Файл: 1 Билет Биохимия наука, изучающая вещества, входящие в состав живых организмов, их превращения, а также взаимосвязь этих превращений с деятельностью органов и тканей..pdf
ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 10.04.2024
Просмотров: 153
Скачиваний: 0
ВНИМАНИЕ! Если данный файл нарушает Ваши авторские права, то обязательно сообщите нам.
СОДЕРЖАНИЕ
ренин
3. Для ренина в плазме имеется субстрат – белок глобулиновой фракции
ангиотензиноген
4. В результате протеолиза от белка отщепляется декапептид под названием
ангиотензин I
5. Ангиотензин I при участии
ангиотензин-превращающего фермента
превращается в
ангиотензин II
6. Главными мишенями ангиотензина II служат
кровеносные сосуды
и
клубочковая зона коры
надпочечников.
7. Стимуляция кровеносных сосудов вызывает их спазм и восстановление
артериального давления
8. Из надпочечников после стимуляции секретируется
альдостерон
, действующий на дистальные канальцы почек.
9. При воздействии на канальцы почек увеличивается реабсорбция
ионов Na
+
, вслед за натрием движется
вода
В результате давление в системе восстанавливается и концентрация ионов натрия увеличивается в плазме крови, а, значит и в первичной моче.
Механизм действия - Цитозольный.
Мишени и эффекты
Воздействует на слюнные железы, на дистальные канальцы и собирательные трубочки почек. В почках усиливает
реабсорбцию ионов натрия
и потерю ионов калия посредством следующих эффектов:
увеличивает количество Na
+
,K
+
-АТФазы на базальной мембране эпителиальных клеток,
стимулирует синтез митохондриальных белков и увеличение количества нарабатываемой в клетке энергии для работы Na
+
,K
+
-АТФазы,
стимулирует образование Na-каналов на апикальной мембране клеток почечного эпителия.
Патология
Гипофункция
Не отмечена.
157
Гиперфункция
Синдром Конна
(первичный альдостеронизм) – возникает при аденомах клубочковой зоны. Характеризуется триадой признаков: гипертензия, гипернатриемия, алкалоз.
Вторичный
гиперальдостеронизм – гиперплазия и гиперфункция юкстагломерулярных клеток и избыточная секреция ренина и ангиотензина II.
4. Кровь — жидкая подвижная соединительная ткань внутренней среды организма, которая состоит из жидкой среды — плазмы и взвешенных в ней клеток — форменных элементов: клеток лейкоцитов, постклеточных структур (эритроцитов) и тромбоцитов (кровяные пластинки). Циркулирует по замкнутой системе сосудов под действием силы ритмически сокращающегося сердца и не сообщается непосредственно с другими тканями тела ввиду наличия гистогематических барьеров. В среднем, массовая доля крови к общей массе тела человека составляет 6,5-7 %.
Ли́квор — жидкость, постоянно циркулирующая в желудочках головного мозга, ликворопроводящих путях, субарахноидальном (подпаутинном) пространстве головного и спинного мозга.
Отделяемое из верхних дыхательных путей(мазки, слизь, соскоб из слизистой части)
Отделяемое из нижних отделов дыхательных путей(макрота-слизистое выделение из дыхательных путей и лёгких)
Жёлчь- жёлтая, коричневая или зеленоватая, горькая на вкус, имеющая специфический запах, выделяемая печенью и накапливаемая в жёлчном пузыре жидкость.
Моча — биологическая жидкость, в составе которой из организма выводятся продукты обмена веществ.
Методы.
Основные принципы метода полимеразной цепной реакции. Полимеразная цепная реакция является одним из методов ДНК-диагностики, позволяющая увеличить число копий детектируемого участка генома бактерий или вирусов в миллионы раз с использованием фермента ДНК-полимеразы. Суть метода заключается в многократном копировании в пробирке определённых участков ДНК в процессе повторяющихся температурных циклов. 3 этапа:1)выделение ДНК-клиническая проба подвергается специальной обработке, в результате которой происходит лизис клеточного материала, удаление белковых и полисахаридных фракций и получение раствора ДНК или РНК.
2)амплификация специфических фрагментов-накопление коротких специфических фрагментов ДНК в количестве, необходимом для их дальнейшей детекции.3)детекция продуктов амплификации-разделение смеси продуктов амплификации, полученной на 2 стадии, методом горизонтального электрофореза в агарозном геле. Добавляется раствор бромистого этидия, для образования соединений.
Спектрофотометрия-метод качественного и количественного анализа веществ, основанный на измерении оптической плотности или коэффициента пропускания света веществ в области максимального поглощения или пропускания монохроматического света, что увеличивает точность количественного анализа.
Электрофорез-метод разделения заражённых частиц при движении их в растворе под действием внешнего электрического поля. Различают на бумаге, на ацетате целлюлозы, в геле, в тонком слое сорбента.
ИФА-иммунохимический метод, сущность которого заключается в специфическом взаимодействии антитела и антигена с последующим присоединением к полученному комплексу коньюгата. Стадии: 1)специфические ангтигены пришиты к пластику лунок планшета. В лунку добавляется исследуемая сыворотка и если в ней есть антитела, во время инкубации происходит взаимоузнавание, в рез-те кот-го образуется связь антиген/антитело. 2) после отмывки лунки от не связавшихся субстанций в каждую лунку добавляются вторые антитела. Они узнают человеческие антитела определённого типа. К ним пришит активный фермент, такое соединение называется коньюгат. Происходит узнавание первых и вторых антител,образуется структура «сэндвич». 3)после отмывки не связавшегося коньюгата в лунку добавляется бесцветный субстрат на который действует фермент. В результате превращается в окрашенный продукт. Количество измерятся на фотометре при определённой длине волны.
Методы суход химии-тест полоски.
Иммуноэлектрохемилюминесцентный метод-метод, основанный на взаимодействии моноклональных антител, содержащих рутений2-трис и трипропиламин, с антигеном, с образованием иммунного комплекса,который захватывается вторичными моноклональнымиантителами, связанными посредством дополнительных лигандов с
158 магнитными микрочастицами.
Образовавшийся комплекс поступает в зону рабочего элетрода.
Хемилюминисцентная реакция-свечение рутения- превращается в элеткрический сигнал, интенсивность которого определяется концентрацией исследуемого вещества.
Колориметрия-совокупность методов количественного анализа, основанных на зависимости интенсивности окраски раствора от концентрации в нём окрашенных веществ. Окрашенный соединения образуются в результате взаимодействия исследуемых метаболитов с реактивами либо при расщеплении ферментами хромогенных субстратов.
Масс-спектрометрия-метод исследования вещества, основанный на определении массы и количества ионов этого вещества.
Фотометрия-оптический метод количественного анализа, основанный на измерении светового потока
(эмиссионная, абсорбиционная)
Центрифугирование по градиенте плоскости-метод основан на разной скорости осаждения частиц с разной формой, размерами и плотностью.
Билет 46
1. Изучение окисления в организме было начато в 18 в. А. Лавуазье; в дальнейшем значительный вклад в исследование БО (его локализация в живых клетках, связь с др. процессами обмена веществ, механизмы ферментативных окислительно-восстановительных реакций, аккумуляция и превращение энергии и др.) внесли О. Варбург, Г. Виланд (Германия), Д. Кейлин, Х. Кребс, П. Митчелл
(Великобритания), Д. Грин, А. Ленинджер, Б. Чанс, Э. Рэкер (США), а в СССР -А. Н.Бах,В. И.
Палладин, В. А. Энгельгардт, С. Е. Северин, В. А. Белицер, В. П. Скулачев и др.
В 1777г французский химик Антуан ЛоранЛавуазье(1743-1794), впервые правильно истолковал явление горения как процесс соединения веществ с О
2
. Так как горение и дыхание сопровождаются потреблением О
2 и выделение
СО
2
, он предположил что, в их основе лежит один процесс. Однако у дыхания были существенные отличия от горения: оно шло при низкой температуре, без пламени и в присутствии воды.
В конце XIXвека русские исследователи А.Н. Бах и В.И. Палладин, работая независимо друг от друга, предложили 2 основные теории для объяснения процессов, протекающих в ходе биологического окисления.
В 1897г Алексей Николаевич Бах(1857-1946) сформулировал «перекисную теорию окисления», согласно которой молекула О
2
сначала активируется. Активация О
2 происходит в результате разрыва одной его связи (-О-О-) и присоединения к органическим веществам – оксидазам. Активированный О
2 при взаимодействии с окисляемым веществом образует перекись.
Теория «перекисного окисления» Баха нашла свое подтверждение, однако главный механизм БО оказался иным.
Важнейшая заслуга в развитии учения о
БО принадлежит русскому ученому ботанику и биохимику В.И.Палладину (1859-1922), который создал теорию дыхания, как совокупности ферментативных процессов. Он предположил, что окисление субстратов может происходить в 2 фазы:
1). Анаэробная фаза. В этой фазе особые вещества хромогены (R) отщепляют Н от субстратов и восстанавливаются
(RH
2
).
2). Аэробная фаза. Восстановленные хромогеныRH
2
передают Н на О
2
В последствии теория В.И. Паладина подтвердилась для процессов митоходриального окисления, а хромогены, принимающие участие в отнятии водорода от субстратов, в настоящее время называются ферментами дегидрогеназами.
159
Современные представления о биологическом окислении
Согласно современной теории БО:
Окисление происходит как в аэробных, так и в анаэробных условиях.
В аэробных организмах существует несколько путей использования О
2
Реакции БО необходимы в первую очередь для получения энергии в форме АТФ, а также для синтеза новых веществ, разрушения ксенобиотиков и продуктов метаболизма.
БО является сложным, многостадийным процессом, в котором ведущую роль играют ферменты оксидоредуктазы.
2. Под термином «кетоновые (ацетоновые) тела» подразумевают ацетоуксусную кислоту (ацетоацетат)
СН
3
СОСН
2
СООН,
β-оксимасляную кислоту (β-оксибутират, или
D-3-гидроксибутират)
СН
3
СНОНСН
2
СООН и ацетон СН
3
СОСН
3
. Ацетон в крови в норме присутствует в крайне низких конценрациях, образуется в результате спонтанного декарбоксилирования ацетоуксусной кислоты и, по-видимому, не имеет определенного физиологического значения. Кетоновые тела синтезируются в печени из ацетил-КоА, а затем с током крови доставляются к клеткам тканей, где окисляются с освобождением энергии. Содержание кетоновых тел колеблется в крови в пределах 100-600 мкмоль/л. В моче в норме не обнаруживаются. Процесс образования кетовых тел (кетогенез) усиливается при недостатке в организме углеводов, когда главным источником энергии являются тканевые резервы жиров. Кетонемия – повышение содержания кетоновых тел в крови, кетонурия – появление их в моче, характерны для голодания, сахарного диабета. Кетоновые тела обеспечивают энергией все ткани организма кроме печени, а для головного мозга (в отсутствии глюкозы) являются важным источником энергии.
При высокой концентрации ацетоацетата часть его неферментативно декарбоксилируется, превращаясь в ацетон.
Ацетон не утилизируется тканями, но выделяется с выдыхаемым воздухом и мочой. Таким путём организм удаляет избыточное количество кетоновых тел, которые не успевают окисляться, но, являясь водорастворимыми кислотами, вызывают ацидоз.
Длительная чрезмерная продукция кетоновых тел (кетоз) приводит к развитию метаболического ацидоза, сдвигу рН, нарушению нормального течения всех видов обмена веществ.
Синтез кетоновых тел начинается с взаимодействия двух молекул ацетил-КоА, которые под действием фермента тиолазы образуют ацетоацетил-КоА. С ацетоацетил-КоА взаимодействует третья молекула ацетил-КоА, образуя 3-гидрокси-3-метилглутарил-КоА
(ГМГ-КоА). Эту реакцию катализирует фермент ГМГ-
КоА-синтаза. Далее ГМГ-КоА-лиаза катализирует расщепление ГМГ-КоА на свободный ацетоацетат и ацетил-КоА. Ацетоацетат может выделяться в кровь или превращаться в печени в другое кетоновое тело - β- гидроксибутират путём восстановления.
3. Проба Легаля на ацетон.
-Внести 5 капель исследуемого раствора+5 капель
NaOH + 5 капель нитропруссида натрия – появляется оранжевое окрашивание.
-Добавить 3 капли ледяной уксусной кислоты – наблюдается появление вишнево-красного окрашивания.
2. Проба Либена на ацетон
-Прибавить к 1 мл мочи 0,5-1 мл NaOH и 5-6 капель раствора йода в KI
-Перемешать. В присутствии ацетона появляется желтоватый осадок, имеющий характерный запах йодоформа.
160 3. Молоко имеет сложный химический состав и по своей ценности превосходит все другие продукты питания, встречающиеся в природе. В нем содержится более 100 различных веществ, в т. ч. более 30 жирных кислот, 20 аминокислот, около 40 минеральных веществ, 17 витаминов, десятки ферментов, личные углеводы и т. д.
В молоке содержится 87% воды, 13% сухих и веществ, в состав которых входят белки (лактоглобулины, глобулины), ферменты, лактопероксидаза, каталаза, липиды, протеиды и др. (липиды, состав которых весьма сложен). В нем, кроме триглицеридов, найдены лецитин, холестерин, эргостерон, свободные жирные кислоты и т. д.
Жир в молоке содержится в форме мелких жировых шариков и составляет от 2,7 до 6%. Каждый жировой шарик окружен тончайший оболочкой (из лецитина), которая предохраняет шарики от склеивания.
Основным углеводом молока является лактоза, которую еще называют молочным сахаром. Он представляет собой дисахарид, состоящий из глюкозы и галактозы. Лактоза легко подвергается брожению под действием молочнокислых бактерий и превращается в молочную кислоту. Благодаря наличию лактозы в молоке поддерживается постоянное осмотическое давление, равное давлению крови. Количество лактозы в молоке находится в пределах 3-6%.
Неорганические вещества составляют 0,75% и состоят из К, Na, Ca, Mg, Fe, H2SO4 и др. Кальций в молоке представлен в виде казеината, фосфата и цитрата. В коллоидном состоянии пребывает и Н 3РО4. Установлена связь микроэлементов молока с важнейшими процессами организма: они связаны в организме с витаминами и ферментами.
С помощью микроэлементов осуществляется обмен веществ в организме и их количество в молоке зависит от содержания микроэлементов в кормах, скармливаемых животным.
Витамины в молоке представлены А, Д, Е, К, С, В1, В2, В3, В6, В12, РР, Н, холин и небольшое количество небелковых азотистых соединений (0,05-0,2%) - мочевина, пуриновых оснований, NH3 и др. В молоке содержатся пигменты, определяющие его цвет - желтый цвет зависит от наличия витамина В2 и каратиноидов.
Молозиво – это вещество, которое присуще всем млекопитающим. Оно выделяется из грудной железы особи женского пола в последние дни беременности и в первые дни после родов, обычно 3-7 дней.У коровы молозиво может выделяться до 10 дней. Молозиво имеет большую энергетическую ценность, чем молоко и содержит мало жидкости, что защищает от перегрузки незрелые почки новорождённого. Плотность питательных веществ в молозиве в несколько раз выше, чем в зрелом молоке. Молозиво имеет слабительные свойства и помогает ребёнку легко избавиться от первородного тёмного стула — мекония. Молозиво предотвращает также появление у ребёнка физиологической желтухи.
В нем содержится больше легкоусваиваемых белков (главным образом альбуминов и глобулинов) при малом содержании казеина, несколько меньше легко усваивающихся эмульгированных жиров и лактозы. В молозиве выше содержание природных антиоксидантов(витамина А,Е, бета-каротина, цинка, селена). Полагают, что это является защитой от «кислородного стресса» новорождённого, который может вести к неконтролируемому усилению свободнорадикальных процессов, также как пониженное содержание жиров. В дополнение к антиоксидантным свойствам витамины А и Е стимулируют развитие иммунитета у новорождённого.
Коровье молозиво применяют при различных иммунодефицитных состояниях, которые сопровождаются частыми инфекционными и хроническими заболеваниями дыхательных путей, включая и астму. При заболеваниях желудочно-кишечного тракта также поможет молозиво. Язвы, колиты, гастриты, панкреатиты и прочие болезни облегчаются с помощью молозива. Заболевания опорно-двигательного аппарата, такие как остеохондроз, остеопороз, полиартрит, ревматоидный артрит сегодня успешно излечиваются с помощью молозива. Помогает оно и при различных нервных расстройствах, усталости, депрессиях, повышенной утомляемости, упадке сил. Также многие компоненты молозива являются целебными при аутоиммунных заболеваниях.
Выделение молозива – это способ передачи иммунной памяти от матери к младенцу. Эту функцию выполняют особые информационные соединения, относящиеся к цитокинам. Их назвали трансфер факторами, или факторами переноса, поскольку их задача – записывать все данные иммунной памяти и транспортировать от материнского организма к новорожденному
Сравнительная хар-ка белкового состава женского, козьего, коровьего молока:
161 4, Исследование мочи позволяет установить заболевания почек и нарушения их функций, а также некоторые изменения обмена веществ, не связанные с поражением других органов. Различают общеклинический анализ и ряд специальных анализов мочи, необходимых для углубленного обследования больного.
При клиническом анализе мочи изучают ее физические свойства, химический состав, производят микроскопические исследования осадка и бактериологический посев.
Для исследования мочи собирают среднюю порцию мочи после туалета наружных половых органов в чистую посуду. Исследование мочи начинается с изучения ее физических свойств. Вначале моча осматривается на прозрачность. В норме моча прозрачная. Помутнение мочи может быть вызвано солями, клеточными элементами, слизью, бактериями и т. д.
Цвет нормальной мочи зависит от ее концентрации и колеблется от соломенно-желтого до янтарно-желтого.
Нормальная окраска мочи зависит от присутствия в ней пигментов (урохрома и других веществ). Бледный, почти бесцветный вид моча приобретает при сильном разведении или низкой относительной плотности, при хронической почечной недостаточности, после инфузионной терапии или приема диуретиков.
Наиболее яркие изменения окраски мочи связаны с появлением в ней билирубина (от зеленоватого до зеленовато- бурого цвета), эритроцитов в большом количестве (от цвета мясных помоев до красного). Некоторые лекарства и пищевые продукты могут менять окраску мочи: она становится красной после приема амидопирина и красной свеклы; ярко-желтой - после приема акрихина, аскорбиновой кислоты, рибофлавина; сине-зеленый - при приеме метиленового синего; зеленовато-желтой - при приеме ревеня; темно-коричневой - при приеме трихопола.
Запах мочи обычно нерезкий, специфический. При разложении мочи бактериями (обычно внутри мочевого пузыря) появляется аммиачный запах. При наличии кетоновых тел (ацетонемический криз, сахарный диабет) моча приобретает запах ацетона. При врожденных нарушениях метаболизма запах мочи может быть очень специфическим (мышиным, кленового сиропа, хмеля, кошачьей мочи, гниющей рыбы и т. д.).
Реакция мочи в норме кислая или слабокислая. Она может быть щелочной из-за преобладания в рационе овощной диеты, приема щелочных минеральных вод, после обильной рвоты, воспаления почек, при заболеваниях мочевыводящих путей, гипокалиемии. Постоянно щелочная реакция бывает при наличии фосфатных камней.
Относительная плотность (удельный вес) мочи колеблется в широких пределах - от 1,001 до 1,040, что зависит от особенностей обмена веществ, наличия в пище белка и солей, количества выпитой жидкости, характера потоотделения. Плотность мочи определяют с помощью урометра. Повышают относительную плотность мочи содержащиеся в ней сахара (глюкозурия), белки (протеинурия), внутривенное введение рентгеноконтрастных веществ и некоторых лекарственных препаратов.
Повышение температуры воздуха на каждые 3 °С и выше 16 °С снижает относительную плотность мочи на 0,001.
Заболевания почек, при которых нарушается их способность к концентрации мочи, приводят к уменьшению ее плотности, а внепочечная потеря жидкости
- к ее увеличению.
Относительная плотность мочи: ниже
1,008
- гипостенурия;
1,008-010
- изостенурия;
1,010-1,030 - гиперстенурия.
3. Для ренина в плазме имеется субстрат – белок глобулиновой фракции
ангиотензиноген
4. В результате протеолиза от белка отщепляется декапептид под названием
ангиотензин I
5. Ангиотензин I при участии
ангиотензин-превращающего фермента
превращается в
ангиотензин II
6. Главными мишенями ангиотензина II служат
кровеносные сосуды
и
клубочковая зона коры
надпочечников.
7. Стимуляция кровеносных сосудов вызывает их спазм и восстановление
артериального давления
8. Из надпочечников после стимуляции секретируется
альдостерон
, действующий на дистальные канальцы почек.
9. При воздействии на канальцы почек увеличивается реабсорбция
ионов Na
+
, вслед за натрием движется
вода
В результате давление в системе восстанавливается и концентрация ионов натрия увеличивается в плазме крови, а, значит и в первичной моче.
Механизм действия - Цитозольный.
Мишени и эффекты
Воздействует на слюнные железы, на дистальные канальцы и собирательные трубочки почек. В почках усиливает
реабсорбцию ионов натрия
и потерю ионов калия посредством следующих эффектов:
увеличивает количество Na
+
,K
+
-АТФазы на базальной мембране эпителиальных клеток,
стимулирует синтез митохондриальных белков и увеличение количества нарабатываемой в клетке энергии для работы Na
+
,K
+
-АТФазы,
стимулирует образование Na-каналов на апикальной мембране клеток почечного эпителия.
Патология
Гипофункция
Не отмечена.
157
Гиперфункция
Синдром Конна
(первичный альдостеронизм) – возникает при аденомах клубочковой зоны. Характеризуется триадой признаков: гипертензия, гипернатриемия, алкалоз.
Вторичный
гиперальдостеронизм – гиперплазия и гиперфункция юкстагломерулярных клеток и избыточная секреция ренина и ангиотензина II.
4. Кровь — жидкая подвижная соединительная ткань внутренней среды организма, которая состоит из жидкой среды — плазмы и взвешенных в ней клеток — форменных элементов: клеток лейкоцитов, постклеточных структур (эритроцитов) и тромбоцитов (кровяные пластинки). Циркулирует по замкнутой системе сосудов под действием силы ритмически сокращающегося сердца и не сообщается непосредственно с другими тканями тела ввиду наличия гистогематических барьеров. В среднем, массовая доля крови к общей массе тела человека составляет 6,5-7 %.
Ли́квор — жидкость, постоянно циркулирующая в желудочках головного мозга, ликворопроводящих путях, субарахноидальном (подпаутинном) пространстве головного и спинного мозга.
Отделяемое из верхних дыхательных путей(мазки, слизь, соскоб из слизистой части)
Отделяемое из нижних отделов дыхательных путей(макрота-слизистое выделение из дыхательных путей и лёгких)
Жёлчь- жёлтая, коричневая или зеленоватая, горькая на вкус, имеющая специфический запах, выделяемая печенью и накапливаемая в жёлчном пузыре жидкость.
Моча — биологическая жидкость, в составе которой из организма выводятся продукты обмена веществ.
Методы.
Основные принципы метода полимеразной цепной реакции. Полимеразная цепная реакция является одним из методов ДНК-диагностики, позволяющая увеличить число копий детектируемого участка генома бактерий или вирусов в миллионы раз с использованием фермента ДНК-полимеразы. Суть метода заключается в многократном копировании в пробирке определённых участков ДНК в процессе повторяющихся температурных циклов. 3 этапа:1)выделение ДНК-клиническая проба подвергается специальной обработке, в результате которой происходит лизис клеточного материала, удаление белковых и полисахаридных фракций и получение раствора ДНК или РНК.
2)амплификация специфических фрагментов-накопление коротких специфических фрагментов ДНК в количестве, необходимом для их дальнейшей детекции.3)детекция продуктов амплификации-разделение смеси продуктов амплификации, полученной на 2 стадии, методом горизонтального электрофореза в агарозном геле. Добавляется раствор бромистого этидия, для образования соединений.
Спектрофотометрия-метод качественного и количественного анализа веществ, основанный на измерении оптической плотности или коэффициента пропускания света веществ в области максимального поглощения или пропускания монохроматического света, что увеличивает точность количественного анализа.
Электрофорез-метод разделения заражённых частиц при движении их в растворе под действием внешнего электрического поля. Различают на бумаге, на ацетате целлюлозы, в геле, в тонком слое сорбента.
ИФА-иммунохимический метод, сущность которого заключается в специфическом взаимодействии антитела и антигена с последующим присоединением к полученному комплексу коньюгата. Стадии: 1)специфические ангтигены пришиты к пластику лунок планшета. В лунку добавляется исследуемая сыворотка и если в ней есть антитела, во время инкубации происходит взаимоузнавание, в рез-те кот-го образуется связь антиген/антитело. 2) после отмывки лунки от не связавшихся субстанций в каждую лунку добавляются вторые антитела. Они узнают человеческие антитела определённого типа. К ним пришит активный фермент, такое соединение называется коньюгат. Происходит узнавание первых и вторых антител,образуется структура «сэндвич». 3)после отмывки не связавшегося коньюгата в лунку добавляется бесцветный субстрат на который действует фермент. В результате превращается в окрашенный продукт. Количество измерятся на фотометре при определённой длине волны.
Методы суход химии-тест полоски.
Иммуноэлектрохемилюминесцентный метод-метод, основанный на взаимодействии моноклональных антител, содержащих рутений2-трис и трипропиламин, с антигеном, с образованием иммунного комплекса,который захватывается вторичными моноклональнымиантителами, связанными посредством дополнительных лигандов с
158 магнитными микрочастицами.
Образовавшийся комплекс поступает в зону рабочего элетрода.
Хемилюминисцентная реакция-свечение рутения- превращается в элеткрический сигнал, интенсивность которого определяется концентрацией исследуемого вещества.
Колориметрия-совокупность методов количественного анализа, основанных на зависимости интенсивности окраски раствора от концентрации в нём окрашенных веществ. Окрашенный соединения образуются в результате взаимодействия исследуемых метаболитов с реактивами либо при расщеплении ферментами хромогенных субстратов.
Масс-спектрометрия-метод исследования вещества, основанный на определении массы и количества ионов этого вещества.
Фотометрия-оптический метод количественного анализа, основанный на измерении светового потока
(эмиссионная, абсорбиционная)
Центрифугирование по градиенте плоскости-метод основан на разной скорости осаждения частиц с разной формой, размерами и плотностью.
Билет 46
1. Изучение окисления в организме было начато в 18 в. А. Лавуазье; в дальнейшем значительный вклад в исследование БО (его локализация в живых клетках, связь с др. процессами обмена веществ, механизмы ферментативных окислительно-восстановительных реакций, аккумуляция и превращение энергии и др.) внесли О. Варбург, Г. Виланд (Германия), Д. Кейлин, Х. Кребс, П. Митчелл
(Великобритания), Д. Грин, А. Ленинджер, Б. Чанс, Э. Рэкер (США), а в СССР -А. Н.Бах,В. И.
Палладин, В. А. Энгельгардт, С. Е. Северин, В. А. Белицер, В. П. Скулачев и др.
В 1777г французский химик Антуан ЛоранЛавуазье(1743-1794), впервые правильно истолковал явление горения как процесс соединения веществ с О
2
. Так как горение и дыхание сопровождаются потреблением О
2 и выделение
СО
2
, он предположил что, в их основе лежит один процесс. Однако у дыхания были существенные отличия от горения: оно шло при низкой температуре, без пламени и в присутствии воды.
В конце XIXвека русские исследователи А.Н. Бах и В.И. Палладин, работая независимо друг от друга, предложили 2 основные теории для объяснения процессов, протекающих в ходе биологического окисления.
В 1897г Алексей Николаевич Бах(1857-1946) сформулировал «перекисную теорию окисления», согласно которой молекула О
2
сначала активируется. Активация О
2 происходит в результате разрыва одной его связи (-О-О-) и присоединения к органическим веществам – оксидазам. Активированный О
2 при взаимодействии с окисляемым веществом образует перекись.
Теория «перекисного окисления» Баха нашла свое подтверждение, однако главный механизм БО оказался иным.
Важнейшая заслуга в развитии учения о
БО принадлежит русскому ученому ботанику и биохимику В.И.Палладину (1859-1922), который создал теорию дыхания, как совокупности ферментативных процессов. Он предположил, что окисление субстратов может происходить в 2 фазы:
1). Анаэробная фаза. В этой фазе особые вещества хромогены (R) отщепляют Н от субстратов и восстанавливаются
(RH
2
).
2). Аэробная фаза. Восстановленные хромогеныRH
2
передают Н на О
2
В последствии теория В.И. Паладина подтвердилась для процессов митоходриального окисления, а хромогены, принимающие участие в отнятии водорода от субстратов, в настоящее время называются ферментами дегидрогеназами.
159
Современные представления о биологическом окислении
Согласно современной теории БО:
Окисление происходит как в аэробных, так и в анаэробных условиях.
В аэробных организмах существует несколько путей использования О
2
Реакции БО необходимы в первую очередь для получения энергии в форме АТФ, а также для синтеза новых веществ, разрушения ксенобиотиков и продуктов метаболизма.
БО является сложным, многостадийным процессом, в котором ведущую роль играют ферменты оксидоредуктазы.
2. Под термином «кетоновые (ацетоновые) тела» подразумевают ацетоуксусную кислоту (ацетоацетат)
СН
3
СОСН
2
СООН,
β-оксимасляную кислоту (β-оксибутират, или
D-3-гидроксибутират)
СН
3
СНОНСН
2
СООН и ацетон СН
3
СОСН
3
. Ацетон в крови в норме присутствует в крайне низких конценрациях, образуется в результате спонтанного декарбоксилирования ацетоуксусной кислоты и, по-видимому, не имеет определенного физиологического значения. Кетоновые тела синтезируются в печени из ацетил-КоА, а затем с током крови доставляются к клеткам тканей, где окисляются с освобождением энергии. Содержание кетоновых тел колеблется в крови в пределах 100-600 мкмоль/л. В моче в норме не обнаруживаются. Процесс образования кетовых тел (кетогенез) усиливается при недостатке в организме углеводов, когда главным источником энергии являются тканевые резервы жиров. Кетонемия – повышение содержания кетоновых тел в крови, кетонурия – появление их в моче, характерны для голодания, сахарного диабета. Кетоновые тела обеспечивают энергией все ткани организма кроме печени, а для головного мозга (в отсутствии глюкозы) являются важным источником энергии.
При высокой концентрации ацетоацетата часть его неферментативно декарбоксилируется, превращаясь в ацетон.
Ацетон не утилизируется тканями, но выделяется с выдыхаемым воздухом и мочой. Таким путём организм удаляет избыточное количество кетоновых тел, которые не успевают окисляться, но, являясь водорастворимыми кислотами, вызывают ацидоз.
Длительная чрезмерная продукция кетоновых тел (кетоз) приводит к развитию метаболического ацидоза, сдвигу рН, нарушению нормального течения всех видов обмена веществ.
Синтез кетоновых тел начинается с взаимодействия двух молекул ацетил-КоА, которые под действием фермента тиолазы образуют ацетоацетил-КоА. С ацетоацетил-КоА взаимодействует третья молекула ацетил-КоА, образуя 3-гидрокси-3-метилглутарил-КоА
(ГМГ-КоА). Эту реакцию катализирует фермент ГМГ-
КоА-синтаза. Далее ГМГ-КоА-лиаза катализирует расщепление ГМГ-КоА на свободный ацетоацетат и ацетил-КоА. Ацетоацетат может выделяться в кровь или превращаться в печени в другое кетоновое тело - β- гидроксибутират путём восстановления.
3. Проба Легаля на ацетон.
-Внести 5 капель исследуемого раствора+5 капель
NaOH + 5 капель нитропруссида натрия – появляется оранжевое окрашивание.
-Добавить 3 капли ледяной уксусной кислоты – наблюдается появление вишнево-красного окрашивания.
2. Проба Либена на ацетон
-Прибавить к 1 мл мочи 0,5-1 мл NaOH и 5-6 капель раствора йода в KI
-Перемешать. В присутствии ацетона появляется желтоватый осадок, имеющий характерный запах йодоформа.
160 3. Молоко имеет сложный химический состав и по своей ценности превосходит все другие продукты питания, встречающиеся в природе. В нем содержится более 100 различных веществ, в т. ч. более 30 жирных кислот, 20 аминокислот, около 40 минеральных веществ, 17 витаминов, десятки ферментов, личные углеводы и т. д.
В молоке содержится 87% воды, 13% сухих и веществ, в состав которых входят белки (лактоглобулины, глобулины), ферменты, лактопероксидаза, каталаза, липиды, протеиды и др. (липиды, состав которых весьма сложен). В нем, кроме триглицеридов, найдены лецитин, холестерин, эргостерон, свободные жирные кислоты и т. д.
Жир в молоке содержится в форме мелких жировых шариков и составляет от 2,7 до 6%. Каждый жировой шарик окружен тончайший оболочкой (из лецитина), которая предохраняет шарики от склеивания.
Основным углеводом молока является лактоза, которую еще называют молочным сахаром. Он представляет собой дисахарид, состоящий из глюкозы и галактозы. Лактоза легко подвергается брожению под действием молочнокислых бактерий и превращается в молочную кислоту. Благодаря наличию лактозы в молоке поддерживается постоянное осмотическое давление, равное давлению крови. Количество лактозы в молоке находится в пределах 3-6%.
Неорганические вещества составляют 0,75% и состоят из К, Na, Ca, Mg, Fe, H2SO4 и др. Кальций в молоке представлен в виде казеината, фосфата и цитрата. В коллоидном состоянии пребывает и Н 3РО4. Установлена связь микроэлементов молока с важнейшими процессами организма: они связаны в организме с витаминами и ферментами.
С помощью микроэлементов осуществляется обмен веществ в организме и их количество в молоке зависит от содержания микроэлементов в кормах, скармливаемых животным.
Витамины в молоке представлены А, Д, Е, К, С, В1, В2, В3, В6, В12, РР, Н, холин и небольшое количество небелковых азотистых соединений (0,05-0,2%) - мочевина, пуриновых оснований, NH3 и др. В молоке содержатся пигменты, определяющие его цвет - желтый цвет зависит от наличия витамина В2 и каратиноидов.
Молозиво – это вещество, которое присуще всем млекопитающим. Оно выделяется из грудной железы особи женского пола в последние дни беременности и в первые дни после родов, обычно 3-7 дней.У коровы молозиво может выделяться до 10 дней. Молозиво имеет большую энергетическую ценность, чем молоко и содержит мало жидкости, что защищает от перегрузки незрелые почки новорождённого. Плотность питательных веществ в молозиве в несколько раз выше, чем в зрелом молоке. Молозиво имеет слабительные свойства и помогает ребёнку легко избавиться от первородного тёмного стула — мекония. Молозиво предотвращает также появление у ребёнка физиологической желтухи.
В нем содержится больше легкоусваиваемых белков (главным образом альбуминов и глобулинов) при малом содержании казеина, несколько меньше легко усваивающихся эмульгированных жиров и лактозы. В молозиве выше содержание природных антиоксидантов(витамина А,Е, бета-каротина, цинка, селена). Полагают, что это является защитой от «кислородного стресса» новорождённого, который может вести к неконтролируемому усилению свободнорадикальных процессов, также как пониженное содержание жиров. В дополнение к антиоксидантным свойствам витамины А и Е стимулируют развитие иммунитета у новорождённого.
Коровье молозиво применяют при различных иммунодефицитных состояниях, которые сопровождаются частыми инфекционными и хроническими заболеваниями дыхательных путей, включая и астму. При заболеваниях желудочно-кишечного тракта также поможет молозиво. Язвы, колиты, гастриты, панкреатиты и прочие болезни облегчаются с помощью молозива. Заболевания опорно-двигательного аппарата, такие как остеохондроз, остеопороз, полиартрит, ревматоидный артрит сегодня успешно излечиваются с помощью молозива. Помогает оно и при различных нервных расстройствах, усталости, депрессиях, повышенной утомляемости, упадке сил. Также многие компоненты молозива являются целебными при аутоиммунных заболеваниях.
Выделение молозива – это способ передачи иммунной памяти от матери к младенцу. Эту функцию выполняют особые информационные соединения, относящиеся к цитокинам. Их назвали трансфер факторами, или факторами переноса, поскольку их задача – записывать все данные иммунной памяти и транспортировать от материнского организма к новорожденному
Сравнительная хар-ка белкового состава женского, козьего, коровьего молока:
161 4, Исследование мочи позволяет установить заболевания почек и нарушения их функций, а также некоторые изменения обмена веществ, не связанные с поражением других органов. Различают общеклинический анализ и ряд специальных анализов мочи, необходимых для углубленного обследования больного.
При клиническом анализе мочи изучают ее физические свойства, химический состав, производят микроскопические исследования осадка и бактериологический посев.
Для исследования мочи собирают среднюю порцию мочи после туалета наружных половых органов в чистую посуду. Исследование мочи начинается с изучения ее физических свойств. Вначале моча осматривается на прозрачность. В норме моча прозрачная. Помутнение мочи может быть вызвано солями, клеточными элементами, слизью, бактериями и т. д.
Цвет нормальной мочи зависит от ее концентрации и колеблется от соломенно-желтого до янтарно-желтого.
Нормальная окраска мочи зависит от присутствия в ней пигментов (урохрома и других веществ). Бледный, почти бесцветный вид моча приобретает при сильном разведении или низкой относительной плотности, при хронической почечной недостаточности, после инфузионной терапии или приема диуретиков.
Наиболее яркие изменения окраски мочи связаны с появлением в ней билирубина (от зеленоватого до зеленовато- бурого цвета), эритроцитов в большом количестве (от цвета мясных помоев до красного). Некоторые лекарства и пищевые продукты могут менять окраску мочи: она становится красной после приема амидопирина и красной свеклы; ярко-желтой - после приема акрихина, аскорбиновой кислоты, рибофлавина; сине-зеленый - при приеме метиленового синего; зеленовато-желтой - при приеме ревеня; темно-коричневой - при приеме трихопола.
Запах мочи обычно нерезкий, специфический. При разложении мочи бактериями (обычно внутри мочевого пузыря) появляется аммиачный запах. При наличии кетоновых тел (ацетонемический криз, сахарный диабет) моча приобретает запах ацетона. При врожденных нарушениях метаболизма запах мочи может быть очень специфическим (мышиным, кленового сиропа, хмеля, кошачьей мочи, гниющей рыбы и т. д.).
Реакция мочи в норме кислая или слабокислая. Она может быть щелочной из-за преобладания в рационе овощной диеты, приема щелочных минеральных вод, после обильной рвоты, воспаления почек, при заболеваниях мочевыводящих путей, гипокалиемии. Постоянно щелочная реакция бывает при наличии фосфатных камней.
Относительная плотность (удельный вес) мочи колеблется в широких пределах - от 1,001 до 1,040, что зависит от особенностей обмена веществ, наличия в пище белка и солей, количества выпитой жидкости, характера потоотделения. Плотность мочи определяют с помощью урометра. Повышают относительную плотность мочи содержащиеся в ней сахара (глюкозурия), белки (протеинурия), внутривенное введение рентгеноконтрастных веществ и некоторых лекарственных препаратов.
Повышение температуры воздуха на каждые 3 °С и выше 16 °С снижает относительную плотность мочи на 0,001.
Заболевания почек, при которых нарушается их способность к концентрации мочи, приводят к уменьшению ее плотности, а внепочечная потеря жидкости
- к ее увеличению.
Относительная плотность мочи: ниже
1,008
- гипостенурия;
1,008-010
- изостенурия;
1,010-1,030 - гиперстенурия.