Файл: Лясковская Ю.Н. Методы исследования окислительной порчи жиров.pdf

менению в качестве растворителя для экстракции жира смеси н-пропилового спирта и ксилола.

Новая модификация дихлорфенолиндофенольного метода дает величины в 1,9 раза меньше, чем железороданидный метод.

Авторы рекомендуют метод для быстрого определения содер­ жания перекисей в сырой мышечной ткани. Воспроизводимость

метода видна из табл. 6.

Таблица 6

Изменение перекисных чисел мяса (микроэквивалент/1г мяса)

Для определения брали мясо с 7,1% жира. Содержание жира определяли экстракцией, аналогично извлечению жира для onpeL

деления перекисных чисел, и удалением растворителя в вакууме. Следует отметить, что дихлорфенолиндофенольная реакция воспроизводима и пригодна только в сравнительном изучении. Вероятно, большое значение она должна иметь для гистохимиче­

ского обнаружения перекисей [41].

Определение перекисей в жире мяса дихлорфенолиндофенольным методом [46]

Мясо нарезают ломтиками стальным ножом и тонко нарубают. Около 2 г образца или более, если содержание перекисей мало, заливают 20 мл смеси н-пропилового спирта и ксилола (1:1) в

пробирке размером 150X25 мм, и нагревают в течение 10 мин.

при 60°, легко взбалтывая. После охлаждения добавляют безвод­

0,2 мл l'-процентного спиртового раствора лейкооснования дихлорфенолиндофенола и 0,5 мл ледяной уксусной кислоты. Смесь на­ гревают в кипящей водяной бане в течение 10 мин. Одновременно с опытными пробами при тех же условиях ставят контрольный опыт. После охлаждения и доведения объемов до 10 мл измеряют оптическую плотность при длине волны 530—540 ммк.

Экстинкция, равная 0,77, в настоящей модификации дихлорфе­ нолиндофенольного метода принята как соответствующая 1 микро­ эквиваленту перекисного кислорода в 10 мл растворителя (смесь равных объемов н-пропилового спирта и ксилола, содержащая 5%

18

уксусной кислоты). Стеклянная посуда и фильтровальная бумага должны быть тщательно очищены от железа, как и при железо­ роданидном методе.

Приготовление раствора дихлордиоксидифениламина

Лейкооснование (дихлордиоксидифениламин) растворяют в

1-процентном растворе этилового спирта. Согласно оригинальному методу, реактив хранится в холодильнике и становится непригод­ ным к употреблению, когда красная окраска достигает такой интенсивности, что дает значительную величину в слепом опреде­ лении.

Лейкооснование готовят по способу, описанному Хартманом и Глевиндом [44].

2 г 65-процентного 2,6-дихлорфенолиндофенола и 1 г аскор­ биновой кислоты растворяют в 100 мл 50-процентного этилового спирта. После выдерживания в течение 10 мин. с редким встряхи­ ванием, добавляют 200 мл насыщенного водного раствора NaCl, содержащего 20 мл ледяной уксусной кислоты. Смесь выдержи­ вают около 2 час. при 5°, затем декантируют и пропускают через

стеклянный фильтр. Осадок промывают дистиллированной водой

и очищают повторным растворением в 25 мл абсолютного этило­ вого спирта, из которого он осаждается добавлением дистиллиро­ ванной воды (300—500 мл). Полученное лейкосоединение сушат

в вакууме при комнатной температуре. Оно получается в виде го­ лубовато-белых металлических игл, которые не должны содержать даже следов NaCl или аскорбиновой кислоты.

ЖЕЛЕЗОХЛОРИДНО-ИНДОФЕНОЛЬНЫЙ МЕТОД

Комбинированный железохлоридно-индофенольный метод [47]

применяется для определения перекисей в жире в присутствии

фосфолипидов. Он основан на окислении перекисями Fe" в Fe" н определении количества образовавшегося окисного железа с по­ мощью 2,6-дихлорфенолиндофенола. Метод сочетает в себе хорошо воспроизводимую реакцию между органическими перекисями и солями закисного железа, применяемую в железороданидном ме­ тоде, и в то же время свободен от нарушений, вызываемых фос­

фолипидами. Этим методом можно исследовать .многочисленные пищевые продукты, содержащие жиры. Применение для экстрак­ ции жира из продукта смеси «бензол-метанол» дает возможность определять наряду с перекисями жира, перекиси фосфолипидов.

Воссановление перекисей жира в бензол-метаноловом раство­ ре FeCl2 и окисление излишка FeCl2 дихлорфенолиндофенолом протекает при комнатной температуре. Фосфорная кислота и ее производные не только не мешают проведению реакции, но даже пирофосфорную кислоту применяют, чтобы облегчить количествен­ ное окисление FeCl2 дихлорфенолиндофенолом. По разнице в

окраске между контрольным и опытным растворами определяют

содержание перекисей.

Позже [42] в колориметрическом индофенольном методе опре­

деления липидных перекисей необходимость в нагревании была исключена путем добавки соединений Fe"\

По этой модификации в присутствии MgCl2 могут удачно определяться перекиси фосфолипидов.

В результате сравнения йодометрического, индофенольного

и роданидного методов определения перекисей было установлено, что последний метод при отсутствии кислорода является наиболее подходящим.

Определение перекисей железохлоридно-индофенольным методом

Жир экстрагируют (15—20 мл) смесью бензола с метано­ лом с обратным холодильником в течение 5 мин. при 60°. Величину

образца выбирают в соответствии с ожидаемым содержанием пере­ кисей и, если необходимо, определяют в предварительном экспери­

ряется без большой задержки, так как окраска дихлорфенолиндо­ фенола неустойчива в кислой среде.

Реактивы и аппараты

1.Бензол и метанол. Смесь 7 объемов бензола и 3 объемов метанола употребляют в качестве растворителя. Оба реактива очищают способом, описанным выше [50].

2.FeCl2, запасный раствор. Раствор готовят согласно выше­ указанному методу [50], но в двойной концентрации, т. е. растворе­ нием 0,8 г ВаС12 • 2Н2О и 1 г FeSO4 • 7Н2О в 100 мл воды, под­

кисленной 2 мл ION НС1. Осадок отфильтровывают. Реактив остается устойчивым в течение нескольких недель и становится не­

пригодным когда 1 мл его дает явственное окрашивание с 1 каплей

30-процентного роданистого аммония (малые количества Fe--: нсоказывают заметного влияния на интенсивность окраски образ­

цов и слепого опыта).

3. FeCl2, растворенный в бензол-метаноле. Водный раствор

FeCl2 (Пил) прибавляют к20л1лбензол-метанола (1 : ^.Раствори­ тели FeCl2 и дихлорфенолиндофенольного реактива выбирают так, что когда употребляется 1 мл каждого реактива, общее отношение «бепзол-метанол» получается 7:3. Это соотношение соответствует

20