Файл: Методики постановки опытов и исследований по молочному хозяйству [сборник]..pdf

зования дифенилтиокарбадиазона, который не может связы­ вать кобальт. Все содержимое колбочки количественно перено­ сят в делительную воронку и промывают бидистиллятом по 10 мл два раза. Водную фазу, в которой содержится кобальт, оставляют в делительной воронке. Солянокислый раствор ко­ бальта отмывают хлороформом (по 2 мл) от остатков продук­ тов окисления дитизона и переносят в термостойкие стакан­ чики и упаривают досуха. Органическую 'фазу не используют. Затем в стаканчик с остатком прибавляют 1 мл концентриро­ ванной азотной кислоты и снова досуха упаривают на песочной бане. Остаток озоляют в муфельной печи при температуре 450—500° до белого цвета. После озоления в стаканчик при­ бавляют (параллельно делают «холостую» пробу), 0,25 мл 18%-ной соляной кислоты, 2 капли концентрированной азот­ ной кислоты, 5 мл бидистиллята, 1 мл 0,05%-ного раствора нитрозо-И-соли и 1 г уксуснокислого натрия. Эту смесь кипя­ тят 45 сек. с момента кипения, затем прибавляют 0,75 мл кон­ центрированной азотной кислоты и вновь кипятят 45 сек. Вто­ ричное прибавление азотной кислоты и кипячение проводят для разрушения комплексов нитрозо-И-соли с другими метал­ лами, кроме кобальта. После охлаждения объем раствора до­ водят до 10 мл бидистиллятом и через 10—15 мин. фотоколориметрируют против воды с синим светофильтром.

Рис. 31. Калибровочная кривая для определения железа

Количественное определение железа, меди, цинка, кобаль­ та проводят по градуированным графикам (рис. 31, 32, 33, 34), построенным по результатам фотоэлектроколориметрии стан­ дартных эталонных растворов этих элементов. Для определе­

173

ния применяют ФЭК-56. Находят содержание микроэлемен­ тов сначала в навеске, а затем пересчитывают на 1 кг молока. При расчете используют формулу где А — количество железа в 150 г молока по калибровочной

,кривой (мкг);

К — навеска молока (г).

Рис. 32. Калибровочная кривая для определения меди

А • 1000

Пр и ме р . Для анализа взято 150 г молока, после сжига­ ния которого получилось 1,2025 г золы. При определении же­ леза экстинкция — 0,692. По кривой эта экстинкция соответ­ ствует 54,3 мкг железа. Следовательно, в 1 кг молока будет железа

для железа составляет 6,2%, для меди — 0,5%, цинка— 4,8%

икобальта — 15%. Расчет содержания меди, цинка, кобальта

вмолоке проводят аналогично расчету содержания железа.

.174

Определение микроэлементов в сгущенном молоке, в сыво­ ротке и кисломолочных продуктах проводится так же, как и в молоке. Сгущенное молоко лучше сначала восстановить и брать навеску 150—200 г, творог— 50 г. Анализ этих продук­ тов следует выполнять так же, как описано для молока.

Построение градуированных графиков

Приготовление исходных стандартных растворов. Медь. 1,965 г сульфата меди, CuS04 • 5Н20 растворяют в бидистилляте* прибавляют 2—3 капли серной кислоты и объем рас­ твора доводят бидистиллятом до 1 л. В 1 мл такого раствора содержится 0,5 мг меди.

Рис.. 33. Калибровочная кривая для определения цинка

Цинк. 100 мг, (0,1 г) химически чистого цинка растворяют сначала в 1 мл концентрированной серной кислоты и 50 мл бидистиллята. После растворения объем раствора доводят во­ дой до 1 л. В 1 мл этого раствора содержится 100 мкг цинка.

Кобальт. 0,477 г гидрата сульфата кобальта CoS04 • 7Н20

.растворяют в 200 мл бидистиллята. Затем раствор подкисляют в 2 мл концентрированной серной кислоты и объем его дово­ дят до 1 л. В 1 мл раствора содержится 100 мкг кобальта. Для более полной аналогии при обработке анализируемых проб и эталонных концентраций железа, меди, цинка и кобальта, по которым будут строиться градуированные 1рафики, посту­ пают следующим образом: приготовляют эталонный раствор

175

смеси указанных микроэлементов. В колбе емкостью 1 л с при­ тертой пробкой растворяют 0,863 г железо-аммойнийных квас­

сколько капель соляной кислоты. В эту же колбу прибавляют 20 мл исходного стандартного раствора меди с концентрацией 500 мкг в 1 мл, 100 мл стандартного раствора цинка и 10 мл

леза, 10 мкг меди, 10 мкг цинка, 1 мкг кобальта. Из этого смешанного раствора в 5 термостойких стаканчиках емкостью 50 мл приготовляют 5 растворов со следующим содержанием

Объем во всех стаканчиках доводят до 5 мл бидистиллятом. Затем pacTBqp выпаривают досуха, прибавляют 1 мл концен­ трированной азотной кислоты и снова упаривают, не прокали­ вая. После этого проводят последовательное выделение каж­ дого элемента из полученных проб, выполняя те же манипуля­ ции, что в анализируемых навесках золы, затем фотометрируют против соответствующих растворителей (цинк, медь — против хлороформа, а железо и кобальт — против воды). Для построения градуировочных графиков определение проводится в трехкратной повторности (см. рис. 31— для железа, 32 — для меди, 33 — для цинка и 34 — для кобальта). Построенные по результатам фотометрии, обработанные указанным спосо­ бом стандартных растворов градуировочные графики являют­ ся постоянными. Если в работу берутся новые партии реакти­ вов, то необходимо ставить «холостую» пробу и полученные результаты вычитать, пользуясь построенными графиками при анализе испытуемых проб.

176

кварцевые стаканы емкостью 50, 100, 200 мл; термостойкие колбы емкостью 100—150 мл; мерные цилиндры или пробирки с притертыми пробками емкостью 10 мл; полиэтиленовые тары емкостью 0,5, 1,0, 2,0 л для отбора проб; 0,04%-ный раствор дитизона; 18%-ный раствор соляной кислоты (особой чистоты или ГОСТ 3118-46 «х. ч.»); 0,02% нормальный раствор соляной кислоты; 0,5%-ный раствор фенолфталеина; азотная кислота (особой чистоты или «х.ч.»); 1%-ный раствор диэтилдитиокарбомата натрия; 27%-ный раствор перекиси водорода; аммиак водный (особой чистоты или ГОСТ 3760-64 «х.ч.»); 10%-ный ■сульфосалициловая кислота; 0,05%-ный нитрозо-Й-соль, сер­ ный эфир, хлороформ.

Рис. 34. Калибровочная кривая для определения кобальта

Очистка дитизона. Дитизон после исследования Фишера на­ шел широкое применение в аналитической химии для разделе­ ния и количественного определения малых концентраций тя­ желых металлов. Для того чтобы решить вопрос о пригодности дитизона, поступают следующим образом: готовят 0,01%-ный раствор дитизона в хлороформе и смешивают его с чистым разбавленным аммиаком (1 : 10). Если органическая фаза пос­ ле взбалтывания приобретает слабую желтую окраску, то та­ кой реактив можно употреблять для выделения и количествен­ ного определения микроэлементов. Если же окрашивание орга­ нической фазы интенсивное, то производят очистку дитизона. Для этого 1 г дитизона растворяют в 100 мл хлороформа и в делительной воронке на 500 мл встряхивают в течение 20— 30 мин. Затем в воронку прибавляют 200 мл разбавленного аммиака (5 мл концентрированного аммиака на 1 л воды). При взбалтывании с аммиаком дитизон переходит в водную

XI. МОЧЕВИНА И АММИАК

В. П. ГАЛЬЦЕВА

В трихлоруксусном фильтрате молока, свободном от бел­ ков, мочевину гидролизуют ферментом уреазой от аммиака. Количество аммиачного азота определяют методом Конвея пу­ тем вытеснения его из раствора сильными щелочами и путем поглощения титрованным раствором кислоты.

К 40 мл молока приливают 40 мл 18%-ной трихлоруксусной кислоты небольшими порциями при перемешивании. Колбочку оставляют в покое до осаждения белков и осветления жидко­ сти, которую отфильтровывают через плотный фильтр. При необходимости фильтрат можно хранить в холодном и темном месте.

Для анализа 20 мл фильтрата наливают в мерный цилиндр, нейтрализуют Щелочью по бромтимолблау до появления чет­ кой зеленой окраски. Объем раствора доводят водой до 40 мл и перемешивают. Подготовленный таким образом раствор ис­ пользуют для гидролиза мочевины в чашках Конвея (рис. 35).

Рис. 35. Чашка Конвея

179

Для учета количества аммиака параллельно определяют содержание его в реактивах (Kj), (К2) и фильтрате молока (Кз). Одни и те же контрольные пробы на реактивы и уреазу могут быть использованы для многих различных образцов в. одной серии определения, если реактивы и фермент не меняют­ ся. Порядок записи результатов анализов указан в табл. 34.

Общий объем жидкости во всех чашках должен быть оди­ наковым, поэтому в контрольные чашки вместо фильтрата добавляют дистиллированную воду. Число повторностей для контрольных определений — не менее двух, а для исследуемых образцов молока — не менее трех.

Во внешнюю часть чашек Конвея наливают по 4 мл подго­ товленного фильтрата молока, 0,6 мл раствора фермента уреазы и 0,6 мл ацетатного буфера. Все чашки неплотно (оставляя отверстие для воздуха) закрывают крышками и ставят в тер-

1S0