Файл: Методики постановки опытов и исследований по молочному хозяйству [сборник]..pdf

крепкой азотной кислоты и кипятят на бане в течение 3 мин. Охлажденный спиртовой раствор переносят в мерную пробир­ ку на 10 мл, доводят до метки спиртом, фильтруют и определя­ ют витамин Е. Определение производят на ФЭК-56 со свето­ фильтром № 2, предварительно строят градуировочную кри­ вую. По показанию экстинкции на кривой находят количест­ во токоферолов в 1 мл спиртового раствора.

Расчет витамина Е производят по формуле

П р и б о р ы и р е а к т и в ы те же, что для витамина А и каротина. Кроме того, необходимы азотная кислота (удельный вес 1,4) и этиловый спирт.

Аскорбиновая кислота (витамин С)

Арбитражный метод основан на экстрагировании витами­ на уксусной кислотой, освобождении экстракта от посторон­ них, редуцирующих веществ уксуснокислым свинцом и после­ дующем титровании 2-6-дихлорфенол-индофенолом.

124

К средней пробе молока в объеме 25 мл добавляют 5 мл 16%-ной уксусной кислоты, перемешивают и через 5 мин. цен­ трифугируют или фильтруют: К 10 мл фильтрата добавляют 0,4 г сухого мела, встряхивают и по окончании нейтрализации приливают 5 мл 5%-ного раствора уксуснокислого свинца, цен­ трифугируют или фильтруют. К 5 мл центрифугата добавляют 2,5 мл концентрированной 80%-ной уксусной кислоты и тит­ руют 0,001 н. раствором 2-6-дихлорфенол-индофенолом. Индикатор добавляют по каплям до появления слабо-розо­ вого окрашивания, не исчезающего в течение 30 сек.

При каждой серии определений аскорбиновой кислоты вно­ сят поправку на титр индикатора, которую устанавливают по 0,01 н. раствору соли Мора. Титр соли Мора определяют по 0,01 н. раствору марганцовокислого калия, а титр последнего по 0,01 н. раствору щавелевой кислоты.

Определение титра марганцовокислого калия. К Ю мл 0,01 н. раствора щавелевой кислоты добавляют 1 мл концен­ трированной серной кислоты. Смесь нагревают до 80° и тит­ руют 0,01 н. раствором марганцевокислого калия до слабо­ розового окрашивания (В).

Титр соли Мора. К 10 мл соли Мора добавляют 3 капли концентрированной серной кислоты и титруют 0,01 н. рас­ твором марганцевокислого калия до появления устойчивой слабо-розовой окраски (А).

Титр 0,001 раствора 2—6 дихлорфенол-индофенола. К 10 мл раствора 2—-6 дихлорфенол-индофенола добавляют 5 мл насы­ щенного раствора щавелевокислого натрия' и титруют раство­ ром соли Мора до перехода синей окраски в соломенно-жел­ тую (С). Поправку индикатора вычисляют следующим обра­ зом. Если на 10 мл 0,01 н. раствора щавелевой кислоты пошло 9 мл (В), на 10 мл соли Мора (А) — 8,5 мл марганцовокислого

где а — количество 2—6 дихлорфенол-индофенола, пошедшее на титрование молока; К — поправка индикатора; 0,36—коэф­

125

фициент разведения; 11,4 — постоянный коэффициент (1 мг аскорбиновой кислоты соответствует 11,4 мл раствора дихлор- фенол-индофенола).

скую колбу, куда заранее внесен 1 мл 2%-ной соляной кисло­ ты, доводят объем водой до 15 мл, осторожно помешивая ти­ труют из микробюретки 0,001 раствором 2-6-дихлорфе'нол-ин- дофенола до слабо-розового окрашивания, не исчезающего в течение 30—60 сек. Поправку титра индикатора устанавлива­

ют изложенным выше способом по формуле , где

А — титр соли Мора; В — титр марганцовокислого калия; С— титр 2—6 дихлорфенол-индофенола.

Содержание аскорбиновой кислоты вычисляют по форму­ ле Д = а • К • 0,088 • 0,6 мг/г, где а — количество 2—6-дихлор- фенол-индофенола, пошедшего на титрование молока; К — по­ правка индикатора; 0,088 — количество аскорбиновой кислоты, восстанавливающей 1 мл 0,001 раствора 2—6 дихлорфенолиндофенола, мг; 0,6 — коэффициент разбавления.

Установка титра и приготовление реактивов аналогично предыдущему методу.

Простокваша, кефир, ацидофилин. В конической колбе на 100 мл взвешивают 25 г продукта, добавляют 5 мл 16%-ной уксусной кислоты, встряхивают и оставляют на 5 мин. Смесь фильтруют. К Ю мл фильтрата приливают 5 мл 5%-ной уксус­ ной кислоты и 0,8 г мела. Тщательно перемешивают и вновь фильтруют. Далее определение проводят так же, как и в мо­ локе.

Сыр. 20 г измельченного сыра переносят в фарфоровую ступку, вливают 50 мл теплой воды (40—45°), тщательно рас­ тирают и переливают в мерную колбу на 100 мл, доводят объ­ ем до метки водой и фильтруют. В 25 мл фильтрата проводят определение так же, как и в молоке.

Масло. Навеску масла 30 г растворяют в воде (45—50°), переносят в мерную колбу на 100 мл, доводят объем до метки, фильтруют. Отбирают 25 мл фильтрата, в котором определя­ ют содержание витамина, как и в молоке.

126

П р и б о р ы и р е а кт ив ы. Микробюретки на 1,2 и 10 мл; пипетки мерные на 5, 10 и 25 мл; уксусная кислота 5,16 и 80%; марганцовокислый калий 0,01 н.; насыщенный раствор щаве­ левокислого натрия; соляная кислота 2%; 2—6 дихлорфенолиндофенол 0,001 н.

Приготовление некоторых реактивов. 1) 2—6 дихлорфенол 0,001 н.: ПО—120 мг индикатора растворяют в 300 мл горячей воды. Раствор периодически перемешивают. Через 2—3 часа объем доводят до 500 мл водой и фильтруют. Раствор годен в течение 7 дней при хранении в холодном и темном месте; 2) щавелевая кислота 0,01 н. дважды перекристаллизованная и высушенная на воздухе. Навеску 0,1576 г щавелевой кислоты растворяют в 250 мл бидистиллята; 3) соль Мора 0,01 н. Навес­ ку 3,92 г соли Мора растворяют в 0,02 н. раствора серной кис­ лоты. Раствор хранят в склянке из темного стекла; 4) марган­ цовокислый калий 0,01 н. Навеску 0,316 г КМпСД растворяют в 1 л воды; 5) свинец уксуснокислый 5%-ный. Раствор уксус­ нокислого свинца готовят на 5%1-ной уксусной кислоте; 6) сер­ ная кислота 0,02 н .-0,56 мл серной кислоты плотностью 1,84 разводят водой до 1 л.

Тиамин (витамин В[), рибофлавин (витамин В2)

В основе метода определения тиамина (Bi) лежит его спо­ собность при окислении железосинеродистым калием в щелоч­ ной среде переходить в тиохром, дающий в ультрафиолетовом свете голубую флуоресценцию.

Водный раствор рибофлавина (В2) имеет желто-зеленую флуоресценцию, которая в естественных продуктах присуща и другим веществам. Для устранения флуоресценции сопутству­ ющих веществ производят их «гашение» гидросульфитом нат­ рия и двууглекислым натрием.

Тиамин и рибофлавин определяют с помощью флуорометра типа ЭФ-ЗМ. Лабораторный электронный флуорометр предна­ значен для количественного определения витаминов Bi и В2 фолиевой кислоты и других флуоресцирующих веществ в рас­ творах. Принцип действия прибора заключается в следующем. Свет от кварцевой лампы, проходя через оптику, попадает на пробирку с испытуемым раствором. Раствор, облученный ко­ ротковолновой частью спектра, начинает светиться. Свет флу­ оресценции через кварцевую оптику и вторичные светофильт­ ры попадает на фотоэлементы. Фотоэлементы преобразовыва­ ют световую энергию в электрическую и подают ее на элек­ тронный усилитель, в анодной цепи которого расположен мик-

127

роамперметр. Показания микроамперметра прямо пропорци­ ональны концентрации определяемых витаминов.

Гидролиз молока для определения витаминов Bt и В2. В мерную колбу на 100 мл вносят 80 мл молока. Концентриро­ ванной H2S04 (около 0,2 мл) доводят его pH до 4—4,5. Моло­ ко гидролизуют в этой же колбе с обратным холодильником на кипящей бане в течение 45 мин. Гидролизат охлаждают до 30—40°, вносят 300 мг ферментативного препарата «ОризинПК» или «Авамарин-ПП-К» (из расчета 30 мг на 1 г сухого ве­ щества молока), который растворяют в 2,5 М растворе уксус­ нокислого натрия, чем доводят pH до 5—5,5. Затем в колбу вносят 1 мл толуола и ставят в термостат на 12—15 час. при температуре 37—40° (ферментативный гидролиз). По истече­ нии времени гидролизат доводят до 100 мл водой и фильтру­ ют. Фильтрат используют для определения витаминов.

15% NaOH); во вторую с холостой пробой (для проверки чи­ стоты реактивов) — 3 мл 15% NaOH. В обе воронки из бюретки добавляют по 10 мл изобутилового спирта, встряхивают в те-

128

чение 2 мин. на встряхивателе и оставляют на час в покое. От­ стоявшийся нижний слой сливают, верхний переносят в про­ бирку для измерения флуоресценции.

Одновременно определяют флуоресценцию стандартного раствора тиохрома. Для чего в воронку, предназначенную для окисления (вместо элюата), вносят 1 мл рабочего раствора тиа-

После измерения флуоресценции количество тиаминхлори­ да (К) — мкг/кг — рассчитывают по формуле

(х—у) л- г - с

Д — 0 * 1— ! h ) - а - в - д ’

где х — показание прибора для испытуемого окисленного об­ разца (27); у — показание прибора для исследуемого холосто­ го образца (4); — показание прибора для окисленного стан­ дартного раствора (15); y t — показание прибора для холосто­

элюированного тиаминхлорида (25 мл), д — количество рас­ твора, взятого для определения (5 мл).

(27—4) • 1 • 100-25

Приме р . К = ^ jg_3 -80-25( 5'= 0,493 мкг в 1 г молока,

или 493 мкг в 1 кг.

Содержание тиамина в 1 кг молока колеблется от 200 до

500 мкг.

Для определения витамина Вг (рибофлавина) в пробирку переносят от 2 до 4 мл фильтрата, полученного после гидро­ лиза, доводят объем до 10 мл водой, перемешивают и на прибо­ ре измеряют флуоресценцию исследуемого раствора. Затем определяют флуоресценцию стандартного раствора, в 1 мл ко­ торого содержится 0,4 мкг рибофлавина. Для внесения поправ­ ки на посторонние флуоресцирующие вещества, флуоресцен­ цию рибофлавина в испытуемых растворах после ее измерения «гасят» прибавлением гидросульфита натрия и соды соответ-