Файл: Лясковская Ю.Н. Методы исследования окислительной порчи жиров.pdf

ную бумагу наносят 1—1,5 мг жира (5-процентный раствор в аце­ тоне) и обрабатывают раствором реагента при 20° на рассеянном дневном свету. По интенсивности окрашивания судят о величине перекисного числа.

Приготовление реактива

В 50 мл 10-процентного чистого роданистого аммония, содер­

закрытом сосуде. 5 мл раствора добавляют в 45 мл смеси равных

частей сухого ацетона и дистиллированной воды.

Описанный полуколичественный метод пригоден также для изучения действия антиокислителей, а также контроля технологи­

ческого процесса (например, отдельных фаз рафинации).

Тейфель [103] считает, что перекисное число только характери­ зует обычно принятый показатель, но не дает стехиометрической закономерности.

Для «динамического» анализа он рекомендует ранее описан­ ный [102] метод Тейфеля и Фогеля, а для «статического» быстрый, чувствительный и хорошо воспроизводимый колориметрический метод. В основу этого метода положена реакция образования ро­ данистого железа в присутствии перекисей. Интенсивность окрас­ ки сравнивается со стандартным раствором нитрата кобальта.

Техника определения перекисей железороданидным методом [31, 68]

Метод рекомендуется для определения начинающегося прогор­ кания жиров, например, при изучении «запаха реверсии» расти­ тельных масел, молочного порошка и др.

Исследуемый образец, содержащий 0,1 г жира, помещается в небольшой стакан, где растворяется в 25 мл сухого очищенного ацетона при слабом нагревании на водяной бане. Последующие операции производят при красном свете, так как не красный свет усиливает окраску (при желании получить только сравнительные данные можно работать как обычно). 1 мл ацетонового раствора жира переносят в пробирку и добавляют 9 мл реактива. Пробир­ ку нагревают до 70—80° до появления первых пузырьков газа, а затем в течение 10 мин. выдерживают при 50°. Интенсивность окраски определяется с помощью спектрофотометра. В качестве контрольной пробы используется чистый ацетон. Отсчеты произво­ дят с 9 мл реактива и 1 мл ацетона в условиях основного' Опреде­

ления. Разница между величинами, полученными при опытном и контрольном определениях, дает величину закисного железа,, окис­ ленного за счет перекисей, присутствующих в жире.

12

ливают 20 мл бензола и перемешивают путем медленного враще­ ния при комнатной температуре в течение 2 мин. без взбалтывания.

Затем смесь фильтруют через промытую и высушенную бумагу (ватман № 4). Полученные 12—15 м.л прозрачного раствора раз­ бавляют бензолом примерно до 20 мл.

Экстракция жира из жировой ткани. Навеску в 0,5—1,0 г невысушенной свиной или говяжьей жировой ткани, грубо нарезанной или в тонких ломтиках, помещают в пробирки и заливают 20 мл

бензола. Пробирки закрывают пробками и выдерживают в темноте

в течение 18—24 час., после чего фильтруют.

Проведение определения. Определенную часть бензольного рас­

твора жира прибавляют к 3 мл метилового спирта в пробирке, объем доводят бензолом до 10 мл и пробирку с жидкостью осто­

рожно встряхивают. Готовят смесь, состоящую из равных объемов хлористого железа и роданистого аммония, 0,1 мл этой смеси до­ бавляют в пробирку и продолжают встряхивание1. Все пробирки помещают на 15 мин. в водяную баню при 50± 2°, а затем пример­ но на 10 мин. в баню при комнатной температуре. В течение пер­ вых 30 сек. пробирки осторожно встряхивают в каждой бане. Образовавшуюся интенсивную красную окраску колориметрируют

в,сравнении с контрольной пробиркой. Результаты выражают в микромолях перекисного кислорода на грамм жира, пользуясь ка­

экстракте. Для этого определенное количество бензольного раство­ ра помещают в маленькие чашки, а основную массу растворителя

удаляют в токе воздуха при 85°. Остаток растворителя нагревают

при 85° в течение 30 мин. с применением вакуума, а затем охлаж­ дают и взвешивают.

Контрольные пробы готовят из чистых растворителей и реакти­

ва хлористого железа, свежеприготовленного или хранившегося ограниченное время.

Если исследуемые образцы дают очень высокие показатели, то для анализа берут меньшую (определенную) часть экстракта. Желтая окраска растворов сильно окисленных жиров незначитель­

но влияет на результаты определения, так как для анализа исполь­ зуется очень небольшая определенная часть раствора.

Следует иметь в виду, что величины перекисных чисел, полу­ ченных железороданидным методом в присутствии воздуха, при­ мерно вдвое больше, чем полученные йодометрическим методом,

например, методом Уилера.

■ 1 Рекомендуется одновременно анализировать не более 15 образцов; для каждых 5 образцов рекомендуется делать одну контрольную пробирку, содержа­ щую только растворители и реактивы.

14

Калибрирование колориметра. Стандартный раствор хлорного

железа разводят в концентрации 1 :100 смесью бензола с метано­ лом (70: 30). Раствор хлористого железа готовят путем разведения 0,05 мл реактива в 100 мл смеси бензола с метанолом. Определен­ ную часть раствора хлорного железа доводят до 10,0 мл раствором хлористого железа. В каждую пробирку добавляют 0,05 мл реак­ тива роданистого аммония и перемешивают. Обработку родани­ стым аммонием по развитию окраски производят, как указано выше, и колориметрируют, сравнивая с чистой смесью раствори­ телей. Максимум поглощения раствора лежит при длине волны 500—510 ммк.

Реактивы [50, 94]. 1. Гоговят смесь из 70 объемов бензола и

30 объемов метилового спирта (химически чистого). Оба реактива подвергают сушке и очистке перегонкой в 25-сантиметровой колон­ ке. В случае необходимости отработанная смесь может быть реге­ нерирована [50].

его окисления можно судить по появлению окраски после добав­

4. Стандартный раствор FeCh, содержащий 1 мг Ре-”/мл, гото­ вят растворением 0,5 г чистой железной проволоки в свободной от железа соляной кислоте и последующим окислением перекисью

водорода,

Излишек перекиси удаляют кипячением, и раствор доливают до 500 мл. Затем раствор разводят и подкисляют до содержания 10 мг железа и 1,0 мл 10N соляной кислоты в 100 мл.

5.Дистиллированную воду для приготовления реактива осво­ бождают от следов металлов с помощью йонного обмена [35].

6.Фильтровальная бумага должна быть обработана с целью

удаления железа. Например, фильтровальную бумагу (ватман № 4) свертывают и помещают в длинную стеклянную трубку диа­ метром 5 см, которую соединяют с фильтровальной склянкой и

вакуумной линией. Затем бумагу последовательно обрабатывают

(пропусканием) 0.5N раствором соляной кислоты, дистиллирован­ ной водой и метиловым спиртом. Трубку с бумагой высушивают *в

шкафу при 100°. Бумагу берегут от загрязнения железом.

15

ДИХЛ ОРФЕНОЛ ИНДОФЕНОЛЬНЫЙ МЕТОД

- . Дихлорфенолиндофенольный метод определения перекисей основан на реакции окисления дихлордиоксидифениламина

активным кислородом перекисей" в окрашенный 2,6-дихлорфенол- индофенол.

Этот метод предложен Хартманом и Глевиндом [44] для определения перекисей в жирах и жирных кислотах.

Раствор жира в ксилоле, подкисленный уксусной кислотой,

обрабатывают реактивом, содержащим лейкооснование 2,6-дихлор-

фенолиндофенола, в течение 10 мин. в кипящей водяной бане. Интенсивность окраски охлажденного раствора измеряют спектро­ фотометрически при длине волны 520 ммк.

Метод был оценен авторами, как быстрый, чувствительный и

хорошо воспроизводимый.

Позже было доказано [45], что этот метод неточный: он дает

завышенные количества перекисей в жире.

На основании экспериментов авторы установили, что это объясняется влиянием кислорода и что при исключении кислорода

Таблица 4

Сравнение перекисных величин, полученных различными методами

16