• 
  Микробиологический принцип. До назначения препарата следует установить возбудителя инфекции и определить его индивидуальную чувствительность к антимикроб­ным химиотерапевтическим препаратам. По результатам антибиотикограммы больному назначают препарат узкого спектра действия, обладающий наиболее выраженной активностью в отношении конкретного возбудителя, в дозе, в 2–3 раза превышающей минимальную ингибирующую концентрацию. Если возбудитель пока неизвестен, то обычно назначают препараты более широ­кого спектра, активные в отношении всех возможных микробов, наиболее часто вы­зывающих данную патологию. Коррекцию лечения проводят с учетом результатов бак­териологического исследования и опреде­ления индивидуальной чувствительности конкретного возбудителя (обычно через 2–3 дня). Начинать лечение инфекции нужно как можно раньше (во-первых, в начале заболевания микробов в организме меньше, во-вторых, препараты активнее действуют на растущих и размножающихся микробов).
  
• 
  Фармакологический принцип. Учитывают особенности препарата его фармакокинетику и фармакодинамику, распределение в организме, кратность введения, возможность сочетания препаратов и т. п. Дозы препаратов должны быть достаточными для того, чтобы обеспечить в биологических жидкостях и тканях микробостатические или микробоцидные концентрации. Необходимо представлять оп­тимальную продолжительность лечения, так как клиническое улучшение не является основанием для отмены препарата, потому что в организме могут сохраняться возбудители и может быть рецидив болезни. Учитывают также оптимальные пути введения препарата, так как многие антибиотики плохо всасываются из ЖКТ или не проникают через гематоэнцефалический барьер.
  

• 
  Клинический принцип. При назначении пре­парата учитывают, насколько безопасным он будет для данного пациента, что зависит от индивидуальных особенностей состояния больного (тяжесть инфекции, иммунный статус, пол, на­личие беременности, возраст, состояние функции печени и почек, сопутствующие заболевания и т. п.) При тяжелых, угрожающих жизни инфекциях особое значение имеет своевременная антибиотикотерапия. Таким пациентам назначают комбинации из двух-трех препаратов, чтобы обеспечить максимально широкий спектр действия. При назначении комбинации из нескольких препаратов следует знать, насколько эффективным против возбудителя и безопасным для пациента будет сочетание данных препаратов, т. е. чтобы не было антагонизма лекарственных средств в отно­шении антибактериальной активности и не было суммирования их токсических эффектов.
  
• 
  Эпидемиологический принцип. Выбор препарата, особенно для стационарного больного, должен учитывать состояние резистентности микробных штаммов, циркулирующих в данном отделении, стационаре и даже регионе. Следует помнить, что антибиотикорезистентность может не только приобретаться, но и теряться, при этом восстанавливается природная чувствительность микроорганизма к препарату. Не изменяется только природная устойчивость.
  
• 
  Фармацевтический принцип. Необходимо учитывать срок годности и соблюдать правила хранения препарата, так как при нарушении этих правил антибиотик может не только по­терять свою активность, но и стать токсич­ным за счет деградации. Немаловажна также и стоимость препарата.
  

---

 

Существуют определенные условия, при которых антибиотик может оказать бактериостатическое или бактерицидное действие на микробную клетку:

 

·         Антибиотик должен проникать в клетку;

·         Антибиотик должен вступить во взаимодействие с структурой-мишенью, которая выполняет жизненно важную для жизнедеятельности бактерий функцию, и подавить эту функцию;

·         Антибиотик должен сохранять свою структуру.

При нарушении одного из этих условий формируется лекарственная устойчивость микроорганизмов.

 

Антибиотики должны отвечать следующим требованиям:

 

- быть активными в отношении одного или нескольких патогенных микроорганизмов;

- хорошо всасываться и распределяться в организме, то есть достаточно долго сохраняться в очаге инфекции в концентрациях, превышающих минимально подавляющие концентрации (МПК);

- быть нетоксичными, не проявлять отрицательного побочного действия.

Микробиологический принцип антибиотикотерапии реализуется в бактериологических лабораториях, куда направляется клинический материал, полученный от больных. Очень важным при выделении микроорганизмов является определение их чувствительности к антибиотикам с целью выбора оптимального препарата для лечения. Для этой цели применяются много методов, два из которых имеют наибольшее значение:

 1. Метод индикаторных (диффузных) дисков

2. Метод серийных разведений

 Метод стандартных дисков (метод диффузии в агар) чаще используется для выбора антибиотиков в клинических условиях. Это качественный метод, позволяет оценить, чувствителен или устойчив микроб к препарату.  Питательную среду (Мюллера-Хинтона, АГВ) разливают в чашки, помещенные на строго горизонтальной поверхности, заполнив их на одинаковую высоту 4 мм (25 мл среды для чашек с внутренним диаметром 9 см). Используют чистую суточную культуру, соответствующую по плотности 0,5 по стандарту МакФарланда и содержащую примерно 1,5·10 КОЕ/мл. Тампон необходимо погрузить в суспензию микроорганизма

---

, затем отжать о стенки пробирки. Посев проводят штриховыми движениями в трех направлениях, поворачивая чашку Петри на 60°, засевая поверхность питательного агара сплошным газоном. После посева крышку чашки приоткрывают не более чем на 15 мин и дают поверхности среды подсохнуть. Затем стерильным пинцетом следует положить на поверхность агара бумажные диски (не более 6 на чашку) диаметром 6+-0,5 мм, пропитанных раствором определенного антибиотика, и слегка придавить. Содержание антибиотика в диске указано на этикетке и соответствуют рекомендациям ВОЗ и варьирует в зависимости от его терапевтической дозы и выражается в мкг/мл или в единицах действия (ЕД). Расстояние между дисками и краем чашки должно быть не менее 15 мм. Чашки инкубируют 18-24 ч при 35-37°С в перевернутом положении. При наличии чувствительной к антибиотику флоры вокруг соответствующих дисков отмечается зона задержки роста микроорганизмов различного размера. Диаметр зоны измеряют линейкой в самом широком месте, результаты выражают в мм и сравнивают с данными специальных таблиц, где указано, является ли выделенный микроорганизм чувствительным, умеренно чувствительным или устойчивым к испытуемому антибиотику.

 Метод дисков не дает надежных данных при определении чувствительности микроорганизмов к плохо диффундирующим в агар полипептидным антибиотикам (например, полимиксин, ристомицин). Если эти антибиотики предполагается использовать для лечения, рекомендуется определять чувстви­тельность микроорганизмов методом серийных разведений.

 Метод серийных разведений (количественный) является более чувствительным и точным и позволяет определить минимальную концентрацию антибиотика, ингибирующую рост исследуемой культуры бактерий, выраженную в мкг/мл или ЕД/мл. С целью определения МИК (минимальной ингибирующей концентрации) делают серийные разведения антибиотика и добавляют их в жидкую или плотную питательную среду, а затем определяют, при какой минимальной концентрации антибиотика произошло подавление роста исследуемого штамма возбудителя.

 Метод серийных разведений в плотной питательной среде.

 Агар с тремя концентрациями антибиотика разливают в чашки Петри. Контролем служит чашка с агаром без антибиотиков. Посев производят петлей или лучше штампом-репликатором, который позволяет одновременно определить чувствительность к трем концентрациям антибиотиков 25-50 культур (в зависимости от числа лунок в штампе). Учет роста в термостате осуществляют спустя сутки. Культура считается чувствительной, если на месте посева нет роста ни одной колонии.

---

 Оценка результатов:

- чувствительные культуры – их рост подавлен всеми тремя концентрациями (можно применять антибиотики в средней терапевтической дозе);

- среднечувствительные (можно применять антибиотики только в увеличенной дозе) – рост подавляют вторая и третья концентрация антибиотиков;

- умеренно-устойчивые подавляет только третья наиболее высокая концентрация (антибиотики применяют только местно);

- устойчивые (антибиотики применять нельзя по тестам in vitro) - растут на всех трех концентрациях.

 Методы серийных разведений в бульоне.

 Различают два основных варианта метода серийных разведений в бульоне в зависимости от объема используемой питательной среды: макрометод (пробирочный) и микрометод (в планшетах, при величине конечного объема 0,2 мл и меньше).

---

Макрометод. Тестирование проводится в объеме 1 мл каждого разведения антибиотика с конечной концентрацией микроорганизма примерно 5х10⁵ КОЕ/мл. Питательный бульон разливают по 0.5 мл в каждую пробирку. Затем 0,5 мл раствора антибиотика стерильной пипеткой вносят в первую пробирку с 0,5 мл бульона. Перемешивают и вновь переносят 0,5 мл из этой пробирки во вторую пробирку, также первоначально содержащую 0,5 мл бульона. Получается ряд пробирок с растворами антибиотика, концентрация которого отличается от соседних в 2 раза. Для инокуляции используют стандартную микробную взвесь, эквивалентную стандарту мутности 0,5 по МакФарланду, разведенную в 100 раз на питательном бульоне, после чего ее концентрация в среде составит 10⁶ КОЕ/мл. По 0,5 мл инокулюма вносят в каждую пробирку с 0,5 мл соответствующего разведения антибиотика и в одну пробирку с 0,5 мл бульона без антибиотика («отрицательный» контроль). Пробирки закрывают стерильными ватно-марлевыми пробками или металлическими колпачками, инкубируют при 37 °С. Сроки инкубации зависят от вида микроорганизма (16-24 ч). Определяют МИК, которая соответствует концентрации препарата в последней пробирке с видимой задержкой роста (прозрачная питательная среда).

 Микрометод (с использованием коммерческих тест-систем). Постановка во многом сходна с макрометодом. Чаще используют 96-луночные планшеты для иммунологических исследований.

Преимуществом метода является возможность одновременно применять достаточное количество планшетов с растворами антибиотиков, длительно хранить их в холодильнике и использовать по мере необходимости.

Первым этапом является изготовление планшетов, пригодных для хранения. Концентрацию рабочих растворов антибиотиков, вносимых в лунки планшетов, рассчитывают исходя из схемы последующей инокуляции – необходимо создание в лунке конечной концентрации исследуемого микроорганизма. После внесения антибиотиков в лунки, запаянные планшеты могут храниться при температуре ниже –60 °С до момента использования. Повторное замораживание не допускается. Планшеты после извлечения из холодильника выдерживают до достижения ими комнатной температуры. Инокуляцию проводят в течение 15 мин после приготовления суспензии. Инкубацию осуществляют при 37 °С в течение 16…20 ч.

Учет результатов при постановке макро- и микрометодов проводят визуально по появлению видимой мутности или спектрофотометрически, сравнивая рост в присутствии антибиотика с ростом в ячейке без него. За МИК принимают минимальную концентрацию, обеспечивающую полное подавление видимого роста.

---

Смотрите также файлы

• Познавательный компонент.docx

• Невербальная коммуникация. Основные блоки невербальной коммуникации.doc

• Самостоятельная работа по дисциплине Финансовый анализ коммерческих организаций.docx

• Лабораторная работа 4 java аннотация Массивы и циклы Гурьев Данил Сергеевич риз120938у. Прикладная информатика.docx

• Учебнометодическое пособие по выполнению практических работ для студентов по специальности Техническая эксплуатация и обслуживание электрического и электромеханического оборудования.doc