Файл: Методики постановки опытов и исследований по молочному хозяйству [сборник]..pdf

Простокваша, кефир, ацидофилин. Среднюю пробу продук­ та в количестве 35 г вносят в мерную колбу на 100 мл. Кислот­ ный и ферментативный гидролизы с последующим определени­ ем фолиевой кислоты проводят по методике, описанной для молока. Обращается внимание на необходимость строго при­ держиваться pH среды, указанной в методике.

Сметана. Пробу в количестве 10 г переносят в колбу на 100 мл, добавляют 70 мл воды. Дальнейший анализ проводят согласно методике, описанной для молока.

Масло. Пробу масла в количестве 10 г переносят в колбу на 100 мл, добавляют 70 мл воды. Дальнейший анализ по мето­ дике, описанной для молока.

Сыр. Пробу 5 г сыра, тщательно измельченного, переносят в колбу на 100 мл. Дальнейшее определение осуществляется по методике, описанной для молока.

П р и б о р ы и р е а к т и в ы : флуорометр ЭФ-ЗМ; термо­ стат; водоструйный насос; колбы мерные на 100 мл с обратным холодильником; колбы Бунзена; пробирки из нефлуоресциру­ ющего стекла на 25 мл; пипетки мерные на 0,5, 1,10 и 50 мл; прибор для перегонки; фолиевая кислота; серная кислота 15%; едкий натрий 15%; марганцовокислый калий 4%; перекись во­ дорода 3%; 10% водный раствор перегнанного анилина; элю­ ирующая смесь; активированный уголь; ферментный препарат «Оризин-ПК» или «Авамарин-ППК»; толуол; универсальный индикатор (pH 1—10).

Приготовление некоторых реактивов:

1. Элюирующая смесь: 1000 мл 96-%-ного этилового спирта, 420 мл воды и 200 мл 25% ЫН4ОН.

2.Активированный уголь: обычный активированный уголь заливают 10-кратным количеством 10%-ного водного раствора анилина, кипятят в течение часа, затем отфильтро­ вывают. Уголь промывают 5—б раз водой, высушивают при 30—40° и сохраняют в склянке с притертой пробкой.

3.Стандартный раствор фолиевой кислоты: готовят из пе-

рекристаллизованной фолиевой кислоты. Для этого 20 мг фо­ лиевой кислоты растворяют в 100 мл воды, подщелоченной 2 каплями 15% NaOH. Раствор хранят в-темной склянке на холоду под слоем толуола.

4.Рабочий раствор готовят перед анализом. 1 мл стандарт­ ного раствора доводят до 100 мл водой. В 1 мл этого раство­ ра содержится 1 мкг фолиевой кислоты.

5.Ферментные препараты — «Оризин-ПК» или «Авама- рин-ППК» — выпускаются ферментными заводами.

134

Холин

Метод основан на извлечении холина и содержащих холин фосфатов метиловым спиртом. Гидролиз фосфатов проводится

внасыщенном растворе гидроокиси бария. Холин определяют

врастворе рейникат-холина, образующегося при взаимодей­ ствии холина с солью Рейнике на фотоэлектроколориметре марки ФЭК-М.

Молоко. 10 мл молока по каплям наносят на рулончик, ска­ танный из фильтровальной бумаги и установленный в чашку Петри, высушивают в термостате при 80—90° 4—5 час., охлаж­

135

Стандартная калибровочная кривая готовится следующим образом: из основного раствора, содержащего 1 0 0 мг холинхлорида в 1 0 0 мл воды, готовят водный, слегка щелочной рас­ твор (pH 8 ), в каждых 10 мл которого соответственно содер­ жится 1, 2, 3, 4, 5, б, 7, 8 , 9, 10 мг холинхлорида. Для приготовления раствора берут 10 мерных колб на 10 мл и вно­ сят в них стандартный раствор холинхлорида, как указано ниже, а затем водой доводят до метки:

Полученные различных концентраций растворы переносят на рулончики фильтровальной бумаги, которые ставят в чашки Петри, высушивают в термостате при 80—90°. В последующем проводят те же манипуляции, что и с опытными образцами. В заключение составляют стандартную калибровочную кривую.

Пр и ме р . Экстинкция молока — 0,09, по калибровочной кривой она соответствует 3,6. Следовательно, в 10 мл молока содержится 3,6 мг холина, а в 1 л — соответственно 360 мг.

Содержание холина в молоке колеблется от 200 до 800 мг/кг.

Простокваша, кефир, ацидофилин. 10 мл продукта пипеткой наносят на рулончик фильтровальной бумаги, высушивают в термостате при 80—90°, далее определение ведут так же, как в молоке.

Сыр, творог. В пакетик из фильтровальной бумаги взвеши­ вают 5 мг измельченного продукта и высушивают в термостате при 80—90°. В дальнейшем определение ведется так же, как и в молоке.

П р и б о р ы и р е а к т и в ы : рулончики из фильтроваль­ ной бумаги— ширина 6 —7 см, длина около метра, фотоэлек­ троколориметр ФЭК-М, водоструйный насос, аппарат Гейда, стеклянный фильтр № 3 или 4 со шлифом, цилиндр на 50 мл со шлифом, насадка для соединения стеклянного фильтра с цилиндром, чашки Петри, пробирки мерные на 10—15 мл с притертыми пробками, песочная баня, метиловый спирт абсо-

136

лютный, 2%-ный раствор соли Рейнике на метаноле, гидро­ окись бария насыщенный раствор, уксусная кислота концен­ трированная, раствор тимолфталеина 1 %-ный, ацетон.

Никотиновая кислота (витамин РР)

В основе метода цветная реакция, разработанная Кёнигом, основанная на способности а- или (3-незамещекных дериватов пиридина давать окраску с бромцианом и ароматическим ами­ ном. В качестве ароматического амина используется анилин.

Определение никотиновой кислоты проводится на штуфен-

носят пипеткой в мерную колбу на 50 мл с обратным холодиль­ ником. К молоку добавляют 10 мл НС1 (удельный вес 1,19) и гидролизуют 45 мин. в кипящей бане. Охлажденный раствор доводят до метки водой и фильтруют. 15 мл фильтрата пере­ носят в пробирку из стекла пирекс. с 1,8 н. раствором едкого натрия (1,5—1,8 мл) и доводят pH до 0,5—1. Реакцию среды устанавливают при помощи индикатора метилвиолета (1 капля индикатора с 0,2 н. I-bS04 дает синее окрашивание). Такое же окрашивание должно получиться при смешении метилвиолета с каплей исследуемого раствора. В случае избытка щелочи до­ бавляют концентрированную соляную кислоту.

Никотиновую кислоту адсорбируют на адсорбент аска­ нит, который вносят в раствор в количестве 2 г. Смесь встря­ хивают в течение 1 мин. и центрифугируют 2 мин., жидкость декантируют. Асканит промывают 10 мл 0,2 н. H2SO4 путем встряхивания, центрифугируют, использованную кислоту сли­ вают.

Никотиновую кислоту, адсорбированную на асканите, из­ влекают смесью 10 мл 0,5 н. NaOH и 5 мл воды, встряхивают, а затем центрифугируют. Для осаждения белков и красящих веществ к центрифугату добавляют 0,5 г кристаллического азотнокислого свинца, встряхивают и снова центрифугируют.

Практически бесцветную жидкость переливают в цробйрку. Для удаления избытка кислоты раствор слегка подщелачи­ вают фосфатом калия ( К 3 Р О 4 ) , который прибавляют по кап­ лям до появления слабо-розового окрашивания в присутствии капли фенолфталеина. Затем в растворе устанавливают ней­ тральную среду при помощи 80%-ной ортофосфорной кислоты и трифосфата калия (проба на лакмусовую бумажку), центри-

137

фугируют и отстоявшуюся жидкость используют для опреде­ ления никотиновой кислоты. Для этого в пробирки (А, В, С) переносят по 3 мл прозрачного раствора. В пробирку А прибав­

10 мин.— 1 мл 4%-ного спиртового раствора анилина. В про­ бирку С добавляют 0,1 мл стандартного раствора никотиновой кислоты, 6 мл 4%-ного раствора бромистого циана и через 10 мин. — 2 мл 4%-ного спиртового раствора анилина.

Появляющаяся в пробирках В и С желтая окраска стано­ вится интенсивной через 3 мин. после начала реакции. Интен­ сивность сохраняется в течение последующих 5 мин.

С целью проверки чистоты реактивов проводят холостое определение. Для этого в пробирку А вносят 3 мл дистилли­ рованной воды, в пробирки В и С — 3 мл воды, 6 мл 4%-ного раствора бромистого циана и 1 мл 4%-ного спиртового рас­ твора анилина.

Содержание никотиновой кислоты (в мкг) в 1 г молока вычисляют по формуле

( Д - Л ) - з - г - Ж

(С—В) -л-Д- 10 ’

где А, В, С — отсчеты на штуфенфотометре для соответствую­ щих растворов в пробирках А, В, С; л — навеска молока в г (10 г); з — объем элюированной никотиновой кислоты (15 мг); г — объем центрифугата после разбавления водой (50 мл); Д — количество раствора, взятого для определения на штуфен фотометре (3 мл); Ж — количество фильтрата, взятого для адсорбции (15 мл); 10 — количество никотиновой кислоты в

1мл стандартного раствора.

Врезультате проведенных отсчетов были получены следую­ щие данные— В= 0,05, А= 0,01, С= 0,62, Содержание вита­

мина составило

сыворотки отмеривают 10 мл фильтрата. Витамин определяет­ ся так же, как и в молоке.

Масло. 30 г масла заливают водой (45—50°). Смесь пере-

1138