ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 03.02.2024
Просмотров: 374
Скачиваний: 0
СОДЕРЖАНИЕ
2. Начальный период развития микробиологии (А. Левенгук идр.).
3.Работы Л. Пастера и Р. Коха. Их значение в становлении и развитии микробиологии.
5.Морфология бактерий. Основные формы, постоянные и непостоянные структуры бактериальнойклетки.
Свойства протопластов и сферопластов:
10.Особенности строения риккетсий. Общие признаки с бактериями и вирусами, патогенныепредставители.
11.Особенности строения хламидий. Общие признаки с бактериями и вирусами, патогенныепредставители.
12.Морфология и структура микоплазм, патогенныепредставители.
13.Морфология простейших, их классификация. Патогенныепредставители.
14.Питание бактерий. Механизмы транспорта питательных веществ в бактериальнуюклетку.
16.Факторы роста. Ауксотрофы и прототрофы.
18.Методы изучения ферментативной активности бактерий и использование ее для идентификациибактерий.
19.Пигменты бактерий, классификация по растворимости в воде. Примеры, их значение.
Раздел 2. Основы генетики микроорганизмов.
Мутации у бактерий. Классификация по происхождению и характеру изменений в первичной структуреДНК.
В обмене генетической информацией трансорфмация играет незначительную роль.
1. адсорбция двуцепочечной ДНК на участках клеточной стенки компетентных клеток
Свойства трансдуцирующих фаговых частиц:
1.Частицы несут часть ДНК фага, то есть не являются функциональными вирусами
2. Подобно прочим дефектным вирусам, частицы не способны к репликации.
2. кодирующие – появление новой генетической информации и проявление новых свойств:
- продукцию факторов патогенности
- способность к синтезу антибиотических веществ
- расщеплене сложных органических веществ
- образование ферментов рестрикции и модификации
Группы плазмид и их характеристика:
R- плазмиды – кодируют устойчивость к лекарственным препаратам и к тяжелым металлам.
Плазмиды патогенности – контролируют вирулентные свойства многих видов, особенно энтеробактерий.
Раздел 3. Микрофлора организма человека, объектов внешней среды.
55.Микрофлора мочевыделительного тракта. Категории чистотывлагалища.
58. Эубиотики. Природа, механизм действия. Бактериоцины. Практическое использование эубиотиков.
63. Антибиотики. Способы получения.Классификация по происхождению,спектру действия.Примеры.
64. Антибиотики. Классификация по механизму действия. Примеры.
77. Источники и пути передачи инфекционныхболезней.
78. Динамика и периоды развития инфекционного заболевания. Исход инфекционного заболевания.
84.Биологический метод микробиологической диагностики, назначение и принцип метода.
антибиотиков, но чувствительны к эритромицину и ципрофлоксацину.
Эпидемиология.Зооантропоноз.Важнейший источник инфекции — сельскохозяйственные животные и
124.Возбудители болезни Лайма. Принципы и методы лабораторной диагностики.
Специфическая профилактика - такая же как для гепатита В (вакцины против гепатита В)
Для диагностики гепатита D применяют:
2) Обнаружение антител к -антигену.
Это осуществляется с помощью иммуноферментного и радиоиммунного метода
Требования
В первую очередь, бактерии нуждаются в азоте, углероде и водороде для построения собственных белков. Водород и кислород для клеток поставляет вода. Источником азота выступают многочисленные вещества, в основном, животного происхождения (мясо говяжье, рыба, мясо-костная мука, казеин), а также пептиды, пептоны. Можно использовать и заменители мяса – плаценту, кровяные сгустки, дрожжи. Следовательно, в состав сред должны быть введены источники питательных веществ и вода, а также ростовые факторы (витамины группы В, ферменты). Универсальным источником их служат экстракты из белков животного и растительного происхождения, белковые гидролизаты. Для микробов с более сложными пищевыми потребностями в состав сред включают нативные субстраты – кровь, сыворотку, асцитическую жидкость, яичный желток, кусочки печенки, почек, мозговой ткани и др.
Среды должны быть сбалансированными микроэлементным составом и содержать ионы железа, меди, марганца, цинка, кальция, натрия, калию, иметь в своем составе неорганические фосфаты.
Допускается применение веществ, которые устраняют действие ингибиторов роста и токсигенности микробов (отдельные аминокислоты, активированный уголь).
Среды должны иметь определенную вязкость, плотность, иметь определенную влажность (до 20 % воды), быть изотоническими, прозрачными и обязательно стерильными.
Плотность среды достигается добавлением агара. Он представляет собой полисахарид, получаемый из водорослей. Плавится при температуре 100°С, остывает при температуре 45-50°С.
Классификация
Простые:
Жидкие: ПВ (пептонная вода), МПБ (мясопептонный бульон);
Плотные: МПЖ (Мясо-пептонная желатин), МПА (мясопептонный агар)
Сложные:
Специальные: сахар. МПА, МПБ, сывороточный. МПА, кровяной МПА, асцитический МПА
Обогащения, накопления: селенитовый МПБ, среды Мюллера, Кауффмана, Китт-Тароцци
Элективные: Ру (так и читается ру), 1% щелочная ПВ (пептонная вода)
Диференциально-диагностические:
1) для определения сахаролитических свойств (среды Гисса , Эндо, Левина)
2) для определения протеолитических свойств (свернутая сыворотка, МПЖ, кусочки мышц, белка куриного яйца)
3) для определения пептолитических свойств (МПБ, ПВ)
4) для определения гемолитических свойств (кров.МПА)
5) для определения редуцирующих свойств (среды с разными красителями)
25. Основные питательные среды. Состав, назначение.
Назначение МПБ, МПА (мясопептонный бульон/агар): универсальная среда для многих видов патогенных и непатогенных бактерий.
МПБ Состав: мясной настой + 1% пептон + 0,5%NaCl, > кипячение 15 мин > установление pH 7,2-7,4 > фильтрация > стерилизация при 120°С 20 мин.
МПА Состав: 1л МПБ + 15-25гр нарезанного агар-агара > кипячение >pH 7,4-7,6 > фильтрация > стерилизация при 120°С 20 мин
26. Элективные питательные среды. Состав, назначение. Примеры.
Назначение:Предназначены для избирательного роста определённых микроорганизмов. Позволяют направленноотбирать из исследуемого материала определённые виды бактерий.
а) Среда Мюллера Назначение: для изучения чувствительности дрожжей и грибков к антимикотикам диско-диффузионным методом.
Состав:
Мел, стерилизованный сухим жаром или Кальция карбонат (CaCO ) сухой стерильный
Бульон Хоттингера, содержащий 120 - 130 мг% аминного азота
Раствор Люголя (калия йодид (KI),
йод кристаллический,
вода дистиллированная
Натрия тиосульфат, 50-процентный
Приготовление. В стерильные флаконы помещают по 4,5 г мела, стерилизуют сухим жаром, после чего в каждый флакон наливают 90 мл бульона Хоттингера. Стерилизуют 30 мин. при температуре 121 °С (рН 7,2 - 7,4). В каждый флакон добавляют 2 мл раствора Люголя и 10 мл раствора натрия тиосульфата с соблюдением правил асептики, хорошо смешивают и разливают по пробиркам. Дальнейшая стерилизация не требуется.
б) Селенитовая среда
Назначение. Эту среду используют для определения ферментации углеводов (глюкозы) в аэробных и анаэробных условиях.
Состав:
-
Натрия гидроселенит (NaHSeO ) без примеси теллура -
Пептон -
Натрия гидрофосфат безводный -
Натрия дигидрофосфат безводный -
Лактоза -
Вода дистиллированная
Приготовление. Среду готовят из двух основных растворов.
Раствор 1. Определяют пропорцию натрия гидрофосфата и натрия дигидрофосфата с используемым образцом пептона и натрия гидроселенита для установления pH 6,9 - 7,1. С этой целью регулируют соотношение фосфатов. Подтитровка нужна всегда при изменении серии любого из входящих в среду основных ингредиентов. После установления соотношения фосфатов к раствору добавляют пептон и лактозу. Разливают во флаконы по 50 мл и стерилизуют текучим паром по 30 мин. два дня. Количество фосфатов в рецепте среды дано в расчете на безводные препараты. При отсутствии таковых заранее заготовленные навески "выветривают" 15 - 16 сут. в термостате.
Раствор 2. 10-процентный раствор натрия гидроселенита готовят на стерильной дистиллированной воде перед употреблением. Перед началом работы во флакон с 50 мл раствора 1 добавляют 2 мл раствора 2, разливают по 5 - 7 мл в стерильные пробирки с соблюдением правил асептики и закрывают плотно пробками. Дальнейшая стерилизация не требуется.
Основной раствор (первый) для среды можно хранить в холодильнике 1 - 2 мес. При приготовлении среды следует использовать высококачественный пептон.
в) Среда Раппопорта
Состав: желчный бульон, глюкоза, индикатор Андреде (сальмонелла)
27. Дифференциально-диагностические среды. Состав, назначение. Примеры
Назначение: Применяют для изучения биохимических свойств. Эти среды позволяют отличать один вид бактерий от других по характеру их ферментативной активности или культуральным проявлениям.
Среда Эндо —для выделения Escherichiacoli. Обладает слабыми селективными свойствами, компоненты среды подавляют рост грамположительных бактерий.
Назначение: Среда предназначена для выделения энтеробактерий в санитарной бактериологии и обнаружения эшерихий фекального происхождения, а также для выделения патогенных эшерихий.
Состав: Сухой питательный агар, экстракт кормовых дрожжей, лактоза, фуксин основной, натрий фосфорнокислый двузамещенный, натрий сульфит безводный, натрий углекислый, агар.
Свойства: Микроорганизмы, не сбраживающие лактозу, образуют на среде бесцветные прозрачные колонии, лактозопозитивные микробы – колонии красного цвета.
Среда Левина Назначение: Среда предназначена для выделения из инфицированного материала шигелл, сальмонелл, эшерихий и других энтеробактерий.
Состав: Панкреатический гидролизат кильки, лактоза, сахароза, натрий фосфорнокислый двузамещенный, эозин, метиленовый синий, натрий хлористый, агар.
Свойства: Лактозонегативные микроорганизмы растут на среде в виде прозрачных бесцветных колоний, лактозопозитивные окрашены в фиолетовый цвет.
Среда Плоскирева Назначение: Среда предназначена для выделения шигелл и сальмонелл из инфицированного материала.
Состав: Панкреатический гидролизат кильки, натриевые соли желчных кислот, лактоза, натрий фосфорнокислый двузамещенный, натрий лимоннокислый, натрия тиосульфат, йод металлический, натрий углекислый, нейтральный красный, бриллиантовый зеленый, агар. Свойства: Микроорганизмы, не сбраживающие лактозу (шигеллы, сальмонеллы), образуют на среде бесцветные прозрачные колонии, лактозопозитивные микробы (кишечная палочка) – колонии малинового цвета.
28. Методы выделения чистых культур аэробов (механические и биологические). Колония, чистая культура
Чистой культурой называется популяция бактерий одного вида или одной разновидности
, выращенная на питательной среде. Многие виды бактерий подразделяют по одному признаку на биологические варианты — биовары. Биовары, различающиеся по биохимическим свойствам, называют хемоварами, по антигенным свойствам — сероварами, по чувствительности к фагу — фаговарами.
Штамм - культура микроорганизмов одного и того же вида, или биовара, выделенные из различных источников или в разное время из одного и того же источника, называют штаммами.
Колония представляет собой видимое изолированное скопление особей одного вида микроорганизмов, образующееся в результате размножения одной бактериальной клетки на плотной питательной среде
Механические
Рассев шпателем по Дригальскому
Берут 3 чашки Петри с питательной средой. На первую чашку петлей или пипеткой наносят каплю исследуемого материала и растирают шпателем по всей поверхности агара. Затем шпатель переносят во вторую чашку и втирают оставшуюся на шпателе культуру в поверхность питательной среды. Далее шпатель переносят в третью чашку Петри и аналогичным образом производят посев. На первой чашке вырастает максимальное количество колоний (сплошной pocт) на третьей - минимальное в виде отдельно расположенных колоний.
Метод истощающего штриха
В целях экономии сред и посуды можно пользоваться одной чашкой, разделив её на 4 сектора и последовательно засеяв штрихом. Для этого материал берут петлёй и проводят ею на расстоянии 5 мм друг от друга ряд параллельных штрихов сначала по поверхности первого сектора, а затем последовательно оставшимися на петле клетками засевают все другие секторы. При каждом последующем штрихе происходит уменьшение количества засеваемых клеток. После рассева чашки переворачивают вверх дном, чтобы конденсационная вода, образовавшаяся на крышке чашки Петри, не мешала получить изолированные колонии. Чашки выдерживают в термостате 1-7 суток, так как скорость роста различных микроорганизмов неодинакова.
Таким образом, в первых секторах получается сплошной рост, а вдоль последующих штрихов вырастают обособленные колонии, представляющие собой потомство одной клетки.
Метод прогревания
Позволяет отделить спорообразующие бациллы от неспоровых форм. Прогревают исследуемый материал на водяной бане при 80°С 10-15 минут. При этом погибают вегетативные формы, а споры сохраняются и при посеве на соответствующую питательную среду прорастают, образуя колонии только спорообразующих бактерий.
Метод обогащения
Исследуемый материал засевают на элективные питательные среды, способствующие росту определенного вида микроорганизмов.
Метод заражения лабораторных животных
Этот метод используется для выделения чистой культуры из патологического материала, загрязненного посторонней микрофлорой, или в том случае, когда в исследуемом материале очень мало патогенных микроорганизмов.
Для заражения подбирают наиболее восприимчивые к предполагаемому возбудителю инфекции виды животных. Например, для выделения пневмококка из мокроты заражают белую мышь. Это животное весьма чувствительно к данному микробу и резистентно к другим микробам, находящихся в мокроте. В связи с этим пневмококк быстро размножается в организме мыши, а другие микробы погибают. Через 18-20 часов после заражения мышь забивают и кровь, взятую из сердца, засевают на питательную среду. Так как в крови содержится один пневмококк, то на питательной среде вырастает чистая культура.
Биологические
Метод Шукевича
Применяется для выделения подвижных микроорганизмов. Исследуемый материал засевают в конденсационную воду скошенного агара, находящегося в пробирке. При размножении подвижные формы микробов из конденсационной воды распространяются по агару, как бы "вползают" на его поверхность. Из верхней части роста производят высев в конденсационную воду свежей питательной среды. Производя таким образом несколько пересевов, в конце концов получают чистую культуру подвижной бактерии.
Метод ингибирования
Основан на различном действии некоторых химических веществ и антибиотиков на микроорганизмы. Определённые вещества угнетают рост одних микроорганизмов и не оказывают влияния на другие. Например, небольшие концентрации пенициллина задерживают рост грамположительных микроорганизмов и не влияют на грамотрицательные.
29. Метод Дригальского, назначение, этапы: I, ΙΙ, III, IV
Метод Дригальского основан на механическом разобщение на поверхности плотной питательной среды микробов всех видов,
входящих в состав исследуемого материала.
I этап.
1. Определение микробного состава исследуемого материала (приготовление мазка, окраска по Граму).
2. Посев в чашку Петри: одну каплю материала наносят на поверхность МПА и растирают шпателем. Не обжигая шпателя и
не набирая нового материала, засевают вторую и третью чашки.
3. Засеянные чашки переворачивают вверх дном и инкубируют в термостате 18-20 часов при температуре 37° С.