Файл: Вопросы экспериментальной и клинической терапии и профилактики промышленных интоксикаций сборник научных трудов..pdf

Т а б л и ц а 2

Влияние гидрохинона на выживаемость белых мышей, отравленных

Видно, что в пробах, содержащих наряду с бихроматом калия гидрохинон, интенсивность тканевого дыхания выше к

Влияние различных доз гидрохинона на интен­ сивность дыхания ткани печени крыс в присутст­ вии бихромата калия.

117

пропорционально увеличению дозы гидрохинона восстанавли­

заменитель витамина К — викасол, представляющий собой также производное хинона (бисульфит метилнафтохинон). В

.литературе имеются сведения о положительном действии викасола на дыхание тканей при различных патологических сос­ тояниях (В. И. Глобин, Г. А. Узбеков, 1968).

Викасол вводили в виде 1%-ного водного раствора белым мышам в дозе 10 мг/кг внутрибрюшинно, одновременно со смертельными дозами подкожно введенного бихромата калия и хлорного хрома. Викасол в этой дозе несколько снижал смертность мышей, отравленных бихроматом калия, и не ока­ зал влияния в случае хлорного хрома. Введение же викасола в той же дозе в течение 3-х дней до введения хрома усугубило токсический эффект бихромата калия, по сравнению с одно­ кратным его введением, не оказав какого-либо положительно­ го воздействия на мышей, отравленных хлорным хромом.

Непосредственно влияние викасола на дыхание кашицы печени крыс в присутствии солей хрома характеризовалось некоторой активацией тканевого дыхания при дозе 1 и 10 мкг (54% и 51,2% соответственно по сравнению с 38,7 и 45,4% от уровня контроля при действии одного бихромата). Для обез­ вреживания токсического действия хлорного хрома наиболее благоприятным оказалось сочетание викасола в количестве 100 мкг и глутамата в дозе 2 мг: дыхание печени восстанав­ ливалось с 58% до 77,5% от контрольного уровня.

Таким образом, опыты с гидрохиноном подтвердили наше предположение о преимущественном влиянии хрома на про­ цесс передачи электронов в дыхательной цепи. Гидрохинон, как полагают, создает окольный путь переноса электронов и, тем самым, восстанавливает нарушенную систему передачи. Однако ввиду своей высокой токсичности гидрохинон может рассматриваться лишь как прототип аналогичных фармаколо­ гических средств.

Попытка использования значительно менее токсичного

•антигипоксического агента из ряда хинонов — викасола—да­ ла в целом отрицательные результаты Однако представляет­ ся необходимым продолжить поиск антнгипоксических средств из ряда хинонов с целью профилактического и лечебного воз­ действия при интоксикациях, вызванных соединениями трех- и шестивалентного хрома.

118

ЦИТОХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ГЛИКОГЕНА И СУЛЬФГИДРИЛЬНЫХ ГРУПП В ЛЕЙКОЦИТАХ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ПРИ ВВЕДЕНИИ БИХРОМАТА НАТРИЯ И В КОМБИНАЦИИ ЕГО

С УНИТИОЛОМ

С■А. Шахназарова, Н. В. Тюшнякова

(Совместно с кафедрой гистологии Дагестанского медицинского института)

Для профилактики и патогенетической терапии професси­ ональных отравлений важно выяснить наиболее ранние вну­ триклеточные биохимические сдвиги, чтобы целенаправленно воздействовать на нарушенные звенья обменных процессов.

Известно, что самые первоначальные изменения при инток­ сикациях проявляются со стороны крови (А. М. Рашевская,

Л. А. Зорина, 1968).

По литературным данным (Р. В. Бессарабова, 1955; В. А.

Вахрушева, I960; В. Е. Куракина, 1964, 1965, 1966; Ф. Я- Бар-

штейн, А. Т. Жигунова, 1965), хром оказывает влияние на уг­ леводный обмен крови. Вместе с тем, установлено, что боль­ шая часть гликогена крови находится в форменных элемен­ тах и степень насыщения им лейкоцитов может считаться по­ казателем их функциональной полноценности (Д. Е. Альперн, Н. Н. Транквилитати, 1936; А. Д. Бернштейн с соавторами, 1949; О. М. Шерстнева, 1958 и др.).

Немалая роль в регуляции ферментов в клетке принадле­ жит изменению состояния сульфгидрильных групп, содержа­ щихся в белках. Они легко связываются тяжелыми металла­ ми, что ведет в инактивации фермента. А за последние годы появились сообщения о положительном эффекте введения уннтиола при хромовой интоксикации (Л. Н. Беляева и Л. В.

320

Клюшина, 1965; В. А. Блохин с соавт., 1969, и др.). Поэтому мы решили изучить цитохимическое содержание гликогена и сульфгидрильных групп в лейкоцитах периферической крови при введении различных доз бихромата натрия и лечении унитиолом.

Исследования проводились на молодых белых крысах (самцах) весом 180—220 г. Хроническую интоксикацию вы­ зывали путем ежедневной дачи бихромата с молоком в дозах 0,1—1—10 мг/кг веса животного в течение 6 месяцев. Затем крысам, получавшим препарат в токсической, дозе (10 мг/кг),, проводили курс антидотной терапии унитиолом путем подкож­ ных инъекций в дозе 10 мг/кг в течение 15 дней. С целью ост­ рого отравления животным одной группы вводили однократно; внутрибрюшинно безусловно смертельную дозу бихромата, натрия (50 мг/кг), а другой — вслед за воздействием препа­ рата вводили подкожно унитиол в дозе 10 мг/кг. Кровь изу­ чалась в динамике через 30 минут, 3, 6 часов, 1, 3, 7 суток в остром опыте и спустя 6 месяцев — в хроническом.

Для выявления гликогена мазки крови, приготовленные из крови хвостовых вен, фиксировали и обрабатывали по Шабадашу с ферментативным контролем амилазой. Сульфгидрильные группы выявляли по Барнетту и Зелигману с приме­ нением ДДД. Параллельно проводили окраску по Романов- скому-Гимза. Для более объективного количественного учета гликогена и сульфгидрильных групп в лейкоцитах подсчиты­ валось в разных полях зрения каждого мазка 100 клеток. По содержанию исследуемого ингредиента лейкоциты делились на 5 групп: отсутствие гликогена соответствовало —• (0), не­ значительное содержание его — (+ ), среднее количество' — (+ + ), большое количество — (+ + + ), резко выраженная — (-(- + + -|-). Из полученных данных выводили средний гисто­ химический коэффициент (СГК) по формуле, предложенной Астальди и Берга

1ха+2хб + Зхв + 4хг Ю0

где буквы означают процент клеток определенной интенсивно­ сти, а цифры числителя — степень интенсивности окрашива­ ния.

Результаты наших исследований показали, что у контроль­ ных крыс в нейтрофилах содержание гликогена неодинаковое. Встречались клетки с очень большим и значительным содер-

121

жапнем гликогена в виде гранул и глыбок фиолетового цвета, равномерно заполняющих цитоплазму, пли локализованных, преимущественно, эксцентрично. В клетках с умеренным и ма­ лым. содержанием полисахарида цитоплазма окрашивалась равномерно диффузно в розовый пли бледно-розовый цвет. Количественное содержание гликогена в отдельных клетках характеризовалось такими данными: (0)—5, (+ )—8, ( + + )—

ствовала рзличная интенсивность окраски — от сине-голубо­ го при большом накоплении до бледно-красноватого при не­ значительном их содержании. Количественное содержание их выражалось в следующих величинах: (0)—, ( + )—11, (+ + ) —30, (+ + + )—39, (+ + + + )—20, СГК=2,68.

При изучении лейкоцитов белых крыс, получавших бихро­ мат натрия в малых дозах (0,1 и 1 мг) в течение 6 месяцев, было установлено некоторое увеличение уровня гликогена. Причем более заметное повышение его наблюдалось при дозе препарата 1 мг/кг. При этом в периферической крови преоб­ ладали лейкоциты с тремя крестами, меньший процент состав­ ляли клетки с двумя крестами, а клетки с одним и четырьмя крестами были единичными для гликогена, СП\ = 2,63—2,95.

Содержание сульфгндрильных групп при этих дозах не подвергалось особенно выраженным изменениям. СП\=2,53— 2,60.

Доза бихромата натрия 10 мг/кг вызывала достоверное снижение гликогена в 4-х случаях из 5 (СГ1\=1,94—2,17); только в одном случае наблюдалось повышение содержания полисахарида выше контрольных цифр (СГК—2,8).

При окраске на сульфигидрильные группы во всех случаях имело место снижение интенсивности реакции в цитоплазме нейтрофилов; СГК=2,18—2,24. При этом отсутствовали клет­ ки с большим содержанием активных групп и преобладали с двумя крестами.

Морфологически в лейкоцитах установлены дегенератив­ ные изменения. Чаще встречались лизирующиеся клетки и ней­ трофилы с неправильными очертаниями, нечеткими граница­ ми и вакуолизированной цитоплазмой; в них увеличивалось количество сегментов ядер до 6—8 и более, разрушались межсегментарные мостики. При цитохимическом определении

122

гликогена в нейтрофилах периферической крови крыс, полу­ чавших бихромат в токсических дозах (10 мг/кг) и курс ле­ чения унитиолом, вычисление СГК показало приближение уровня полисахарида к исходным величинам, СГК составлял 2,37—2,50. Содержание сульфгидрильных групп оставалось на низком уровне. СГК=2,01—2,15. У этой группы животных почти не встречались клетки с очень большим содержанием (+ + + + ) ни гликогена, ни сульфгидрильных групп; прева­ лировали лейкоциты с двумя и тремя крестами.

Таким образом, при изучении распределения и содержа­ ния гликогена и сульфгидрильных групп в лейкоцитах пери­ ферической крови в хроническом опыте нами обнаружены цитотопохимическне изменения интенсивности окрашивания в зависимости от дозы введенного бихромата натрия. По мере увеличения дозы препарата отмечено уменьшение гликогена и сульфигидрильных групп в цитоплазме клеток. В отдельных случаях повышение содержания гликогена в нейтрофилах следует объяснить сопутствующим воспалительным процес­ сом в легких — интерстициальной пневмонией. С. Н. Кире­ ева (1963) находила увеличение в лейкоцитах при пневмо­ ниях. Вместе с тем, сохранение гликогена в нейтрофилах при введении унитиола можно расценить как результат связы­ вания хрома унитиолом и предохранения клеток крови от ток­ сического действия.

Результаты острых опытов показали, что однократное вну-

лишь под оболочкой клеток в виде мелких гранул или слабо­ розового окрашивания ( + ), а второй — в перинуклеарной зоне и в яппах. Совершенно отсутствовали лейкоциты с 3 (+ ) и 4( + ). СГК составлял для гликогена 1,0—1,25 и для сульфгндрильных групп — 1,14—1,35. В дальнейшем, через 3, 6 ча­ сов и одни сутки отмечалось еще более выраженное снижение гликогена; выявлялись клетки лишь с малым его содержани­ ем ( + ). Содержание сульфгидрильных групп несколько воз­ растало по сравнению с предыдущим сроком. Через трое су­ ток количество изучаемых ингредиентов было также незначи­ тельным.

В случаях комбинации введения летальной дозы бихрома­ та с унитиолом через 30 минут, хотя и имело место снижение содержания гликогена и сульфгидрильных групп в нейтрофи­ лах, но оно не достигало такой степени, как у животных без

123