Файл: Методики постановки опытов и исследований по молочному хозяйству [сборник]..pdf

ственно в соотношении I : 2 и вновь проводят отсчеты после га­ шения.

Количество рибофлавина (Кi) рассчитывают по формуле

М—В) ■ е • в • ж

Кх = , r " r n------- ■

1 (С—Ci) • а -л

где А — показание прибора для исследуемого раствора (38); В — показание прибора для исследуемого раствора после га­ шения (10); С — показание прибора для стандартного раство­ ра (30); Ci — показание прибора для стандартного рас­ твора после гашения (6); е — содержание рибофлавина в 1 мл

ж— конечный объем раствора, взятого для определения флу­

100 мл отвешивают 80 г продукта. Проводят кислотный и фер­ ментативный гидролизы с последующим определением вита­ минов В[ и Вг по методике, описанной для молока. Обращает­ ся внимание на необходимость строго придерживаться pH сре­ ды, указанной в методике.

Сметана. Среднюю пробу сметаны 30 г разбавляют водой (45—50°), переносят в колбу на 100 мл. Дальнейшая работа проводится согласно методике для молока.

Масло. Среднюю пробу масла 30 г помещают в фарфоро­ вую чашечку, заливают небольшим количеством воды (45— 50°) и переносят в мерную колбу на 100 мл. Дальнейшая рабо­

Дальнейшее определение осуществляется по методике, описан­ ной для молока.

П ри боры и р е а к т и в ы : флуорометр ЭФ—ЗМ, зстряхиватель, термостат, делительные воронки на 15—20 мл, мер­ ные колбы на 100 мл с обратным холодильником, мерные ци­ линдры на 50 и 100 мл, пробирки из нефлуоресцирующего стек-

130

ла на 2.5 мл, пипетки иа 1,5, 10 и 25 мл серная кислота (плот­ ность 1,84), уксуснокислый натрий 2,5 М, хлористый калий 25% в 0,1 n НС1, красная кровяная соль 1%с, едкий натрий 15%, раствор тиаминхлорида, раствор рибофлавина, фермен­ тативный препарат «Оризин-ПК» или «Авамарин-ППК», толу­ ол, изобутиловый спирт, уксусная кислота 3%, адсорбент декальсо или СДВ-3, этиловый спирт 96%, универсальная инди­ каторная бумага (pH 1—10).

Приготовление некоторых реактивов. 1. Основной раствор тиаминхлорида: а) раствор № 1 — 0,1 мл НС1 (плотность 1,19) доводят водой до 100 мл; б) раствор № 2 — 25 мл этилового спирта доводят до 100 мл раствором № 1; в) 10 мг тиаминхло­ рида доводят до 100 мл раствором № 2. Раствор устойчив в течение 1,5 мес. при хранении в темной склянке (t 2—4°).

2. Рабочий раствор тиаминхлорида (готовится перед опре­ делением), 1 мл основного раствора доводят водой до 100 мл. 1 мл рабочего раствора содержит 1 мкг тиамина.

3.Основной раствор рибофлавина: 2 мг рибофлавина рас­ творяют в 50 мл воды. Раствор стоек в течение 1 мес. при хра­ нении в темной склянке (t 2—4°).

4.Рабочий раствор рибофлавина (готовят перед определе­ нием): 1 мл основного раствора доводят до 100 мл водой. 1 мл рабочего раствора содержит 0,4 мкг рибофлавина.

1 Ферментный препарат «Оризин-ПК», или «Авамарин» изготовляют на ферментных заводах. Хранить их необходимо в сухом месте.

131

5. В случае флуоресценции йзобутилового спирта его обра­ батывают активированным углем (15 г на 1 л), после чего пе­ регоняют (температура кипения 108°).

6. Окислительная смесь. Основной раствор красной кровя­ ной соли: 1 г красной кровяной соли растворяют и доводят до

15 мин-, затем 15 мин. кипятят в 25%-ном растворе КС1. Пос­ ле этого промывают кипящей водой до отрицательной реакции на хлор. Адсорбент СДВ-3 активируют в 6%-ной серной кис­ лоте (на 10 мг адсорбента 100 мл кислоты) в течение суток при помешивании. Затем промывают на слабом вакууме во­ дой до нейтральной реакции на хлор.

Фолиевая кислота (витамин Вс)

Метод основан на адсорбции фолиевой кислоты активи­ рованным углем, окислении десорбированного витамина мар­ ганцовокислым калием с последующим измерением флуорес­ ценции в области свечения 470 ммк. При окислении от фолие­ вой кислоты отщепляется парааминобензойная кислота, кото­ рая вместе с глютаминовой кислотой образует птеридил—6 карбоновую кислоту, обладающую интенсивной голубой флуо­ ресценцией. Определение фолиевой кислоты проводится на флуорометре ЭФ-ЗМ.

Молоко. В мерную колбу на 100 мл вносят 35 мл молока, 45 мл воды, доводят pH до 3,5—4, 10—12 каплями 15% H2S 04.

В этой же колбе с обратным холодильником проводят кислот­ ный гидролиз на кипящей бане в течение 45 минут.

Гидролизат охлаждают до 32—35°, доводят pH среды до 4,5—5, затем вносят 100 мг ферментативного препарата

«Оризин-ПК» или «Авамарин-ППК», растворенного в 10 мл воды. Прибавляют 3 капли толуола и оставляют на 16—18 ча­ сов в термостате при температуре 38—40° для ферментативно­ го гидролиза.

По истечении указанного времени содержимое колбы ох­ лаждают до 20°, доводят объем до 100 мл водой и фильтруют.

50 мл фильтрата подкисляют 15% H2S 04 до pH 3,0, вносят 100 мг активированного угля и кипятят 5 минут. Уголь от­ фильтровывают под вакуумом на воронке Бюхнера со слоем

132

картона Зейца. Адсорбированную на угле фолиевую кислоту вымывают в чистую колбу кипящей элюирующей смесью 3 порциями по 20 мл и доводят общий объем до 70 мл.

Элюат переносят в колбу для отгонки, соединенную с пря­ моточным холодильником, отгоняют до объема 10—15 мл. Упа­ ренный фильтрат охлаждают до 20°, подкисляют 10% НгЭС^до pH 3. Марганцовокислым калием проводят окисление фолие­ вой кислоты в птеридил-6-карбоновую кислоту. Для этого в фильтрат по каплям вносят 4% KMn04 при помешивании до появления устойчивой розовой окраски, не исчезающей в тече­ ние 10 минут.

Избыток марганцовокислого калия удаляется добавлением по каплям 3% перекиси водорода (Н20 2) до обесцвечивания, подщелачивают 15% NaOH до pH 4—4,5, фильтруют и доводят объем до 25 мл водой. Затем 10 мл фильтрата переносят в про­ бирку из нефлуоресцирующего стекла и делают замер на при­ боре (светофильтр 470 ммк). Параллельно ставят холостую

обработку, как с молоком.

Для определения флуоресценции стандартного раствора в колбу на 50 мл вносят 10 мл рабочего раствора фолиевой кис­ лоты, доводят pH до Зн. 15% H2S 04, обрабатывают аналогично молоку. Конечный объем фильтрата доводят до 20 мл водой.

Содержание фолиевой кислоты (К) в мкг/кг рассчитывают по формуле

(В—С) •е - у- л

А - Д - Ж

где А — показание прибора для стандартного раствора (20); В — показание прибора для ис­

следуемого раствора (14); С — показание прибора для холо­

или 428,6 мкг в 1 кг молока.

Содержание фолиевой кислоты в молоке колеблется от 140 до 600 мкг/кг.

133