Файл: Учебнометодическое пособие по организации внеаудиторной самостоятельной работы обучающихся по основной профессиональной образовательной программе высшего образования.pdf

ПРИГОТОВЛЕНИЕ МАЗКОВ
ИЗ МИКРОБНЫХ КУЛЬТУР С ЖИДКОЙ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ.
Маленькую каплю исследуемой жидкости наносят на предметное стекло и круговыми движениями петли распределяют равномерным слоем в виде кружка,
диаметром в копеечную монету. Мазок высушивают на воздухе и фиксируют в пламени спиртовки.
ПРИГОТОВЛЕНИЕ МАЗКОВ ИЗ КУЛЬТУР С ПЛОТНОЙ
ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ.
На середину чистого обезжиренного предметного стекла стерильной петлёй наносят каплю стерильного физиологического раствора. Микробную культуру берут стерильной бактериологической петлей и вносят в каплю физ.раствора так,
чтобы жидкость стала слегка мутноватой. Каплю микробной взвеси размазывают в виде кружка размером в однокопеечную монету. Мазок высушивают на воздухе,
фиксируют в пламени спиртовки.
12

ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ
УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ
«Кемеровский государственный медицинский университет»
Министерства здравоохранения Российской Федерации
КАФЕДРА МИКРОБИОЛОГИИ, ИММУНОЛОГИИ И ВИРУСОЛОГИИ
РАБОЧАЯ ТЕТРАДЬ
по специальности «СТОМАТОЛОГИЯ»
Студент (ФИО) ___________________________________________________
Группа № _____________
Кемерово – 201_/201_ учебный год
13

РАЗДЕЛ 1. МОРФОЛОГИЯ И КЛАССИФКАЦИЯ
МИКРООРГАНИЗМОВ.
Занятие №2. Тема 2. УЛЬТРАСТРУКТУРА БАКТЕРИАЛЬНОЙ КЛЕТКИ.
Компетенции, частично формируемые на занятии: ОПК-5, ОПК-9.
Цель изучения темы: сформировать знания о строение бактериальной клетки,
а также о сложных способах окраски, позволяющие выявить различные структуры бактерий.
Задачи:
1. изучить строение бактериальной клетки.
2. изучить методику и механизм окрашивания по методу Грама, Бурри-Гинсу,
Ожешки, Шефферу-Фултону, Цилю-Нильсену, Нейссера, Лёффлеру.
Задания для самостоятельной внеаудиторной работы студентов по данной
теме:
1) Ознакомиться с теоретическим материалом по теме занятия с использованием рекомендуемой учебной литературы и лекционного материала.
2) Ответить на вопросы для самоконтроля:
1. Основные структурные компоненты прокариотической клетки.
2. Различия в строении клеточной стенки грамположительных и грамотрицательных бактерий.
3. Методика и механизм окрашивания по Граму. Примеры толстостенных грамположительных и тонкостенных грамотрицательных бактерий
(приложение 1).
4. Особенности строения клеточной стенки кислотоустойчивых бактерий.
Методика и механизм окрашивания по Цилю-Нильсену.
5. Капсула, ее функциональное значение, способы выявления. Методика и механизм окрашивания по методу Бурри-Гинса.
6. Споры, их строение и функциональное значение, способы выявления.
Методика и механизм окрашивания по методу Ожешки и Шефферу-Фултону.
7. Включения, их роль, способы обнаружения. Методика и механизм
14

окрашивания по методу Нейссера и Леффлеру.
8. Сравнительная характеристика простых и сложных методов окраски
(приложение 2).
9. Жгутики и пили бактерий, функции, способы выявления.
10.Исследование микроорганизмов в живом состоянии. Способы приготовления препаратов (приложение 3)
3) Ответить на тестовые задания на стр.11-10, 15-16, 18-20.
4) Решить иллюстрированные ситуационные задания № 1, 2, 3, 4, 5, 6 и 7 на стр.65-67.
5) Составить таблицу «Структурные и функциональные различия прокариот и эукариот».
6) Составить схемы сложных методов окраски (приложение 4)
15

Приложение 1 16

Приложение 2
Принципиальные отличия сложных способов окраски от простых
МЕТОДЫ ОКРАСКИ
Подразделение методов
ПРОСТЫЕ
СЛОЖНЫЕ
Характерные особенности методов
1. Одноэтапность;
2. Окраска одним красителем
1. Многоэтапность;
2. Окраска
двумя
красителями;
3. Протравы;
4. Дифференцирующие
вещества.
Назначение методов
Изучение формы, величины,
взаимного расположения микроорганизмов
1. Дифференциация одних
видов от других;
2. Изучение анатомического
строения бактериальной
клетки.
Подразделение сложных методов
Дифференциальные
Выявляющие
различные
структуры бактериальной
клетки
Примеры сложных методов
Грама, Циля-Нельсена
Романовского-
Гимзы
Нейссера
Ожешки
Бурри-
(Леффлера
)
Гинса
Назначение сложных методов
Отличи
е грам+
от грам-
Отличие
кислотоустойчивости
от
некислотоустойчивост
и
Выявление
нуклеоида;
Окраска
простейших;
Дифференциаци
я спирохет
различных родов.
Выявление
включений
Выявление
спор
Выявление
капсул
17

Приложение 3
ИССЛЕДОВАНИЕ МИКРООРГАНИЗМОВ В ЖИВОМ СОСТОЯНИИ
В живом состоянии микроорганизмы исследуют с целью выявления их формы, подвижности или определения прижизненной внутренней структуры.
Изучают нативные и окрашенные препараты, используя методы
«раздавленной» или «висячей» капли.
Прижизненная (витальная) окраска. Взвесь микроорганизмов вносят в каплю 0,001% раствора метиленового синего или нейтрального красного. Затем готовят препарат «раздавленной» или «висячей» капли и микроскопируют его.
1. Приготовление раздавленной капли.
На предметное стекло стерильной петлёй наносят каплю бульонной культуры микробов. У края капли ставят на ребро покровное стекло и постепенно опускают его на каплю. В правильно приготовленном препарате жидкость тонким слоем заполняет пространство между стёклами, не выпуская,
за края покровного стекла и не содержит пузырьков воздуха. На покровное стекло наносят каплю иммерсионного масла и изучают под микроскопом с объективом х 90.
2. Приготовление висячей капли.
Каплю бульонной культуры микробов наносят на середину покровного стекла и покрывают сверху предметным стеклом с лункой. Края лунки предварительно смазывают вазелином или касторовым маслом. Предметное стекло с прилипшим к нему покровным стеклом перевёртывают. Капля оказывается висящей в герметически закрытой влажной камере.
Микроскопия раздавленной и висячей капли производится с объективом
40х в затемнённом поле зрения (при опущенном вниз конденсоре).
18

Приложение 4
ИССЛЕДОВАНИЕ МИКРООРГАНИЗМОВ В ОКРАШЕННОМ
СОСТОЯНИИ
СЛОЖНЫЕ МЕТОДЫ ОКРАСКИ
Сложные дифференциальные методы окраски. При сложных способах окраски на мазок воздействуют двумя красящими веществами, из которых одна краска является основной, а вторая дополнительной.
Общая схема сложных (дифференциальных) методов окраски:
1. основной краситель; 2. дифференцирующее вещество; 3. дополнительный краситель.
Окраска по Граму
Схема метода:
Принцип метода:
19

Выявление капсул по Бурри и Бурри-Гинсу.
Схема метода:
Принцип метода:
Окраска кислотоустойчивых бактерий по Цилю-Нильсену.
Схема метода:
Принцип метода:
20

Окраска спор по Ожешко
Схема метода:
Принцип метода:
21

Окраска по Романовскому-Гимзе простейших.
Схема метода:
Этап
Вещество
Время обработки
Фиксация смесь Никифорова
Покраска
Азур-эозин
20'
Промывка
Вода
5-10"
Принцип метода:
Окраска по Нейссеру зерен волютина.
Схема метода:
Этап
Вещество
Время обработки
Основной краситель
Синька Нейссера
1-2'
Промывка
Вода
5-10"
Фиксатор
Раствор Люголя
1-2'
Дополнительный краситель
Раствор везувина
10-15"
Промывка
Вода
5-10"
Принцип метода:
22

Окраска по Шефферу и Фултону спор.
Схема метода:
Этап
Вещество
Время обработки
Основной краситель
5% раствор малахитового зеленого, нагреть 3-4 раза до появления паров
Промывка
Вода
5-10"
Дополнительный краситель
0,5% сафранин
30"
Промывка
Вода
5-10"
Принцип метода:
23

РАЗДЕЛ 2. ФИЗИОЛОГИЯ МИКРОБОВ
Занятие №3.

7. Методы частичного обеспложивания
3) Проработать ТЗ в практикуме на стр.24-25, 27-29, 33-35, 37-39.
4) Ответить на вопросы для самоконтроля:
1. Микроб как объект дезинфекции и стерилизации. Связь со строением клетки. Основные мишени молекулярной структуры при воздействиях.
2. Отличия понятий контаминации и деконтаминации, дезинфекции и стерилизации, асептики и антисептики.
3. Воздействие физических факторов.
4. Воздействие химических факторов. Антисептики и дезинфектанты.
5. Способы контроля эффективности дезинфекции и стерилизации.
6. Классификация бактерий по типам питания.
7. Основные механизмы поступления питательных веществ в бактериальную клетку.
8. Типы дыхания бактерий. Брожение. Микроаэрофилы.
9. Классификация питательных сред, их применение. Требования к питательным средам.
10.Способы стерилизации питательных сред и лабораторной посуды.
11.Цели, задачи и этапы бактериологического метода исследования.
12.Правила забора и транспортировки исследуемого материала для бактериологического исследования (приложение 2).
13.Методы выделения чистых культур аэробных и анаэробных бактерий.
Условия культивирования
25

Приложение 1
Методические указания
для самостоятельной работы студентов стоматологического факультета
Занятие №3. Тема 1.
ФИЗИОЛОГИЯ БАКТЕРИЙ.
БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ.
ФАЗЫ РОСТА МИКРООРГАНИЗМОВ
1. ________________________ 4. ________________________
2. ________________________ 5. ________________________
3. ________________________ 6. ________________________
УСЛОВИЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ
1) ________________________
2) ________________________
3)________________________
4)_________________________
КЛАССИФИКАЦИЯ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД:
1. По консистенции:
А) _______________________
Пример________________________
Б) ________________________
Пример________________________
В) ________________________
Пример________________________
2. По составу:
А) ________________________
Пример________________________
Б) ________________________
Пример________________________
26

3. По назначению:
А) ________________________
Пример________________________
Б) ________________________
Пример________________________
В) ________________________
Пример________________________
ТРЕБОВАНИЯ, ПРЕДЪЯВЛЯЕМЫЕ К ПИТАТЕЛЬНЫМ СРЕДАМ
1) ________________________________________________
2) _______________________________________________
3)________________________________________________
4)________________________________________________
5)________________________________________________
МЕТОДЫ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ АНАЭРОБОВ:
Метод
Название
Принцип метода
Физический
1.
_____________________
2.
_____________________
3.
_____________________
1. _____________________
2. _____________________
3. _____________________
Химический
Биологический
МЕТОДЫ СТЕРИЛИЗАЦИИ
27

Метод
Аппарат
Режим
стерилизации
Стерилизуемый
материал
Контроль
стерилизации
Прокаливание
Стерилизация сухим жаром
Стерилизация паром под давлением
Стерилизация текучим паром
Тиндализация
МЕТОДЫ ЧАСТИЧНОГО ОБЕСПЛОЖИВАНИЯ
Метод
Режим
От каких микроорганизов не
освобождается обрабатываемый
материал
Пастеризация
Фильтрование
Кипячение
Приложение 2 28

ТРЕБОВАНИЯ,
ПРЕДЪЯВЛЯЕМЫЕ К ЗАБОРУ И ТРАНСПОРТИРОВКЕ
МАТЕРИАЛА ДЛЯ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ:
• Вид материала должен соответствовать локализации предполагаемого возбудителя;
• Количество материала должно быть достаточным;
• Материал забирают до начала антимикробной терапии, непосредственно из очага инфекции или исследуют отделяемое;
• Необходимо исключить контаминацию материала нормофлорой пациента и микробами окружающей среды, для чего материал берут в асептических условиях при адекватном доступе;
• Забор осуществляется стерильным инструментом в стерильную посуду;
• Любой материал должен рассматриваться как потенциально опасный,
поэтому при заборе материала должны использоваться СИЗ;
• Транспортировка в лабораторию должна осуществляться в максимально короткие сроки (оптимально в течении 2 часов) в изотермических контейнерах, предохраняя от света, механических повреждений. Хранить в холодильнике не более 24 часов (кроме ликвора);
• Материал на НАБ (неспоровые анэробные бактерии), досталяемый без использования транспортных систем со средой должен транспортироваться:
- во флаконах с инертным газом;
- в одноразовом шприце
• Все образцы четко маркируются и к ним прилагают сопроводительный документ.
 название учреждения, отделение, палата
 № истории болезни
 ФИО, пол, возраст
 предполагаемый диагноз
 проводимая антибактериальная терапия
 наименование материала
 дата и время забора материала
 подпись лица, осуществившего забор.
29