Файл: Кощеев, А. К. Люминесцентный анализ пищевых продуктов.pdf

Скачать файл
Заказать решение

ВУЗ: Не указан

Категория: Не указан

Дисциплина: Не указана

Добавлен: 21.10.2024

Просмотров: 47

Скачиваний: 0

ВНИМАНИЕ! Если данный файл нарушает Ваши авторские права, то обязательно сообщите нам.

5 минут с обратным воздушным холодильником, перево­ дят в мерные колбы на 100 мл, доводят объем дистилли­ рованной водой до метки и фильтруют. В фильтрате про­ изводят определение тиамина тиохромным методом, предварительно освобождая его от люминесцирующих примесей по способу, описанному ниже.

Мо л о к о . Отмеривают цилиндром 50—100 мл мо­ лока и подвергают его обезжириванию центрифугирова­ нием. Обезжиренное молоко переводят в тот же цилиндр и доводят объем водой до первоначального. Молоко взбалтывают, берут пипеткой по 15—30 мл в 3 колбы и подкисляют концентрированным раствором соляной кис­ лоты до pH 1,5—2 (для коровьего молока на 30 мл идет 0,3—0,4 мл соляной кислоты).

Отвешивают на аналитических весах 3 навески по 50—100 мг пепсина (в зависимости от количества моло­ ка), растирают его в ступке с 1 0 мл 0 , 1 % - н о г о раствора соляной кислоты и присоединяют к пробам с подкислен­ ным молоком. Колбы ставят в термостат при температу­ ре 45° С на 4—5 часов или при температуре 37° С на 6—7 часов. Пепсиновые гидролизаты нейтрализуют на­ сыщенным раствором бикарбоната натрия до pH 3,8—4. Количество необходимого для нейтрализации бикарбо­ ната натрия устанавливают в гидролизате одной из колб, которую употребляют специально для этой цели. Берут 2 навески по 50 мг препарата из плесени Aspergillus, растирают в ступке с 7 мл буферной смеси с pH 3,8, при­ соединяют к пепсиновому гидролизату и добавляют 0,5 мл толуола. Колбы ставят в термостат при температуре

45° (37°) С на 12— 16 часов.

По истечении срока инкубации гидролизаты кипятят с обратным воздушным холодильником, переводят в мер­ ные колбы на 50 мл, доводят объем дистиллированной водой до метки и фильтруют. В фильтрате производят определение тиамина тиохромным методом, предвари­ тельно освобождая фильтрат от флуоресцирующих при_месей по способу, описанному ниже.

Методика исследования. О с в о б о ж д е н и е ф и л ь т ­

р а т а от

приме с и , о б л а д а ю щ е й ф л у о р е с ­

ц е н ц и е й .

При исследовании мяса и особенно молока

освобождение от примеси, обладающей флуоресценцией, можно проводить не прибегая к адсорбционным колон­ кам, путем встряхивания фильтратов с изобутиловым или

86

бутиловым спиртом. Для этого в 2 делительные воронки вводят по 25 мл фильтрата от каждой навески, добав­ ляют равный объем изобутилового спирта, встряхивают в течение 3 минут и дают слоям отстояться.

После разделения нижний водный слой переводят в

цилиндры, объем доводят до

первоначального (25 мл)

*.

О к и с л е н и е т и а м и н а

в т и о х р о м .

Окисление

тиамина в тиохром проводят так, как это

описано

на

о. 83, с тем различием, что фильтрат берут в количестве 5 мл и воды не добавляют. Только для некоторых объек­

тов (свинина) количество фильтрата не должно

превы­

шать 5 мл.

 

 

 

 

 

V

(С - С Д - Ь - У

 

 

 

где

 

{ d - d , ) - g - V r \0 ’

 

 

 

X — количество тиамина, мг°/о;

 

 

(С — C i ) — среднее из показаний

флуорометра для

 

испытуемого раствора минус среднее из

 

показаний флуорометра для «слепой»

 

пробы;

 

флуорометра для

 

(й — d \ ) — среднее из показаний

 

стандартного раствора минус среднее из

 

показаний флуорометра

для «слепой»

 

b — количество тиамина в

1

мл стандартно-

 

b — количество тиамина в 1 мл стандартно­

 

го раствора, мкг;

 

 

 

 

g — навеска, г;

окисления,

мл;

 

V3— объем

жидкости для

 

10 — коэффициент пересчета

микрограммов в

 

миллиграмм-проценты.

 

 

 

Определение витамина В х в объектах, содержащих лю-

минесцирующие примеси. Бутиловые вытяжки тиохрома, окрашенные в темный цвет, в ультрафиолетовом свете имеют желто-зеленую люминесценцию, маскирующую флуоресценцию тиохрома.

Особенно богаты люминесцирующими примесями зер­ новые и продукты их переработки (мука ржаная, пше­ ничная грубого помола, отруби, гречневая крупа, бобо­ вые). Значительное количество люминесцирующих при­

* При встряхивании с изобутиловым спиртом часть воды фильтрата переходит в спирт, вследствие чего объем фильтрата уменьшается. Объем довести дистиллированной водой до первона­ чального.

87

месей содержат жареное мясо и печень. При исследова­ нии этих объектов отмывка фильтратов изобутиловым спиртом — недостаточно радикальное средство, в таких случаях прибегают к адсорбционным колонкам (с. 80).

и

П о д г о т о в к а м а т е р и а л а к и с с л е д о в а н и ю

ф е р м е н т а т и в н а я

о б р а б о т к а

пр о б .

Зерно­

вые объекты.

3 навески по 5—10 г от средней

пробы

тщательно растирают в

фарфоровой

ступке с

70 мл

0,1

н раствора соляной кислоты. Содержимое

ступ­

ки

переводят

в колбу,

ступку споласкивают

15 мл

того же раствора соляной кислоты и присоединяют жидкость к исходным навескам объекта. Колбу вы­

держивают на кипящей водяной

бане в

течение

45 минут, перемешивая содержимое

палочкой,

затем

охлаждают, добавляют насыщенный раствор бикарбона­ та натрия до pH 4,5. Количество бикарбоната, необходи­ мое для нейтрализации, устанавливают на содержимом третьей колбы. Затем в две первые колбы добавляют по 50 мл препарата Aspergillus, растертого в 10 мл буфер­ ной смеси с pH около 4,5 и по 0,5 мл толуола. Колбы по­ мещают в термостат при температуре 45°(37°) С на 12— 16 часов.

По истечении срока инкубации колбы охлаждают, со­ держимое их переводят в цилиндры, доводят объем жид­ кости водой до 50—100 мл и фильтруют, после чего осво­ бождают фильтрат от люминесцирующих примесей по способу, который изложен ниже.

Методика исследования. П р и г о т о в л е н и е

с т а н ­

д а р т н о г о р а с т в о р а

т и о х р о м а .

В мерную

кол­

бу на 100

мл отмеривают калибровочной пипеткой 1 мл

основного

раствора

тиамина

(с. 81), доводят дистилли­

рованной

водой до

метки

и

тщательно

перемешивают

(рабочий раствор). В три стаканчика для окисления от­ меривают по 1 мл рабочего раствора тиамина, добавля­ ют по 4 мл 25%-ного раствора хлористого калия в 0,1 н растворе соляной кислоты. Далее окисление производят так, как это описано на с. 83.

О с в о б о ж д е н и е ф и л ь т р а т а от п р и м е с и , о б л а д а ю щ е й л ю м и н е с ц е н ц и е й . Адсорбционная колонка представляет собой трубку, спаянную из трех трубок различного диаметра и длины. В нижнюю часть второй трубки, там, где она переходит в капилляр, по­ мещают комочек стеклянной ваты, в среднюю часть ко­

лонки — адсорбент. Высота столбика для катиона СДВ-3 — 8 см.

Перед пропусканием фильтрата через колонку с ад­ сорбентом пропускают 20 мл 3%-ного раствора уксусной кислоты, нагретой до температуры 60—70° С. В две ад­ сорбционные колонки вводят от каждой навески по 20 мл фильтрата. После того как весь фильтрат пройдет через колонки (насосом пользоваться не следует), адсорбент промывают 2—3 раза 10 мл дистиллированной воды.

Элюция тиамина с адсорбента осуществляется горячим 25%-ным раствором хлористого калия в 0,1н растворе со­ ляной кислоты. В две колбы отмеривают по 30 мл элюи­ рующей жидкости, подогревают ее до 60—80° С и пропу­ скают через колонки порциями по 5—6 мл (элюирующую жидкость подогревают несколько раз). Элюат собирают в мерные цилиндры, причем объем элюата должен состав­ лять 30 мл. Если объем меньше (вода частично испаряет­

ся при нагревании), его доводят водой

до

первоначаль­

ного *.

т и о х р о м .

Окисление

О к и с л е н и е т и а м и н а в

тиамина в тиохром проводят

так, как

это описано

в разделе по определению витамина Bi

в

препаратах,

с тем различием, что для окисления берут по 5 мл элю­ ата.

Вычисление результатов исследования. В случае ад­ сорбционной модификации флуорометрического метода, расчеты проводят по формуле

v =

( C - Q ) - b - V - n

 

(d — d j - g - Vr m-10 ’

йде X — содержание витамина, мг%;

п — количество элюата, мл;

взятого для адсорб­

т — количество

фильтрата,

ции, мл;

 

 

Остальные обозначения те же, что и в предыдущей

формуле (с. 87).

 

 

Определение тиамина в препаратах и пищевых про­

дуктах с помощью флуороскопа.

Для возбуждения флуо­

* По окончании адсорбции через адсорбционные колонки про­ пускают дистиллированную воду (20—30 мл), 30 мл доведенного до кипения спиртового раствора аммиака (3%-ный аммиак в 70%-ном этиловом спирте), после чего еще раз пропускают дис­ тиллированную воду и перед повторным употреблением — 3%-ный раствор уксусной кислоты (регенерация катионита).

89

Смотрите также файлы