Механизм: На обезжиренное предметное стекло пипеткой наносят каплю диагностической сыворотки (разведение сыворотки 1:10 - 1:20). Бактериологической петлей берут чистую культуру исследуемого микроорганизма с поверхности скошенного агара, переносят в каплю сыворотки и перемешивают. Результат реакции учитывают невооруженным глазом через 3-5 мин. При положительной реакции в капле сыворотки отмечают появление хлопьев (крупных или мелких), хорошо видимых на темном фоне при покачивании предметного стекла. В случае отрицательной реакции жидкость остается равномерно мутной.

Эритроциты, адсорбировавшие на себе антиген, называются сенсибилизи­рованными данным антигеном, а иммунная реакция, в которой они участвуют, — реакцией непрямой, или пассивной гемагглютинации (РНГА, или РПГА).

Механизм: РПГА ставят в специальных полистироловых пластинках с луночками, имеющими полусферическое дно. При использовании ее для серологической диагностики в этих луночках готовят двукратные разведения в физиологическом растворе исследуемой сыворотки, и затем добавляют к ней в качестве диагностикума взвесь сенсибилизированных эритроцитов. Учет результатов проводят через 2 ч инкубации при 37 °С по четырехкрестной системе. При положительной реакции агглютинировавшиеся эритроциты оседают на дно луночки и равномерно покрывают его в виде перевернутого зонтика. При отрицательной реакции эритроциты тоже оседают, жидкость становится прозрачной, осадок выглядит в виде маленького «диска» в центре луночки. Титром сыворотки в РПГА считается последнее ее разведение, которое еще дает ярко выраженную гемагглютинацию без значительных признаков наличия «диска».

41.Возбудитель чумы. Морфологические свойства, культуральные

особенности, факторы патогенности. Возбудитель в роли биологического оружия.

Возбудитель чумы – Yersiniapestis.

Морфологические свойства. Неподвижная палочка овоидной формы, размером 1,5х0,7 мкм, с биполярным окрашиванием анилиновым красителем. Образует нежную капсулу.

Культуральные особенности. Факультативные анаэроб. Растёт на простых питательных средах. Оптимальная температура – 28 градусов C. На плотных средах через 8-12 часов образует колонии в виде “битого стекла”. Через 18-20 часов вирулентные бактерии образуют колонии в R-форме, которые имеют форму “кружевных платочков”. Менее вирулентные бактерии образуют колонии в S-форме. На жидких средах бактерии растут в виде плёнки, от которой спускаются сталактиты. Основные биохимические свойства, необходимые для идентификации:

---

• 
  Не разжижает желатину, не расщепляет мочевину,
  
• 
  Не ферментирует рамнозу и сахарозу,
  
• 
  Ферментирует декстрин.
  

Факторы патогенности (ФП). ФП детерминируются хромосомой и тремя плазмидами: pPst, pCad, pFra.

1. 
   pPst детерминирует синтез фибринолизина, плазмокоагулазы и пестицина.
   
2. 
   pFra – F1-антиген (препятствует поглощению микроба фагоцитами), F2-фракция, “мышиный токсин”.
   
3. 
   pCad – V- и W-антигены, которые обеспечивают способность бактерий сохраняться в фагоцитах.
   

Возбудитель в роли биологического оружия. В ходе Второй мировой войны японскими вооружёнными силами были разработаны образцы биологического оружия, предназначенного для массового сброса специально подготовленного носителя чумы — инфицированных блох. Кроме того, трупы, заражённые чумой, использовали для загрязнения водоёмов.
42. В вирусологической лаборатории проведено заражение куриных эмбрионов смывом из носоглотки больного острой респираторной инфекцией. Вирусолог выделил вирус, вызвавший агглютинацию 1% взвеси куриных эритроцитов. Укажите методы заражения куриного эмбриона и порядок его вскрытия и серологическую реакцию, используемую для идентификации вируса.

Методы заражения. А – заражение в полость аллантоиса. Б – заражение в амнион закрытым способом. В – заражение в амнион открытым способом. Г – заражение на хорионаллантоисную оболочку.

Порядок вскрытия.

В случае А вскрытие производят по следующим правилам:

1. Яйцо устанавливается на подставке так, чтобы воздушный мешок находился наверху, скорлупу над ним стерилизуют.

2. Скорлупу срезают немного выше границы воздушного пространства.

3. Удаляют пинцетом скорлупную оболочку, после чего хорионаллантоисную оболочку прокалывают пастеровской пипеткой в том месте, где нет сосудов, и насасывают аллантоисную жидкость.

4. Аллантоисную жидкость переносят в стерильную пробирку, а часть засевают в бульон для проверки на бактериологическую стерильность.

В случае Г:

1. Яйцо помещают на подставку так, чтобы воздушное пространство было наверху, проводится стерилизация места вскрытия.

2. Срезают скорлупу по границе воздушного пространства.

3. Снимают скорлупную оболочку по границе. Обнажённую хорионаллантоисную оболочку подрезают вдоль края скорлупы. Через образовавшееся отверстие выливают всё содержимое яйца в чашку.

4. Оставшуюся внутри скорлупы хорионаллантоисную оболочку осторожно извлекают пинцетом и помещают в стерильную чашку с физиологическим раствором. Здесь её расправляют и изучают изменения.

---

Серологическая реакция для идентификации вируса. Реакция (РСК). Реакция торможения гемагглютинации (РТГА). Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА).
43.Как называются видимые изменения в клетке при действии на нее вируса? Методы индикации и идентификации вирусов.

Цитопатическое действие вируса - возникновение дегенеративных изменений в клеточных культурах, связанное с размножением вирусов. Цитопатическое действие вируса (ЦПД), имеют три основных типа: кругло- или мелкоклеточная дегенерация; образование многоядерных гигантских клеток (симпластов); развитие очагов клеточной пролиферации, состоящих из нескольких слоев клеток; Внутриклеточные включения, располагающихся в цитоплазме и/или в ядрах пораженных клеток.

Методы индикации. Индикация вирусов с помощью реакции гемагглютинации (РГА). Под действием вирусного гемагглютинина in vitro происходит склеивание эритроцитов. Индикацию вирусов можно проводить по их цитопатогенному действию (ЦПД) на культуру клеток. Существуют методы титрования (количественное определение) вирусов.

Методы идентификации. Основными серологическими реакциями, используемыми для идентификации вирусов, являются: реакция торможения гемагглютинации, реакция нейтрализации в культуре клеток и иммуноферментный метод (ИФА), основанный на реакции «антиген-антитело», который позволяет выявить вещества белковой природы.

Реакция торможения гемагглютинации РТГА.

Постановка РТГА: вначале соединяют вируссодержащую жидкость с разведениями диагностических сывороток в лунках и оставляют для контакта на 30-40 минут при комнатной температуре. Затем во все лунки вносят взвесь эритроцитов. Учет реакции производят через 1 -2 часа.

Если тип вируса соответствует типу сыворотки, то вирусный гемагглютинин будет блокироваться антителами сыворотки, что проявляется отсутствием агглютинации эритроцитов. Такая реакция учитывается как положительная. Визуально в лунках определяется осадок эритроцитов с ровными краями, в виде «пуговицы». При отрицательной реакции будет виден «перевёрнутый зонтик».

Реакция нейтрализации (РН) в культуре клеток.

Постановка РН: вначале выделенный цитопатогенный вирус смешивают в пробирках со специфическими диагностическими сы­воротками. Смеси выдерживают 1 час при комнатной температуре. Затем этими смесями заражают флаконы с культурой клеток. Если тип вируса соответствует ти­пу сыворотки, то произойдет нейтрализация вируса антителами сыворотки и куль­тура клеток будет без изменений (положительная реакция).

---

44.Возбудитель ВИЧ-инфекции. Общая характеристика. Основные группы риска. Понятие о СПИДе. Микробиологическая диагностика и профилактика ВИЧ-инфекции.

Возбудитель – Retroviridae Lentivirus.

Общая характеристика. Вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) – вызывает ВИЧ-инфекцию, которая заканчивается синдромом приобретённого иммунного дефицита (СПИД). ВИЧ – РНК-содержащий вирус. Вирусная частица имеет сферическую форму. Оболочка состоит из двойного слоя липидов, пронизанного гликопротеинами. Сердцевина имеет конусовидную форму и состоит из капсидных белков p24 и p25. Геном вируса состоит из 3 основных структурных генов (gag, pol, env) и 7 регуляторных. Жизненный цикл состоит из 4 стадий:

1. 
   Адсорбция и эндоцитоз в клетку;
   
2. 
   Высвобождение вирусной РНК, синтез и интеграция ДНК-провируса;
   
3. 
   Синтез РНК вируса, трансляция и формирование вирусных белков;
   
4. 
   Сборка, созревание и высвобождение.
   

Вирус поражает в основном T- и B-лимфоциты. Выделяют 2 типа вируса – ВИЧ-1 и ВИЧ-2, отличающиеся по структуре и антигенам.

Основные группы риска. Женщины легкого поведения и их клиенты, Лица, употребляющие инъекционные наркотики, Мужчины нетрадиционной сексуальной ориентации, Люди, у которых не один половой партнер, Лица, которым сделали переливание инфицированной донорской крови, Дети, матери которых инфицированы ВИЧ.

Понятие о СПИДе. СПИД – синдром приобретенного иммунодефицита. Это заболевание вызывается вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ). Вирус иммунодефицита человека ослабляет иммунную систему, в результате чего организм теряет возможность противостоять различным заболеваниям. Термином СПИД обозначили конечную стадию ВИЧ-инфекции; она характеризуется поражением иммунной системы человека, на фоне которого развиваются сопутствующие заболевания легких, органов желудочно-кишечного тракта, головного мозга. Болезнь заканчивается смертью.

Микробиологическая диагностика. ИФА, ИБ, ПЦР. Для подтверждения диагноза определяют антитела к белкам gp41, gp120, gp160 и p24 у ВИЧ-1. Культивируется ВИЧ на культуре клеток Т-лимфоцитов и моноцитов человека, но для этого требуется присутствие ИЛ-2.

Профилактика. Специфическая – не разработана. Неспецифическая – механическая защита от инфицирования с помощью презервативов, пользование одноразовыми шприцами и др.
45.Возбудитель гепатита А, таксономия, антигенная структура, патогенез, клиническая картина, профилактика и лечение

---

Возбудитель – Picornaviridae Hepatovirus.

Таксономия. Вирус гепатита А относится к семейству Picornaviridae роду Hepatovirus.

Антигенная структура. Является РНК-содержащим вирусом. Имеет один вирусоспецифический антиген.

Патогенез. Вирус гепатита А попадает в организм человека с водой или пищей, репродуцируется в эпителии слизистой оболочки тонкой кишки и регионарных лимфоидных тканях. Затем возбудитель попадает в кровоток с развитием кратковременной вирусемии. Максимальные титры вируса в крови выявляют в конце инкубационного и в преджелтушном периодах. В это время возбудитель выделяется с фекалиями. Основная мишень для цитопатогенного действия – гепатоциты. Репродукция вируса в их цитоплазме приводит к нарушению внутриклеточных метаболических процессов и гибели клеток. Цитопатический эффект усиливают иммунные механизмы, в частности NК-клетки, синтез которых индуцируется вирусом. Поражение гепатоцитов сопровождается развитием желтухи и повышением уровня трансаминаз. Далее возбудитель с желчью попадает в просвет кишечник и выделяется с фекалиями, в которых отмечается высокая концентрация вируса. Вирус гепатита А вызывает развитие острого высококонтагиозного заболевания, который может протекать субклинически или давать типичные клинические формы. После перенесения клинически выраженной или бессимптомной инфекции формируется пожизненный гуморальный иммунитет.

Клиника. Инкубационный период при гепатите А занимает от 15 до 45 дней, чаще от 20 до 30. Вирусный гепатит может принимать желтушную,   безжелтушную   и субклиническую форму. Также выделяют острое (до 2 месяцев), затяжное (до 6 месяцев). Хроническое течение заболевания для ГА не доказано. Начало острое с преджелтушного этапа, занимающего, в среднем, от 2-х дней до недели.

Этот период также характеризуется продромальными явлениями: кратковременный подъём температуры тела, снижение аппетита, тошнота, рвотные позывы, тянущие боли в области печени, задержка стула ,увеличение печени и незначительное-селезёнки, может появиться потемнение мочи и осветление кала.

В желтушной стадии появляется и в течение 2-3 дней нарастает желтуха, иногда сопровождаемая зудом кожных покровов, но явления интоксикации в типичных случаях идут на убыль.. Выздоровление характеризуется постепенным уходом желтухи и нормализацией самочувствия, но увеличение размеров печени и повышение активности трансаминаз могут держаться до 3-6 мес., и лишь к этому времени следует отнести истинное выздоровление от этой инфекции.

---

Смотрите также файлы

• Организация и управление внешнеэкономической деятельностью предприятия.docx

• Допуски.docx

• Тематическое планирование по элективному курсу Актуальные вопросы обществознания.docx

• Сформулируйте наиболее важные экономические условия для удовлетворения спроса населения на товары.doc

• Занятие 1 по темам 13 Тема Понятие, предмет, метод и система гражданского права.pdf