Файл: Новые методы анализа аминокислот, пептидов и белков..pdf

[9, 10], но для основной аминогруппы и таких группировок, как

—ОН и —SH, требуются более жесткие условия. ГМДС, один или вместе с ТМХС, не дает удовлетворительных выходов [114]. Более эффективной оказалась реакция натриевых солей ами­ нокислот с ТМХС [103] или ТМС — ДЭА [87, 105, 114].

Так силилировались ОН- и SH-группы, а также имидазольная группа гистидина [105]. Лучшие выходы для нескольких ТМСаминокислот составляли 75% [114]. С помощью ГХ с примене­ нием силиконового масла в качестве жидкой фазы [106] были разделены производные аланина, валина, лейцина, глутамино­ вой кислоты и фенилаланина. Хроматографированию подверга­ лись также этиловые эфиры N-TMC-аминокислот наряду со свободными основаниями ТМС-эфиров, приготовленными ре­ акцией аминокислот с ГМДС или же удалением лабильной N-TMC-группы аммиаком [107]. Авторы утверждают, что полу­ чены пики аргинина, гистидина и лизина, но не приводят для них времен удерживания.

2.3.2.Силилирование силиламидами

Введение в практику БСА, который, как уже упоминалось, в качестве силильного донора в 50 раз активнее любого монозамещенного амида, позволило осуществить быстрое и ко­ личественное силилирование амидов, мочевин, аминокислот, про­ странственно затрудненных фенолов, карбоновых кислот и енолов [77]. Данные ЯМР и ИК свидетельствуют о предпочтитель­ ности изомера I, для которого характерен быстрый внутримоле­

Реакционную способность можно объяснить конкурированием одной ТМС-группы за О- или N-положение, ослабляющим

Там, где равновесие благоприятствует переносу, могут обме­ ниваться обе снлнльные группы, как в карбоксильных оксигруппах [77]. Впоследствии в качестве силнлирующего агента был использован БСТФА, для которого предложена формула типа II, однако твердое доказательство его структуры отсут­ ствует [116]. Для силилирования аминокислот использовали и другие силиламиды (N-TMC-N-метилацетамид и -формамид) [8].

С использованием БСА были приготовлены производные 22 аминокислот, которые дали отдельные пики при хроматогра­ фировании на колонках с SE-30 [77]. При этом аргинин раз­ лагался, а пики глицина и аланина были скрыты под пиком одного из продуктов реакции (моно-Ы-ТМС-ацетамида). После силилирования 18 аминокислот с помощью БСТФА в ацето­ нитриле при 125 °С соответствующий продукт элюировался прежде аланина и глицина, но положение его на прилагавшейся хроматограмме не было указано [116]. Для цистина, глицина и глутаминовой кислоты отмечали различия, зависящие от про­ должительности реакции, при этом если последние два соеди­ нения силилировали при повышенных температурах (150°С), то они давали два хроматографических пика.

ТМС-аспарагин и глутамин были синтезированы в специаль­ ных условиях и подвергнуты хроматографическому анализу (аспарагин: 150 С, 0,5 ч; глутамин: 70 °С, 0,5 ч). Относительные молярные интенсивности пиков индивидуальных аминокислот, силилировавшихся в течение увеличивающихся периодов вре­ мени, обнаруживают высокую воспроизводимость.

2.3.3.ГХ-анализ ТМС-аминокислот *

Отдельные пики получены при хроматографировании ТМСаминокислот на ряде силиконовых жидких фаз (таких, как

Se-30 [8, 77, 116], силиконовое масло [106], Se-52, QF-1, DC-200 [114] и DC-550 [116]). На полиэфирах и полигликолях были полу­ чены неидентифицируемые пики [114], поэтому можно с уверен­ ностью утверждать, что ТМС-производные недостаточно устой­ чивы для хроматографического анализа на этих жидких фазах. Ценной особенностью реакции силилирования является то, что она проходит количественно в одну стадию за короткий проме­ жуток времени, однако без подходящих для анализа газохрома­ тографических колонок количественное превращение не всегда осуществимо. В работах, проиллюстрированных хроматограмма­ ми, разделение ограничивалось несколькими аминокислотами [8, 106, 116]. Можно только предполагать, что достигаемое раз-

* С м . т а к ж е р а зд . 2 .7 .6 .