. Ригли	297
Введение .................................................................................	297
Основные понятия ..............................................................	297
Сущность электрофокусирования......................................	298
Количественная оценка ........................................................	299
Искусственный градиент p H ...............................................	300
Естественный градиент p H ...............................................	300
Синтетические амфолиты.....................................................	301
Электрофокусирование в градиенте плотности . . .	302

8.2.1.Колонка конструкции Вестерберга и Свенссона . . . 303

8.2.2.

8.2.3.

8.2.4.

8.2.5.

8.2.6.

8.2.7.

8.2.8.

8.2.9.

8.3.

8.3.1.

8.3.2.

8.3.3.

8.3.4.

Синтетические амфолиты-носители..................................		-	303
Вспомогательное оборудование..........................................		-	304
Методика.................................................................................			306
Выбор условий эксперимента..........................................			308
Результаты и пути применения......................................		:	314
Приборы иного	т и п а ....................................................	:	318
Разрешение.............................................................................	полученных величин		319
Достоверность	полученных величин		319
Электрофокусирование в гел е ...........................................			320
Сущность метода.............................			321
Аппаратура .............................................................................		■	322
Методика .........................................................		■	324
Выбор услбвий .эксперимента...........................................			327

	СОДЕРЖАНИИ	461
8.3.5.	Результаты и область применения.................................	334
8.3.6.	Электрофокусирование на бумаге......................................	336

8.4.Электрофокусирозание и другие методы фракциониро

вания ...................

,.................................................................

337

8.4.1.Основы фракционирования электрофокусированием . . 337

8.4.2.Сочетание методов электрофокусирования и электро

8.4.3.	фореза	в г е л е .......................................................................		337
8.4.3.	Преимущества электрофокусирования.............................			339
	Список	литературы...............................................................		340
Глава 9.	ДОСТУПНОСТЬ ДЛЯ РЕАГЕНТОВ И ОКРУЖЕНИЕ
	АМИНОКИСЛОТНЫХ ОСТАТКОВ В НАТИВНЫХ
	БЕЛКАХ. К. Шибата.........................................................			344
9 .1 .	Аминокислотные остатки в нативных белках .		. . .	344
9.2.	Типы	реагентов...................................................................	моно	345
9.3 .	Анализ реакционной способности с помощью		моно	346
9.3.1.	функциональных реагентов типа R—О ................................			346
9.3.1.	Т и рози н ..................................................................................			346
9.3.2.	Триптофан.............................................................................			355
9.3.3.	Гистидин..................................................................................			357

9.3.4.Специфическая модификация по аминогруппам . . . 360

9.3.5.	Аргинин....................................................		364
9.3.6.	Модификация	по карбоксильным группам...................	364
9.3.7.	Модификация	цистеина.....................................................	365

9.4.Модификация аминокислотных остатков в активном

центре фермента...................................................................

367

9.4.1.Модификация монофункциональным реагентом О—Rno остаткам, обладающим повышенной реакционной спо

собностью .................................................................................

367

9.4.2.Модификация бифункциональными реагентами типа

	А—О—R .	369
9.4.3.	Введение негативной метки................................................	371

9.5.Анализ с помощью бифункциональных реагентов типа

R - 0 - R .................................................................................

372

9.6.Анализ ближайшего окружения аминокислотных остат ков с помощью бифункциональных реагентов типа

А—О—S или R—О—S ..........................................................

374

9.6.1.Спектральные смещения полос поглощения остатков

	ароматических	аминокислот ................................................	375
9.6.2.	«Репортерная»	группа..........................................................	376
9.6.3.	Метод спиновой метки....................		376

9.6.4.Связывание флуоресцентных меток с гидрофобными

	участками	белковой глобулы ...........................................		378
	Список литературы..............................................................			379
Глава 10.	МЕТОДЫ	ИССЛЕДОВАНИЯЧЕТВЕРТИЧНОЙ
	СТУКТУРЫ БЕЛКОВ. Г, С а н д ........................		387
10.1.	Введение	....................................................................	387
10.1.1.	Терминология.........................................................		387	390
10.1.2.	Номенклатура .		. .	390
• 10.1.3.	Стабилизация конформации молекулы белка . .		. .	390
10.1.4.	Универсальное ..................................проявление		396

462		СОДЕРЖАНИЕ
10.2.	Изучение четвертичной структуры ..................................			; . . . .	397
10.2.1.	Рентгеноструктурный а н а л и з....................			; . . . .	397
10.2.2.	Электронная микроскопия....................................................				397
10.2.3.	Анализ	концевых	г р у п п ....................................................		401
10.2.4.	Анализ	пептидных	к а р т ....................................................		401
10.2.5.	Гибридизация........................................................................				402
10.2.6.	Активные участки..................................................................				403
10.2.7.	Денатурация........................................................................				411
10.2.8.	Равновесие ассоциации — диссоциации........................				428
10.3.	Заключительные замечания................................................				433
	Список	литературы..............................................................			434
	Предметный указатель....................................................				440

УВАЖАЕМЫЙ ЧИТАТЕЛЬ!

Ваши замечания о содержании книги, ее оформлё- нии, качестве перевода и другие просим присылать по адресу: 129820, Москва, И-110, ГСП, 1-й Рижский пер., д. 2, Издательство «Мир»,

Новые методы анализа аминокислот, пептидов н белков

Редактор Т. Т. Орловская Художник Л. Муратова

Художественный редактор Н. Г. Блинов Технический редактор А. Г. Резоухова Корректор О. К- Румянцева

Сдано в набор 7/1 1974 г. Подписано к печати (3/VI 1974 г.

Бумага тип. № 2 60Х90'/16= 1.4,5 бум. л.

29,00 уел. печ. л. Уч.-изд. л. 29,93 Изд. № 3/7322 Цена 3 р. 23 к. Зак. 25

ИЗДАТЕЛЬСТВО «МИР» ■ Москва, 1-й Рижский пер., 2

Ордена Трудового Красного Знамени Ленинградская типография № 2 имени Евгении Соколовой Союзполиграфпрома при Государственном комитете Совета

Министров СССР по делам издательств, полиграфии и книжной торговли. 198052, Ленинград, Л-52, Измайловский проспект, 29