Файл: Обычные Bacillus subtilis 0,70,8x23 Escherichia coli 0,31х16 Staphylococcus aureus 0,51,0 Thiobacillus thioparus 0,5х13 Rickettsia prowazeki 0,30,6x0,82 Мелкие.docx
ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 30.04.2024
Просмотров: 229
Скачиваний: 9
ВНИМАНИЕ! Если данный файл нарушает Ваши авторские права, то обязательно сообщите нам.
Микробиологическую диагностику дизентерии проводят бактериологическим и серологическим методами.
Бактериологический метод. Испражнения засевают в чашки со средами Плоскирева, Эндо и в селенитовую среду, которая задерживает рост сопутствующей флоры, в частности E. coli. Посевы помещают в термостат при температуре 37°С. Через 18-24 часа изучают чашки с посевами. На средах Плоскирева и Эндо шигеллы образуют колонии S формы - круглые, выпуклые, с ровным краем, бесцветные, мелкие или средних размеров (1-3 мм). S. Sonnei могут давать колонии R-формы - плоские с зазубренными краем.
Подозрительные колонии (не менее трех) пересевают в пробирки со средами Ресселя или Олькеницкого и помещают их в термостат.
На следующий день учитывают характер роста на средах Ресселя или Олькеницкого, анализируют культуры, не ферментирующие лактозу и мочевину, но ферментирующие глюкозу с образованием кислоты, готовят мазок, окрашивают по Граму, микроскопируют. Если культура микробов чистая, продолжают изучать ее биохимические свойства. Культуру пересевают в пестрый ряд, состоящий из полужидких сред Гисса с глюкозой, лактозой, маннитом, мальтозой, сахарозой, в 1% пептонную воду с индикаторными бумажками на сероводород и индол. Для изучения подвижности микробов их засевают в пробирку с 0,2% питательным агаром. Выделенную культуру микробов испытывают на чувствительность к поливалентному дизентерийному бактериофагу.
Антигенные свойства исследуемых штаммов микробов изучают в реакции агглютинации на стекле. Реакцию сначала выполняют со смесью сывороток, которые включают антитела к шигеллам, преобладающим в данной местности, а затем с монорецепторными видовыми и типовыми сыворотками.
Через 18-24 часа анализируют результаты посевов предыдущего дня. Шигеллы, как правило, ферментируют глюкозу до кислоты (исключая S. flexneri серовара 6). Ферментация лактозы наблюдается на 2-3 сутки только у штаммов S. sonnei. Возбудители дизентерии не ферментируют сахарозу. В 1% пептонной воде не образуют сероводород, а образование индола разное у разных видов шигелл и серовариантов в пределах одного вида. Шигеллы неподвижны, лизируются поливалентным дизентерийным бактериофагом.
Для определения вида шигелл может быть использована прямая РИФ.
Серологический метод. Специфичные к шигеллам антитела обнаруживают в сыворотке крови в реакции агглютинации типа Видаля с дизентерийными диагностикумами, а также в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) с эритроцитарным дизентерийным диагностикумом. Серологический метод в основном используют для ретроспективной диагностики. Положительный результат не освобождает от проведения бактериологического исследования по полной схеме.
Возбудитель Vibrio cholerae входит в семейство Vibrionaceae, род Vibrio. Наибольшее значение в патологии человека имеют 2 биовара: V. cholerae и V. еltor.
Vibrio cholerae
Материалом для исследования от больных является кал и рвотные массы, а от вибрионосителей - кал. У лиц, погибших от холеры, исследуют тонкий кишечник и желчный пузырь (секционный материал). Из объектов окружающей среды изучается вода открытых водоемов и сточные воды.
В микробиологической диагностике холеры используют экспресс-метод, бактериологический и серологический методы.
Экспресс-метод диагностики. Позволяет выявить холерный вибрион непосредственно в исследуемом материале. Для этого используют РИФ.
Для быстрого обнаружения холерного вибриона используют также РОПГА с антительным эритроцитарным диагностикумом и цепную полимеразную реакцию (ПЦР).
Бактериологический метод. Является основным методом диагностики холеры. Выделение чистой культуры вибриона и его идентификацию проводят круглосуточно в специализированной лаборатории. Окончательный ответ должен быть предоставлен через 36 часов от начала исследования.
При проведении бактериологического метода диагностики необходимо соблюдать следующие требования.
1. Посев материала лучше выполнять у постели больного, поскольку холерный вибрион плохо сохраняется в испражнениях больных и носителей.
2. Посуда, в которую собирают исследуемый материал, не должна подвергаться обеззараживанию химическими веществами, поскольку вибрион к ним очень чувствителен.
3. Необходимо исключить возможность заражения окружающих и загрязнения объектов окружающей среды.
Посев кала или иного материала выполняют у постели больного или непосредственно на месте отбора материала на 1% щелочную пептонную воду (ПВ) и доставляют в специализированную лабораторию с соблюдением всех правил безопасности в сопровождении медицинского персонала. После 6 часовой инкубации посева на 1% пептонной воде образуется хрупкая пленка с голубоватым оттенком, которая во время встряхивания пробирки легко разрушается и оседает на дно.
Из пленки готовят мазок, окрашивают по Граму, микроскопируют. Кроме того, содержимое пленки изучают под микроскопом в препарате «висячая» или «раздавленная» капля и ставят с ним реакцию агглютинации на стекле с О-холерной сывороткой. Возбудители холеры грамотрицательные, имеют палочковидную форму, слегка изогнутые, подвижные.
Независимо от полученного результата, исследования продолжают по следующей схеме: содержимое пленки пересевают на вторую 1% щелочную ПВ и щелочной МПА или среду TCBS, которая является лучшей селективной средой для холерных вибрионов, поскольку сопутствующая флора на ней не растет. На фоне голубовато-серого цвета этой среды образуются колонии холерных вибрионов с желтым оттенком. Вторую ПВ инкубируют 6 часов при t 37°С и проводят исследования по той же схеме.
В случае выявления в пленке грамотрицательных подвижных палочек, которые агглютинируются О-холерной сывороткой, делают предварительный вывод, что обнаружен холерный вибрион и продолжают исследования дальше. Со второй ПВ ещё раз делают пересев на щелочной МПА.
Подозрительными считают мелкие, гладкие, стекловидно-прозрачные колонии с едва заметным голубоватым оттенком, которые выросли за 12 часов на щелочном МПА.
Чистую культуру выделяют на лактозо-сахарозной среде и культивируют 12 часов при t 37°С. Отбирают колонии и ставят пробу на оксидазу. При культивировании на элективных средах проба на оксидазу не делается.
Идентификация чистой культуры проводится по морфологическим, культуральным, биохимическим свойствам, подвижности и окончательному типированию с помощью диагностических агглютинирующих сывороток О, OR, Инаба, Огава и бактериофагов.
Окончательный ответ об обнаружении того или иного биовара холерного вибриона возможен при:
1. Выявлении подвижных грамотрицательных немного изогнутых палочек, которые выросли в пленке через 6 часов инкубации на второй ПВ;
2. Выявлении мелких, стекловидных, прозрачных колоний, выросших за 12 часов на щелочном МПА и давших положительную реакцию на оксидазу;
3. Изменении цвета лактозо-сахарозной среды в нижней части «столбика» без наличия пузырьков газа;
4. Ферментации углеводов: сахарозы (+), арабинозы (-), маннозы (+).
5. Положительном феномене агглютинации с О-и OR- холерными сыворотками Инаба и Огава.
Основные дифференциально-диагностические критерии V.choleraе и V. eltor
Серологический метод. Носит вспомогательный характер. Обнаруживают специфические антитела в сыворотке крови больного в РА, РПГА, ИФА, РИФ (непрямая). Токсиннейтрализующие антитела появляются на 5-6 день болезни и достигают максимума на 14-21 сутки. Диагностическим титром в РПГА считается разведение 1: 160.
Возбудители бруцеллеза, сибирской язвы. Микробиологическая диагностика
БРУЦЕЛЛЁЗ
Бруцеллёз - инфекционное зоонозное заболевание, сопровождающееся лихорадкой, поражением многих органов и систем, особенно часто опорно-двигательного аппарата, и имеющее склонность к затяжному и хроническому течению.
История открытия бруцеллеза и борьбы с ним – это история самоотверженного труда и риска для здоровья ученых, врачей, ветеринаров.
Систематическое и всестороннее изучение бруцеллеза в бывшем СССР было начато в 1922г. П.Ф.Здродовским.
Свое название заболевание получило в честь английского бактериолога Д.Брюса, выделившего бактерии из организма погибшего человека (B.melitensis) в 1887г.
Позднее было установлено, что патогенными для человека свойствами обладают также В.abortus, В. suis, В. canis и их биовары.
Бруцеллы включены в семейство Brucellaceae , род Brucella.
Морфологические свойства. Имеют палочковидную форму. Палочки мелкие с закругленными концами (кокковидные формы). Неподвижны. Отличаются выраженным полиморфизмом.
Культуральные свойства. Бруцеллы аэробы (за исключением B.abortus ). Хорошо растут на печеночном агаре, сывороточно-декстрозном агаре, в печеночном бульоне.
На агаре образуются S-формы колоний – мелкие, круглой формы с перламутровым оттенком. Похожи на капельки росы или ртути.
В бульоне – равномерное помутнение с последующим выпадением осадка.
В первых генерациях бруцеллы размножаются медленно.
Биохимические свойства. Обычно не ферментируют углеводы. Некоторые штаммы разлагают глюкозу, мальтозу. Не разжижают желатин. Одни виды продуцируют H2S (B.suis +++, B.abortus ++), другие(B.melitensis) – нет.
Токсинообразование. Бруцеллы образуют эндотоксин, который освобождается при разрушении бактериальных клеток и обладает специфическим свойством вызывать аллергические реакции. Он может быть использован при постановке аллергической кожной пробы.
Антигенная структура. У бруцелл установлено наличие A, M, G, R антигенов.
Резистентность.