Файл: Новые методы анализа аминокислот, пептидов и белков..pdf
ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 14.10.2024
Просмотров: 135
Скачиваний: 0
Время, мин
Рис. 10. Кривая разделения растворимых триптических пептидов, полученных из 10 мг гемоглобина, на колонке высотой 23 см со сферической смолой РА-35.
I
80 ГЛАВА Г
Заполнение колнки. Колонку заполняют смолой так, как опи сано в разд. 1.6.4. Но предварительно смолу промывают на во ронке Бюхнера 4%-ным едким натром, затем деионизированной водой, 2 М уксусной кислотой, деионизированной водой, 2 М пи ридином, затем снова деионизированной водой и окончательно стартовым буфером. На объем смолы требуется примерно около десяти объемов каждого из реагентов. Далее смолу, суспенди руют в пяти объемах стартового буфера и заполняют колонку полученной суспензией с помощью насоса при скорости подачи 90 мл/ч и температуре 50°С до высоты 23 см.
Режим анализа. Колонку уравновешивают пятью объемами стартового буфера (0,1 М пиридинацетатный буфер pH 3,5) при температуре 50 °С, которая поддерживается в ходе всего ана лиза. Вначале элюирование ведут с помощью линейного гра диента концентрации и pH пиридинацетатного буфера — от 0,1 М пиридина и pH 3,5 до 2,0 М пиридина и pH 5,0. Такой градиент получают, помещая по 259 г стартового буфера (0,1 М, pH 3,5) и конечного буфера (2,0 М, pH 5,0) в два сообщающихся у дна сосуда-смесителя с одинаковым внутренним диаметром. Это уст ройство аналогично простому градиентному устройству, изобра женному на рис. 6Ь в работе Блока и Линга [157]. Отводящую линию из первого сосуда смесителя соединяют через кран с на сосом. Рекомендуется использовать трехходовой кран, для того чтобы в систему можно было включить третий буфер.
Первый сосуд-смеситель должен быть снабжен устройством (магнитной мешалкой) для перемешивания стартового буфера по мере добавления к нему конечного буфера.
Смену буфера производят на 330-й минуте, когда практиче ски закончится постепенное изменение концентрации и pH бу фера и в колонку будет подаваться только конечный буфер для элюирования более прочно адсорбированных на смоле пептидов. Анализ выполняется за 430 мин. На рис. 10 представлена хро матограмма деления пептидов, получаемых при триптическом гидролизе гемоглобина.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Stein W. Н., Moore S., Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 14, 179 (1949).
2.Moore S„ Stein W. H., J. Biol. Chem., 192, 663 (1951).
3.Stein W. H., Proc. Soc. Exptl. Biol. Med., 78, 705 (1951).
4.Stein W. H„ J. Biol. Chem., 201, 45 (1953).
5.Moore S., Stein W. H., J. Biol. Chem., 211, 893 (1954).
6.Stein W. H„ Moore S„ J. Biol. Chem., 211, 915 (1954).
7. |
fallen |
H. H., |
Moore |
S., |
Stein W. |
tf„J. Biol. |
Chem., |
211, 927 |
(1954). |
||
8. |
Talien H. #., Stein |
W. |
H., |
Moore |
S.. J. Biol. |
Chem., |
206, |
825 |
(1954). |
||
9. |
Stein |
W. H., |
Bearn |
A. |
G., |
Moore |
S., J.wClin. |
Invest., |
33, |
410 |
(1954). |
10.Stein W. A., Paladini A. G., Hire G. H.W., Moore S., J. Am. Chem. Soc., 76, 2848 (1954).
|
ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ НА СФЕРИЧЕСКИХ СМОЛАХ |
81 |
11. |
Moore S„ Stein W. Н., J. Biol. Chem., 211, 907 (1954). |
(1958). |
12. |
Moore S., Spackman D. H., Stein W. H., Anal. Chem., 30, 1185 |
13.Spackman D. H., Stein W. H., Moore S., Anal. Chem., 30, 1190 (1958).
14.Walton H. F., Ann. Rev. Phys. Chem., 10, 123 (1959).
15.Strain H. H., Anal. Chem., 32, 3R (1960).
16.Kunin R., Anal. Chem., 32, 67R (1960).
17.Kunin R., Ann. Rev. Phys. Chem., 12, 381 (1961).
18.Heftmann E., Anal. Chem., 34, 13R (1962).
19.Kunin R., McGarvey F. X., Anal. Chem., 34, 48R (1962).
20.Kunin R., McGarvey F. X., Anal. Chem., 34, 101R (1962).
21.Heftmann E„ Anal. Chem., 36, 14R (1964).
22.Walton H. F., Anal. Chem., 36, 51R (1964).
23.Kunin R., Anal. Chem., 36, 142R (1964).
24.Hamilton P. B., Advan. Chromatogr., 2, 3 (1966).
25.Walton H. F., Anal. Chem., 40, 51R (1968).
26.Гельферих Ф., Иониты, ИЛ, M., 1962.
27- |
Giddings J C., Dynamics of Chromatography, Part I, Marcel |
Dekker, |
Inc., |
28. |
New York, 1965. |
|
|
Glueckauf E., Ion Exchange and its Applications, Chemical Society In |
|||
29. |
dustry, London, 1955. |
New |
York, |
Heftmann E., Chromatography, Reinhold Publishing Corp., |
|||
|
1961. |
|
|
30.Samuelson 0., Ion Exchange Separations in Analytical Chemistry, John Wiley and Sons, Inc., New York, 1963.
31.Kingsley G. R„ Anal. Chem., 37, 20R (1965).
32.D’Eustachio A. J., Anal. Chem., 40, 19R (1968).
33.Zweig G., Anal. Chem., 40, 490R (1968).
34.Blackburn S., Amino Acid Determination: Methods and Techniques, Marcel Dekker, Inc., New York, 1968.
35.Edman P., Arch. Biochem., 22, 475 (1949).
36.Smyth D. G., Methods in Enzymology, Vol. 11, Ed by С. H. W. Hirs, Academic Press, New York, 1967, p. 214.
37.Benisek W. F., Cole R. D., Biochem. Biophys. Res. Commun., 20, 655
(1965) .
38.Young J. D., Benjamin E„ Shimizu M., Leung C. Y., Biochemistry, 5, 1481 (1966) .
39.Wang S. S., Carpenter F. H., J. Biol. Chem., 240, 1619 (1965).
40.Lai C. Y., Hoffee P., Horecker B. L., Arch. Biochem. Biophys., 112, 567
(1965).
41. Akabori S., Ohiro K-, Narita K-, Bull. Chem. Soc. Japan, 25, 214 (1952). 41a. Niederwieser A., Curtius H. C., Z. Klin. Chem. Klin. Biochem., 7, 404
(1969).
416. Hamilton P. B„ in «Handbook of Biochemistry: Selected Data for Mole cular Biology», Ed. by H. A. Sober, The Chemical Rubber Co., Cleveland, Ohio, 1968, p. B-43.
42.Berlow S., Arends R., Harries C., Lancet, 85, 241 (1965).
43.Ghadimi H., Partington M. 117., Hunter A., New Eng. J. Med., 265, 221
(1961) .
44.La Du B. N., Howell R. R., Jacoby G. A. et al., Pediatrics, 32, 216 (1963).
45.Frimpter G. W., Haymovitz A., Horwith M., New Eng. J. Med., 268, 333
(1963).
46. Perry T. L., Hansen S., Ваг H., MacDougall L., Science, 152, 776 (1966).
47.Gerrilsen T., Vaughan J. G., Waisman H. A., Biochem. Biophys. Res. Com mun., 9, 493 (1962).
48.Dancis J., Levitz M., Miller S., Wesiall R. G., Brit. Med. J., 1, 91 (1959).
49.Norton P. M., Roitman E., Snyderman S. E., Holt L. E., Jr., Lancet 1, 26 (1962) .
82 |
ГЛАВА I |
50.Lonsdale D„ Barber D. H., New Eng. J. Aled., 271, 1338 (1964).
51.Guthrie R., Whitney S., Phenylketonuria, U. S. Govt. Printing Office, Children’s Bureau Publication No. 419, Washington, D. C., 1964.
52.Sacks W„ J. Appl. Physiol., 17, 985 (1962).
53.Berlet H. H., Progress on Brain Research, Vol. 16, Ed. by W. A. Himevich, J. P. Schade, Elsevier, Amsterdam, 1965, p. 184—215.
54.Jervis G. A., Block R. J., Bolling D., Kanze E., J. Biol. Chem., 134, 105 (1940).
55. Lorincz A. B„ Kuttrier R. E„ Nebraska State Med J., 50, 609 (1965).
56.Dent С. E., Rose G. A., Quart J. Med., 20, 205 (1951).
57.Rosenberg L. E., Science 154, 1341 (1966).
58.Crawhall J. C„ Thompson C. J., Science, 147, 1459 (1965).
59. |
Bell G. E., Slivka D. C„ Huston J. R., J. Lab. Clin. Med., 71, 113 (1968). |
|
60. |
Schafer /. A., Scriver C. R., Efron M. L, New Eng. J. Med., 267, 51 |
|
61. |
(1962). |
e |
Gerritsen T., Kaveggia E., Waisman H. A., |
Pediatrics, 36, 882 (1965). |
|
62.Salzer J. C., Balis M. E„ Cancer Res., 28, 595 (1968).
63.Peisakhov B. /., Klin. Med., 43, 83 (1964).
64. |
Ryan W. |
L., Lorincz A. |
B., |
Nebraska State Med. J., 49, 321 (1964). |
||
65. |
Saunders |
S. J., Barbezat |
G. |
O., Wittniann IF., Hansen J. D. |
L., |
Am J. |
66. |
Clin. Nutr., 20, 760 (1967). |
|
|
|
||
Block W. D., Westhoff M. H„ Metabolism, 15, 46 (1966). |
381 |
(1964). |
||||
67. |
Armstrong |
M. D., Yates |
K. |
N., Am. J. Obstet. Gynecol., 88, |
||
68.Brown R. R„ Science, 157, 432 (1967).
69.Seriver C R., Davies E„ Pediatrics, 36, 592 (1965).
70. |
McCance |
R. A., Morrison |
A. B„ Dent C. E., Lancet I, 131 |
(1955). |
71. |
Dingman |
H.F., Wright S. |
W., J. Mental Deficiency Res, |
8, 77 (1964). |
72.Perry T. L., Jones R. T., J. Clin. Invest., 40, 1363 (1961).
73.Dickinson J. C., Hamilton P. B., J. Neurochem., 13, 1179 (1966).
74.Soupart P., Free Amino Acids of Blood and Urine in the Human, In Amino Acid Pools, Ed. by J. T. Holden, Elsevier, New York, 1962.
75.King J. S., Jr., Clin. Chim. Acta, 9, 441 (1964).
76. Dickinson J. C.. Rosenblum H.. Hamilton P. B., Pediatrics, 36, 2 (1965)
77.Takao T. et al„ Nature, 217, 365 (1968).
78.Agar W. T., Hird F. J. R., Sednu G. S., Biochim. Biophys. Acta, 14, 80 (1954).
79.Lewis О. A. M., Nature, 209, 1239 (1966).
80. Shih V. E., Efron M. L., Mechanic G. L., Anal. Biochem., 20, 299 (1967).
81.Benson J. V., Jr., Cormick J., Patterson J. A., Anal. Biochem., 18, 481 (1967).
82.Piez K- A., Morris L., Anal. Biochem., 1, 189 (1960).
83.Miller E. L, Piez K. A., Anal. Biochem., 16, 320 (1966).
84.Thomson A. R., Miles B. J., Nature, 203, 483 (1964).
85.Hamilton P. B., Anal. Chem., 35, 2055 (1963).
86.Dus K., Lindroth S., Pabst R., Smith R. M„ Anal. Biochem., 14, 41 (1966).
87. |
Kunin R., Ion Exchange Resins, John Wiley and |
Sons, |
Inc., New York, |
88. |
1958. |
13, 265 |
(1965). |
Benson J. V., Jr., Patterson J. A., Anal. Biochem., |
'89. Seno M., Yamabe T., Bull. Chem. Soc. Japan, 34, 1021 (1961).
►90. Cohn E. J., Edsall J. T„ Proteins, Amino Acids, and Peptides, Reinhold Publishing Corp., New York, 1943.
91.Partridge S. M., Brit. Med. Bull., 10, 241 (1954).
92.Ohms J. L, Zee J., Benson J. V., Jr., Patterson J A., Anal. Biochem., 20,
51(1967).
93.Green J. G., Net. Cancer Inst. Monograph No. 21, 447 (1966).
94.Anderson N. G., Green J. G., Barber M. L., Ladd S. F. C., Anal. Biochem., 6, 153 (1963).
хром атогра ф ически й ан ал и з на сф е ри ч е с к и х смолах |
83 |
95.Martin A. J. Р., Synge R. L. М.. Biochem. J., 35, 1358 (1941).
96.Haller IF., Nature, 206, 693 (1965).
97. Doremus R. H., «Ion Exchange in Glasses», Ion Exchange, Ed. by
J. A. Marinsky, Marcel Dekker, New York, 1969.
98.Thompson A. R., Biochem. J., 61, 253 (1955).
99. Schroeder IF. A., Jones R. T., Cormick J., McCalla K-, Anal. Chem., 34, 1570 (1962).
100.Jones R. T., Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 29, 297 (1964).
101.Margoliash E., Smith E. L., Nature, 192, 1121 (1961).
102.Rudlojf V., Braunitzer G., Z. Physiol. Chem., 323, 129 (1961).
103.Benson J. V., Jr., Jones R. T., Cormick J., Patterson J. A., Anal. Biochem., 16, 91 (1966).
104.Moore S. Stein IF. H., J. Biol. Chem., 176, 367 (1948).
105.Jacobs S., Microchem. J., 9, 387 (1965).
106.Jacobs S„ Analyst, 85, 257 (I960).
107.Frame E. G., Russell J. A., Wilhelmi A. E., J. Biol. Chem., 149, 255
(1943).
108.Matsushita S., Iwami N., Mem. Res. Inst. Food Sci., 28, 75 (1967).
109.Yetnm E. IF., Cocking E. C., Analyst, 80, 209 (1955).
110.Singh C., J. Chromatog., 18, 194 (1965).
111.Ruliemann S., J. Chem. Soc., 99, 792 (1911).
112.Troll IF., Caiman R. K., J. Biol. Chem., 200, 803 (1953).
113.Schilling E. D., Burchill P. /., Clayton R. A., Anal. Biochem., 5, 1 (1963).
114.Wainer A., J. Chromatog., 26, 48 (1967).
115.Zacharius R. M., Porter IF. L., J. Chromatog., 30, 190 (1967).
116.Cadavid N. G., Paladini A. C., Anal. Biochem., 9, 170 (1964).
117.Rosen H., Arch. Biochem. Biophys., 67, 10 (1957).
118.Knight W. S., Anal. Biochem., 22, 539 (1968).
119. Thomas A. J., Evans R. A., Siriwardene J. A. D., Robins A. J., Biochem. J., 99, 5C (1966).
120.Kirschenbaum D. M., Anal. Biochem., 12, 189 (1965).
121.Moore S„ personal communication.
122.Pope C. G., Stevens M. F., Biochem. J., 33, 1070 (1939).
123.Satake K., Matsuo A., Take T., J. Biochem. (Tokyo), 58, 90 (1965).
124.Hupe K. P-, Bayer E., J. Gas Chromatog., 5, 197 (1967).
125.U. S. Patent approved for J. A. Patterson, Sondell Research and Deve lopment Company.
126.Anderson N. G., personal communication.
127. Blackburn S., Amino Acid Determination, Marcel Dekker, New York, 1968,
p.124.
128.Hamilton P. B., Anal. Chem., 30, 914 (1958).
129.Spackman D. H., Federation Proc., 23, 371 (1964).
130.Benson J. V., Jr., Patterson J. A., Anal. Chem., 37, 1108 (1965).
131.Horvath C., Lipsky S. R., J. Chromatog. Sci., 7, 109 (1969).
132.Avrameas S., Ternynck T., J. Biol. Chem., 242, 1651 (1967).
133.Kaplan M. E., ICabat E. A., J. Exptl. Med., 123, 1061 (1966).
134.Schroeder IF. A., Robberson B., Anal. Chem., 37, 1583 (1965).
135.Siegel A., Degens E. T., Science, 151, 1098 (1966).
136.Catravas G. N., Anal. Chem., 36, 1146 (1964).
137.Moore S , Stein IF. H., Methods in Enzymology, Vol. 6, Ed. by S. P. Colowick and N. O. Kaplan, Academic Press, New York, 1963, p. 819.
138. DeWolje M: S., Baskurt S., Cochrane W. A., Clin. Biochem., 1, 75 (1967).
139.Gerritsen T., Rehberg M. L., Waisman H. A., Anal. Biochem., 11, 460 (1965).
140.Prescott B. A., Waelsch H., J. Biol. Chem., 167, 855 (1947).
141.Mefferd R. B., Summers R. M., Crayton J. D., J. Chromatog., 35, 469 (1968).