Файл: Обычные Bacillus subtilis 0,70,8x23 Escherichia coli 0,31х16 Staphylococcus aureus 0,51,0 Thiobacillus thioparus 0,5х13 Rickettsia prowazeki 0,30,6x0,82 Мелкие.docx
ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 30.04.2024
Просмотров: 228
Скачиваний: 9
ВНИМАНИЕ! Если данный файл нарушает Ваши авторские права, то обязательно сообщите нам.
Преимущество РСК состоит в том, что природа антигена, участвующего в ней, не имеет значения, так как комплемент связывается с Fc - фрагментом любого антитела, относящегося к IgG и IgM, независимо от его антительной специфичности. РСК очень чувствительна: она позволяет обнаружить количество антител в 10 раз меньшее, чем в реакции преципитации. В основе РСК лежат два свойства комплемента:
1) способность связываться с комплексом антиген + антитело
2) вызывать лизис эритроцитов, использованных для получения гемолитической сыворотки.
РСК выполняется в две фазы при участии двух систем: бактериальной и гемолитической. В первой фазе (специфической) участвуют антиген+антитело+комплемент. Образовавшийся комплекс не визуализируется. Вторая фаза - выявление комплекса, образовавшегося при помощи индикаторной гемолитической системы (эритроциты барана+гемолитическая сыворотка). Гемолиз происходит в случае присоединения к гемолитической системе комплемента. Если же комплемент ранее адсорбировался на комплексе антиген+антитело в первой системе, то гемолиз эритроцитов не происходит, эритроциты выпадают в осадок.
При наличии в исследуемой сыворотке гомологичных антигену антител, образовавшийся комплекс (Аг+Ат) связывает на себе комплемент. При добавлении гемолитической системы гемолиза эритроцитов не происходит, так как комплемент связывается с комплексом Аг+Ат и эритроциты выпадают в осадок.
При отсутствии в исследуемой сыворотке специфических антител к антигену, введенному в первую систему, специфический комплекс антиген+антитело не образуется и комплемент остается в свободном состоянии. Поэтому при добавлении гемолитической системы к ней присоединяется комплемент. Результатом реакции в данном случае будет гемолиз эритроцитов - в пробирках появляется так называемая «лаковая» кровь.
Все компоненты, участвующие в реакции, должны быть предварительно оттитрованы и взяты в равных объемах.
РСК ставят в 5-и пробирках (1,2,3,4,5).
Исследуемую сыворотку (I) предварительно прогревают при 56°С в течение 30 минут для инактивации содержащегося в ней комплемента и пипеткой вносят по 0,5 мл в первую и пятую пробирки.
Второй пипеткой вносят 0,5 мл заведомо позитивной сыворотки (II) во вторую пробирку (контроль).
Третьей пипеткой вносят 0,5 мл заведомо негативной сыворотки (III) в 3-ю пробирку (контроль).
Четвертой пипеткой вносят по 0,5 мл физиологического раствора (IV) в четвёртую и пятую пробирки (контроль).
Этой же пипеткой вносят по 0,5 мл специфического антигена в рабочей дозе (V) в первую, вторую, третью, четвёртую пробирки. Пятой пипеткой вносят по 0,5 мл комплемента в рабочей дозе (VI) во все пробирки.
Отдельно готовят гемолитическую систему (VII) - смесь равных объемов 3% суспензии эритроцитов барана и гемолитической кроличьей сыворотки. Ингредиенты необходимо смешивать как можно быстрее. Причем гемолитическую сыворотку следует добавлять к суспензии эритроцитов, а не наоборот. Гемолитическую систему выдерживают 30 минут в термостате при 37°С и шестой пипеткой вносят по 1,0 мл в пробирки 1,2,3,4,5.
После добавления гемолитической системы пробирки помещают в термостат при 37°С до полного гемолиза в контрольных пробирках.
Результат реакции оценивают по четырёхплюсовой системе:
+ + + + - Отсутствие гемолиза
+ + + - Гемолиз 25%
+ + - Гемолиз 50%
+ - Гемолиз 75%.
- – полный гемолиз «лаковая кровь»
Для определения титра специфических антител исследуемую сыворотку (I) последовательно двукратно разводят физиологическим раствором.
Титром антител в исследуемой сыворотке считают наибольшее ее разведение, давшее задержку гемолиза.
Качественная реакция кольцепреципитации применяется часто. Для ее постановки в тонкие преципитационные пробирки наливают сначала неразведенную преципитирующую сыворотку и сверху наслаивают раствор антигена. В случае гомологичности антител и антигена на границе между этими растворами через 3-10 минут появляется кольцо преципитата.
Одним из наиболее эффективных методов анализа растворимых антигенов является реакция преципитации в геле. Она позволяет выявить число индивидуальных антигенов в исследуемой жидкости и провести анализ их антигенного родства. Разработан метод встречной иммунодиффузии, позволяющий проводить прямое сравнение различных антигенов и сывороток.
Этот метод часто применяют для определения токсигенности дифтерийных бактерий. Используют 1%-ный агар, приготовленный на физиологическом растворе, который разливают в чашки Петри слоем 0,5 см толщиной. После застывания в пластинке агара вырезают луночки: одну - в центре чашки, 4-5 - по окружности. В центральную луночку наливают преципитирующую сыворотку, а в периферический - раствор гомологичного и сравниваемых с ним антигенов. Учет результатов проводят через 24,48, и 72 часа инкубации при комнатной температуре. Антитела и антигены диффундируют навстречу друг другу, и в участках, где создаются их эквивалентные концентрации, образуются дугообразные полосы преципитации.
Постановка реакции термопреципитации Асколи для выявления антигена возбудителя сибирской язвы
Материал для исследования (I) измельчают, заливают десятикратным объемом физиологического раствора и кипятят в течение 15 минут (II). Полученный термоэкстракт фильтруют до полной прозрачности жидкости (III). Полученный фильтрат (IV) осторожно наслаивают пастеровской пипеткой (V) на внесенную предварительно в пробирку маленького диаметра сибиреязвенную преципитирующую сыворотку (VI). Если в исследуемом материале находится антиген возбудителя сибирской язвы, то на границе контакта термоэкстракта и сибиреязвенной преципитирующей сыворотки через 2 минуты при комнатной температуре образуется тонкое мутно-белое кольцо преципитации (VII).
Во избежание ложноположительного результата реакции ставят контроли:
1. преципитирующая сибиреязвенная сыворотка + стандартный специфический преципитиноген
2. преципитирующая сибиреязвенная сыворотка + физиологический раствор
3. нормальная лошадиная сыворотка + исследуемый термоэкстракт.
Первый контроль должен быть положительным, остальные - отрицательными.
Аллергические заболевания (аллергозы) – это группа патологий, обусловленных повышенной реакцией человеческого организма на воздействие некоторых факторов, воспринимающихся им как потенциально опасные.
Широко распространены во всем мире следующие аллергические заболевания: бронхиальная астма, поллинозы, атопия, крапивница, аллергический насморк, дерматиты, лекарственная и пищевая аллергии и др. Из перечисленных наиболее распространены - бронхиальная астма, поллинозы, аллергический насморк, крапивница. Значительная доля аллергических заболеваний приходится на клинические проявления лекарственной аллергии (ЛА), являющейся одной из сложных проблем не только для клиницистов, но и аллергологов - иммунологов всей страны.
На сегодняшний день по данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) каждый шестой житель Земли предрасположен или страдает какой-либо формой аллергии и количество больных стремительно растет. В структуре заболеваемости аллергия занимает по распространенности третье, а в некоторых странах и первое место.
Термин "аллергия" был введен австрийским педиатром К. Пирке в 1906г. для обозначения необычной, измененной реакции некоторых детей на введение им с лечебной целью противодифтерийной сыворотки. Аллергия в свою очередь, приводит к развитию аллергических заболеваний.
Аллергические заболевания известны с древних времен. Древнегреческий врач Гиппократ (5-4 века до нашей эры) описал случаи непереносимости своими пациентами некоторых пищевых продуктов, приводящие к желудочным расстройствам и крапивнице. Древнеримский врач Гален (2 век нашей эры) сообщил о насморке, возникающем от запаха розы. В 19 веке была описана сенная лихорадка и доказано, что ее причиной является вдыхание пыльцы растений (Поллиноз), было высказано также предположение, что бронхиальная астма может вызываться вдыханием пыли.
1. Определение аллергии.
Аллергия (от греч. аllos — другой, иной) - повышение чувствительности иммунной системы организма к аллергену (антигену) при повторном с ним контакте, в результате неадекватной реакции иммунной системы, что клинически проявляется повреждением тканей организма.
Наличие повреждений тканей организма является отличительной чертой «аллергии» от «иммунного ответа».
Раздел медицины, изучающий аллергические реакции и заболевания, причины их возникновения, механизмы развития и проявления, методы их диагностики, профилактики и лечения называется аллергологией (от греч. ἄλλος–другой, иной, чужой, ἔργον–воздействие и Λόγος–знание, слово, наука)
2. Факторы, способствующие развитию аллергии.
1.Наследственность. Если один из родителей страдает аллергией, его ребенок сталкивается с ней в 40% случаев, если оба родителя– в 75%. Повышенная чувствительность у потомства может возникнуть как к тем же аллергенам, что и у родителей, так и к иным. Поэтому принципиально следует понимать, что наследуется не само конкретное аллергическое заболевание, а лишь предрасположенность к аллергии.
2.Экологическая обстановка. Одним из основных факторов распространения аллергических заболеваний является бурное развитие химической промышленности и связанное с этим появление большого количества различных синтетических материалов, красителей, стиральных порошков и других разнообразных производственных и бытовых веществ, многие из которых могут быть аллергенами. Немаловажное значение в росте аллергических заболеваний имеет степень загрязнения окружающей среды обитания (воздуха и почвы) - экологическая обстановка в регионе проживания. Следовательно, в городах больше аллергиков, чем в сельской местности.
3.Качество питания: число аллергиков сильно выросло на фоне активного применения в пищевой промышленности химических добавок, выступающих в роли аллергенов.
4. Лекарственные препараты. Причинами обусловливающими повсеместное возникновение лекарственной аллергии (ЛА) являются: рост потребления лекарственных препаратов населением; широкое распространение самолечения вследствие доступности лекарств (возможности приобретения их без рецептов); недостаточность или запаздывание медицинской информации о побочных действиях лекарственных средств; применение для лечения и откорма скота антибиотиков, витаминов и других препаратов, создающих возможность сенсибилизации населения за счет примесей, содержащихся в пищевых продуктах (мясо, молоко), полученных от этих животных.