Файл: Методики постановки опытов и исследований по молочному хозяйству [сборник]..pdf

определенное по калибровочному графику; V — объем исследу­ емого раствора с учетом всех разведений, мл; g — навеска про­ дукта, г; 100 — коэффициент пересчета содержания кароти­ на, %.

Приме р . Для определения каротина взято 150 мл молока, что соответствует 154,5 г. Объем исследуемого раствора, т. е. использованного хлороформа для растворения неомыляемого остатка, 4,8 мл; экстинкция— 1,00; найденное по калибровоч­ ному графику количество каротина — 0,01175.

мг% каротина= 0,01175-4,8- 100 0,0362.

154

Следовательно, в 1 кг молока содержится 0,362 мг кароти­ на. Среднее содержание каротина в молоке составляет 0,352 мг/кг, колебания в течение года от 0,032 до 1,150 мг/кг.

Приборы те же, что для определения витамина А (см. стр. 122), и ФЭК-56. Реактивы те же, что и для определения витамина А, и азобензол ч. д. а.

Стандартный раствор азобензола готовят путем растворе­ ния 145 мг кристаллического химически чистого азобензола в 100 мл 96%-ного этилового спирта. 1 мл такого раствора по ок­ раске соответствует 0,0235 мг каротина.

Ретинол (витамин А). Метод определения витамина А ос­ нован на цветной реакции его с насыщенным раствором трех-

118

хлористой сурьмы в хлороформе. Интенсивность окрашивания при реакции пропорциональна концентрации витамина А в ис­ следуемом объекте.

Содержание витамина А определяют стандартным методом (ГОСТ—7047-54) с некоторыми уточнениями, внесенными при отработке метода. Определение состоит из двух стадий: подго­ товки молока к колориметрированию и колориметрирования.

В колбу емкостью 300—500 мл вносят 100—150 мл молока, 10—15 мл водного 50%-ного раствора КОН и 10—15 мл этило­ вого спирта. Содержимое колбы хорошо перемешивают, за­ крывают пробкой и оставляют в темном месте при комнатной температуре на 5 суток, периодически взбалтывая содержимое. По истечении указанного срока неомыляемый остаток извле­ кают серным эфиром. Для этого содержимое колбы переносят в делительную воронку емкостью 500 мл, добавляют 75 мл серного эфира и, закрыв воронку пробкой, тщательно, но осто­ рожно перемешивают смесь, избегая образования эмульсии. При ее появлении расслоение жидкостей происходит очень медленно. В этом случае в делительную веоронку добавляют 2—3 мл спирта-ректификата. После расслоения жидкостей че­ рез кран сливают нижний водощелочной слой в колбу, а эфир­ ный слой — в другую делительную воронку емкостью 250 мл. Затем из колбы водощелочной слой переливают в первую де­ лительную воронку, добавляют 50 мл серного эфира, смесь тщательно перемешивают и после расслоения жидкостей водо­ щелочной слой сливают в_ колбу, а эфирный слой соединяют с первым. Эту операцию проводят три раза до тех пор, пока эфирная вытяжка станет бесцветной.

Собранные вместе эфирные вытяжки промывают 3—4 раза дистиллированной водой до исчезновения щелочной реакции, что определяют пробой на фенолфталеин. Затем эфирную вы­ тяжку сливают в сухую плоскодонную колбу для обезвожива­ ния сернокислым натрием в течение 30—60 мин. После этого вытяжку фильтруют, а эфир отгоняют на водяной бане в токе инертного газа через обычный холодильник. После отгонки эфира в колбе остается сухой неомыляемый остаток, который растворяют в 2—3 мл хлороформа.

Из приготовленного для колориметрирования хлороформен­ ного раствора микропипеткой отбирают 0,2 мл и вливают в пробирку диаметром 9 мм, длиной 7 см. Такие же пробирки ис­ пользуют для приготовления стандартной цветной шкалы. В пробирку прибавляют 1—2 капли уксусного ангидрида и

119

2 мл насыщенного раствора треххлористой сурьмы и сразу же колориметрируют.

Содержание витамина А в испытуемом растворе соответст­ вует числу синих единиц, обозначенному на пробирке шкалы. Если окраска раствора находится между окрасками двух смежных пробирок-эталонов, берут среднее их значение. Наи­ более точные результаты получаются при колориметрировании раствора, в котором содержание витамина А составляет от 4 до 6 синих единиц. Концентрированные растворы соответственно разбавляют и проводят определение повторно.

где х — содержание витамина А, мг%; С — число синих еди­ ниц, установленных по шкале; V — объем раствора неомыляе­ мого остатка в хлороформе, мл; а — навеска вещества, взятая для анализа, г; 4 — постоянный коэффициент.

Пр и ме р . Для определения витамина А было взято 100 мл молока, что соответствует 103 г. Неомыляемый остаток рас­ творен в 3,4 мл хлороформа. Интенсивность окрашивания раствора при сравнении со стандартной шкалой 4,5 синих еди­

ницы. Содержание витамина А равно ^ ' | ' 4 =0,0371 мг%.

Соответственно в 1 кг молока содержится 0,371 мг витами­ на А. Среднее содержание витамина А в 1 кг молока в течение года равно 0,35 мг с колебаниями по сезонам от 0,1 до 0,7 мг.

Часто для омыления проб вместо раствора КОН использу­ ют NaOH. В этом случае в колбе образуется сгусток, который мешает равномерному и быстрому омылению даже в течение 5 суток. Заканчивают доомыление на водяной бане при 80— 85° в течение 10—20 мин. Для этого в нее вставляют неболь­ шую воронку, выполняющую роль обратного холодильника.

По окончании омыления содержимое колбы охлаждают до 20—25° и вливают первую порцию эфира в количестве 75 мл. Эфир надо вносить постепенно, небольшими порциями при не­ прерывном помешивании. Второе и третье экстрагирования проводят так же, как и при омылении пробы с помощью КОН.

Ретинол (витамин А)

Масло. Навеску масла от 15 до 30 г в колбе заливают 30— 60 мл 20%-ного спиртового раствора КОН и ставят в темное место при комнатной температуре на 5—10 дней. Перед экстра­ гированием пробу масла разбавляют двойным количеством во­ ды. Если омыление масла не закончилось, пробу выдерживают

120

на водяной бане в течение 15—20 мин. при 85—90°. После ох­ лаждения неомыляемую фракцию экстрагируют серным эфи­ ром, используя при первой экстракции не менее 100 мл эфира, при второй и третьей — по 50 мл. Неомыляемый остаток рас­ творяют в 5—10 мл хлороформа. Далее поступают в соответст­ вии с методикой определения витамина в молоке.

Сухое молоко. Из средней пробы в стакан отвешивают 25 г сухого молока, небольшими порциями добавляют 80—100 мл воды, нагретой до температуры 35—40°, и смесь тщательно пе­ ремешивают шпателем до получения однородной массы. Затем массу переносят в мерную колбу на 200 мл. Стакан 2—3 раза ополаскивают водой, которую также сливают в колбу. Содер­ жимое колбы доводят водой до метки, хорошо перемешивают и отбирают пробу для анализа в количестве 100—150 мл.

В дальнейшем анализ проводят так же, как и при анализе молока.

Сгущенное молоко. Берут 80 г тщательно перемешанного молока с сахаром, растворяют его в 50—60 мл воды при тем­ пературе 35—40° и переносят в мерную колбу на 200 мл. Со­ держимое колбы доводят водой до метки. После тщательного перемешивания отбирают в колбу для анализа пробу восста­ новленного молока в количестве 100—150 мл. Туда же добав­ ляют 15—20 мл 50%-ного раствора КОН и 20—15 мл этилово­ го спирта. Содержимое колбы хорошо перемешивают, закры­ вают пробкой и оставляют при комнатной температуре в тем­ ном месте на 10—15 дней, периодически взбалтывая. Затем продолжают анализ в соответствии с методикой определения витамина в молоке.

Простокваша, ацидофилин, кефир. Среднюю пробу кисло­ молочных продуктов перед анализом тщательно перемешива­ ют и в количестве 100—150 мл помещают в колбу емкостью 300—500 мл. В нее добавляют 20—30 мл 50%-ного раствора КОН и 15—20 мл этилового спирта. Далее анализ продолжа­ ют, как описано для молока.

Сыр. Среднюю пробу сыра растирают на терке, хорошо пе­ ремешивают и берут навеску в количестве 25—40 г. Пробу за­ ливают 50—80 мл 35%-ного спиртового раствора КОН и остав­ ляют в темном месте при комнатной температуре на 5—10 дней. Анализ проводят так же, как описано для молока.

По нашим данным, содержание витамина А в молочных продуктах в течение года колебалось в следующих пределах

(табл. 21).

121

с углекислым газом или аппарат Кипа; пипетки градуирован­ ные разных размеров; цилиндры градуированные на 5, 10, 50, 100,500 мл; холодильник Либиха; пробирки.

Приготовление стандартной шкалы синих единиц. В 500 мл воды растворяют 75 г сернокислой меди и 3,5 г азотнокислого кобальта, из этого основного раствора приготовляют эталоны по таблице 3.

Реактивы. Натрий сернокислый кристаллический обезвоженнный; углекислый газ или азот; хлороформ; сурьма трех­ хлористая; эфир серный.

Углекислый газ или азот. Для очистки углекислого газа и азота от примесей их пропускают через поглотители щелочно­ го раствора пирогаллола и серной кислоты.

Хлороформ. Промывают 5—6 раз дистиллированной водой (в отношении 2:1), высушивают безводным сернокислым нат­ рием, перегоняют, хранят в темной склянке, в темном и про­ хладном месте.

Сурьма треххлористая. Треххлорнстую сурьму промывают хлороформом до тех пор, пока не будет стекать прозрачный и бесцветный раствор, а затем высушивают в эксикаторе над серной кислотой в течение 1—2 суток. Насыщенный раствор треххлористой сурьмы в очищенном хлороформе приготовляют при температуре 20°.

Эфир серный очищают следующим образом. В склянку с корковой пробкой помещают 500 мл эфира, 50 мл 4%-ного рас­ твора КМпС>4, 5 мл 40%-ного раствора NaOH или КОН, взбал­ тывают и оставляют на сутки в темноте. Смесь переносят в де­ лительную воронку, нижний слой сливают, а верхний — эфир промывают 5—6 раз дистиллированной водой (в отношении

122

2:1). Затем в течение суток высушивают сернокислым натри­ ем, перегоняют и сохраняют в темноте. Эфир проверяют на от­ сутствие перекисей по качественной реакции с йодистым ка­ лием.

Токоферол (витамин Е)

Витамин Е в молоке и молочных продуктах опре­ деляют по методике, разработанной Девятниным и За­ харовой. Принцип метода заключается во взаимодействии токоферолов с азотной кислотой. В результате реакции продукты окисления окрашиваются в красный цвет. Интенсив­ ность окраски зависит от количества токоферолов в исследуе­ мом объекте. В первом этапе работы проводят омыление, на­ вески и экстрагирование неомыляемой фракции, что выпол­ няется так же, как и при определении витамина А. Далее не­ омыляемый остаток растворяют в 5 мл абсолютного этилового спирта при нагревании на водяной бане с обратным холодиль­ ником. К прозрачному спиртовому раствору прибавляют 1 мл

123