Файл: Методики постановки опытов и исследований по молочному хозяйству [сборник]..pdf

Если сумму отсчетов экстинкции принять за 100, то содержание отдельных фракций выразится:

мин составит 28,35%. 13-лактоглобулин — 48,19 и, наконец, сывороточный альбумин — 6,17%.

Рис. 12. Кривая электрофореграммы сывороточных белков

Соотношение фракций в сывороточных белках (в %) со­ ставляет:

Построение кривой по фракциям белка. Фореграмму де­ лят на участки шириной 0,5 см и нумеруют влево от старто­ вой черты со знаком минус, вправо — со знаком плюс. Берут полоску шириной 0,5 см из свободного участка фореграммы, которая является холостой для всех исследуемых фракций.,

85

несколько секунд, чтобы раствор переместился на полоску бу­ маги.

На основании данных отсчета экстинкций устанавливают соотношение отдельных фракций в казеине.

Пр и ме р . При колориметрировании участков форепраммы получены следующие отсчеты экстинкций: для а-казеина—

0,500; й-казеина — 0,830; у-казеина — 0,880 итого— 1,410.

= 35,6%; (3-казеин — 59,0; у-казеин — 5,4%.

По данным исследований, в казеине содержится (в %):

ка, фотоэлектроколориметр ФЭК-М, сушильный шкаф, водо­ струйный насос, эмалированная ванночка, картон Зейца, хро­ матографическая бумага (марки М), целлофан, пипетки на 1, 10 и 50 мл, микропипетка на 0,2 мл.

Установка для электрофореза белков молока (рис. 13). Го­ ризонтальная камера из органического стекла (высота 10,5 см, ширина 32, длина 37 см) должна иметь: стеклянные плечики для подвешивания бумаги, кюветы для вероналового буфера, кюветы для электродов, электроды.

~(Z7- 2B>

□

Рис. 13. Схема установки для электрофореза белков молока:

1 — стабилизатор напряжения; 2 — кенотрон­ ный выпрямитель; 3 — миллиамперметр; 4 — реостат; 5 — камера

87

Кенотронный выпрямитель — источник постоянного тока, изготовленный заводом «Электродело». Он дает выпрямлен­ ное напряжение до 320 в. Предельно допустимая нагрузка 125 миллиампер. Один кенотронный выпрямитель может быть использован для питания нескольких камер.

Вольтметр постоянного тока( класса 0,5) для контроля на­ пряжения на электродах; миллиамперметр для измерения си­ лы тока включается в цепь последовательно с камерой для электрофореза.

Ре а к т и в ы . 2%-ный раствор уксусной кислоты, 1 н. рас­ твор аммиака, 10%-ный хлористый барий, универсальный ин­ дикатор, 0,01 н. раствор едкого натрия, сульфат аммония (кристаллический), бромфенолблау, вероналовый буфер, медииал, сулема (кристаллическая).

П р и г о т о в л е н и е р е а к т и в о в . Бромфенолблау (кра­ ситель). В 1 л 2%-ного раствора уксусной кислоты при слабом напревании растворяют 1 г бромфенолблау и 10 г хлористой ртути (сулемы).

Вероналовый буфер (pH — 8,6). В 1 л воды при нагревании растворяют 20,6 г мединала и 1,84 г веронала.

При электрофорезе казеина вероналовый буфер должен содержать 40% мочевины. В 1 л воды при нагревании раство­ ряют вначале 20,6 г мединала, а затем— 1,84 г веронала. После этого к 600 мл полученного раствора добавляют при нагревании 400 г мочевины. Такой раствор применяют для сма­ чивания хроматографических полосок бумаги, заполнения кю­ вет электрофоретической камеры и кювет с электродами.

Размер и средний вес частиц казеина. Измеряется световой поток при прохождении через обезжиренное молоко, разбав­ ленное 0,01 н. раствором СаСЬ. По световому потоку опреде­ ляют коэффициент светорассеяния, по которому рассчитывают вес частиц казеина, а по весу — и их размер.

С помощью пипетки 5 мл обезжиренного молока вливают в мерную колбу на 250 мл, которая предварительно на 2/3 за­ полнена 0,01 н. раствором хлористого кальция. После разме­ шивания содержимого колбы объем ее доводят до метки рас­ твором хлористого кальция и вновь перемешивают. Сразу же одну кювету колориметра заполняют раствором из колбы, а другую — 0,01 н. раствором хлористого кальция и начинают колориметрирование на ФЭК-М, используя зеленый свето­ фильтр. Еще до колориметрирования нулевое положение при­ бора должно быть установлено путем постановки двух кювет с 0,01 н. раствором хлористого кальция.

88

Для устранения ошибок, связанных с наличием следов жи­ ра, проводят параллельный опыт, исследуя образец обрата, разбавленного 0,05 н. раствором соляной кислоты в том же соотношении, что и при использовании раствора хлористого кальция. Полученную величину оптической плотности с соля­ ной кислотой вычитают из показателя оптической плотности, определенной с раствором хлористого кальция.

Рассчитывают коэффициент светорассеяния экстинкции по следующей формуле:

D

I

где Т — коэффициент светорассеяния;

D — оптическая плотность смеси молока с 0,01 н. раство­

т

По показателю Г определяют В = ^ — величину, выражаю­

щую вес частиц казеина без поправки на возможную коагуля­ цию частиц в период определения. В формуле Я — величина-,

89

Вi— средний вес частиц казеина в млн. ед. молекулярного веса; 1,342 и 10~8 — постоянные величины.

Пр и ме р . Отсчет при колориметрировании для смеси мо­ лока с соляной кислотой был 0,10, а для смеси с хлористым кальцием —■0,44 при длине кюветы 1 см. Количество казеина в молоке 3,28% при 0,0328 г на 1 г молока. В смеси молока с хлористым кальцием при разведении в 50 раз содержание ка­ зеина будет

Оптическая плотность разбавленного молока после введе­ ния поправки: D = 0,44—0,10 = 0,34.

Коэффициент светорассеяния 7 = ^ ^ =0,34;

или равняется 112 млн. ед. молекулярного веса.

Пользуясь графиком, находим средний вес частиц казеина с поправкой на коагуляцию Ви равный 119 млн.

90